實(shí)驗(yàn)例2供試品溶液的制備方法的確定
[0028]試驗(yàn)的研宄過程中，采用水、甲醇水溶液(甲醇濃度分別為30%、50%、70%、100% )、分別對(duì)冠心丹參膠囊進(jìn)行了提取。使用不同溶劑提取下冠心丹參膠囊的指紋圖譜如附圖4所示，。其中自上而下所對(duì)應(yīng)的溶劑依次為水提，甲醇提，70%甲醇提，50%甲醇提，30%甲醇提。從色譜圖上可以看出，不同溶劑提取溶液的液相圖譜差異較大，其中水提取物中提取的物質(zhì)很少；70 %甲醇提取物中提取出的成分較多，而且各色譜峰的響應(yīng)值適中，因而選用70%甲醇作提取溶劑。
[0029]在試驗(yàn)階段，進(jìn)行了提取方法的考察，分別進(jìn)行了超聲提取30min、超聲提取lh、超聲提取1.5h、超聲提取2h ;回流提取30min、回流提取lh、回流提取1.5h、回流提取2h作提取提取冠心丹參膠囊。使用不同提取方式及提取時(shí)間提取下冠心丹參膠囊的指紋圖譜如附圖5所示。其中自上而下所對(duì)應(yīng)的提取方式和提取時(shí)間分別為:回流2h，超聲2h，回流
1.5h，超聲1.5h，回流Ih,超聲lh，超聲30min，回流30min。結(jié)果表明，超聲提取30min的提取效果較好，色譜圖信息量最多，成分含量略高。所以選用超聲提取30min供試品溶液的制備方法。
[0030]據(jù)此，將供試品溶液的制備方法確定為:取冠心丹參膠囊約lg，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，并精密加入70 %甲醇25ml，密塞，稱定重量，超聲提取30min，放冷，補(bǔ)重，搖勻，濾過，過0.45 μ m的微孔濾膜，作為供試品溶液。
[0031]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，其顯著優(yōu)點(diǎn)是:
[0032](I)本發(fā)明特征峰的選擇更注重藥材指標(biāo)性化學(xué)成分與制劑藥效學(xué)研宄結(jié)果的關(guān)聯(lián)性和指紋圖譜的整體面貌特征，避免了因只測(cè)定其中一個(gè)或兩個(gè)化學(xué)成分而判斷制劑整體質(zhì)量的片面性，減少人為處理產(chǎn)品質(zhì)量達(dá)標(biāo)的可能性，為完整、準(zhǔn)確評(píng)價(jià)制劑的質(zhì)量提供了新的控制標(biāo)準(zhǔn)，從而能更好的控制制劑的質(zhì)量；
[0033](2)本發(fā)明基于指紋圖譜用多指標(biāo)成分(包括8個(gè)已知成分)控制產(chǎn)品質(zhì)量，保證了產(chǎn)品質(zhì)量的長(zhǎng)期穩(wěn)定性，療效的安全性和可靠性；
[0034](3)本發(fā)明具有測(cè)定方法操作簡(jiǎn)便、精密度高、穩(wěn)定性好、重現(xiàn)性好、易于掌握的特占.V，
[0035](4)本發(fā)明提供了一種冠心丹參膠囊的檢測(cè)方法，在相同測(cè)定條件下所獲得的冠心丹參膠囊成品的特征指紋圖譜的特征指紋圖譜重合性好，測(cè)定重復(fù)性好，達(dá)到更科學(xué)的控制制劑的目的。
【附圖說明】
[0036]圖1本發(fā)明供試品冠心丹參膠囊lg_20g的在紫外吸收270nm處的標(biāo)準(zhǔn)特征指紋圖譜。
[0037]圖中從左至右分別標(biāo)出了其共有特征峰I至11號(hào)，其中圖1的圖示中峰I為丹參素鈉，峰2為原兒茶醛，峰3為迷迭香酸，峰4，峰5為丹酚酸B，峰6，峰7，峰8為二氫丹參酮，峰9為隱丹參酮，峰10為丹參酮I，峰11為丹參酮IIA。
[0038]圖2本發(fā)明供試品冠心丹參膠囊三維紫外吸收?qǐng)D。
[0039]圖3本發(fā)明供試品冠心丹參膠囊紫外吸收等高線圖
[0040]圖4使用不同溶劑提取下冠心丹參膠囊在270nm下的指紋圖譜，其中自上而下所對(duì)應(yīng)的溶劑依次為水提，甲醇提，70%甲醇提，50%甲醇提，30%甲醇提。
[0041]圖5使用不同提取方式及提取時(shí)間提取下冠心丹參膠囊在270nm下的指紋圖譜，其中自上而下所對(duì)應(yīng)的提取方式和提取時(shí)間分別為:回流2h，超聲2h，回流1.5h，超聲
1.5h，回流Ih,超聲lh，超聲30min，回流30min。
[0042]圖6為冠心丹參膠囊溶液在270nm處的重復(fù)性試驗(yàn)指紋圖譜。
[0043]圖7為冠心丹參膠囊溶液在270nm處的穩(wěn)定性試驗(yàn)指紋圖譜。
【具體實(shí)施方式】
[0044]以下通過實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明，但本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該知曉，所述實(shí)施例并不以任何方式限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0045]實(shí)施例1 一種冠心丹參膠囊指紋圖譜的建立方法及其指紋圖譜
[0046]一種冠心丹參膠囊指紋圖譜的建立方法，其特征是采用HPLC-UV法，包括如下步驟:
[0047](I)供試品溶液的制備:精密稱取冠心丹參膠囊內(nèi)容物lg，加70%甲醇25ml，超聲20min溶解后，冷卻后取少量上清液過0.45 μ m微孔濾膜濾過，續(xù)濾液作為供試品溶液；
[0048](2)對(duì)照品溶液的制備:精密稱取丹參素鈉、迷迭香酸、丹酚酸B、原兒茶醛、二氫丹參酮、隱丹參酮、丹參酮1、丹參酮IIA適量，分別用50%甲醇、50%甲醇、70%甲醇、甲醇、甲醇、甲醇、甲醇、甲醇溶解成濃度分別為200 μ g/ml的溶液，再吸取對(duì)照品溶液各適量，用甲醇稀釋成濃度分別為50 μ g/ml的對(duì)照品溶液；
[0049](3)色譜條件:十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱，250X4.6mm ;流動(dòng)相為0.1%磷酸水溶液_乙腈；采用用梯度洗脫方式Omin — 40min — 42min — 60min — 65min — 95min，甲醇 10%— 40%— 60%— 70%— 95%— 95% ;流速(λ 8ml/min ;柱溫 30°C。；檢測(cè)波長(zhǎng):270nm ;進(jìn)樣量為10 μ I ；；
[0050](4)供試品溶液的測(cè)定:精密吸取供試品溶液注入液相色譜儀，以高效液相色譜法測(cè)定，得到冠心丹參膠囊的HPLC-UV圖譜；
[0051](5)HPLC標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制作按照上述方法對(duì)10批供試品溶液和對(duì)照品溶液，注入液相色譜儀，以高效液相色譜法測(cè)定，記錄色譜圖，得到10批冠心丹參膠囊的圖譜；并進(jìn)行分析比較，得到由測(cè)定所得的指紋圖譜中有11個(gè)共有峰，其中，以5號(hào)峰即丹酚酸B為參照物峰，分別為:
[0052]峰I丹參素鈉:相對(duì)保留時(shí)間0.205，相對(duì)峰面積0.105 ；
[0053]峰2原兒茶醛:相對(duì)保留時(shí)間0.371，相對(duì)峰面積0.098 ；
[0054]峰3迷迭香酸:相對(duì)保留時(shí)間0.893，相對(duì)峰面積0.087 ；
[0055]峰4:相對(duì)保留時(shí)間0.922，相對(duì)峰面積0.087 ；
[0056]峰5丹酚酸B:相對(duì)保留時(shí)間1.000，相對(duì)峰面積1.000 ；
[0057]峰6:相對(duì)保留時(shí)間1.068，相對(duì)峰面積0.168 ；
[0058]峰7:相對(duì)保留時(shí)間1.705，相對(duì)峰面積0.016 ;
[0059]峰8 二氫丹參酮:相對(duì)保留時(shí)間1.877，相對(duì)峰面積0.047 ；
[0060]峰9隱丹參酮:相對(duì)保留時(shí)間2.093，相對(duì)峰面積0.238 ；
[0061]峰10丹參酮1:相對(duì)保留時(shí)間2.135，相對(duì)峰面積0.145 ；
[0062]峰11丹參酮IIA:相對(duì)保留時(shí)間2.410，相對(duì)峰面積0.602 ；
[0063]這些共有特征峰構(gòu)成了冠心丹參膠囊指紋特征，圖譜經(jīng)《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)》軟件計(jì)算，相似度大于0.9 ;是冠心丹參膠囊標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。
[0064]實(shí)施例2 —種冠心丹參膠囊指紋圖譜的建立方法及其指紋圖譜
[0065]一種冠心丹參膠囊指紋圖譜的建立方法，其特征是采用HPLC-UV法，包括如下步驟:
[0066](I)供試品溶液的制備:精密稱取冠心丹參膠囊內(nèi)容物10g，加70%甲醇250ml，超聲30min溶解后，冷卻后取少量上清液過0.45 μ m微孔濾膜濾過，續(xù)濾液作為供試品溶液；
[0067]除供試品溶液的制備不同外，其他步驟與實(shí)施例1相同，按照所述方法對(duì)10批供試品溶液和對(duì)照品溶液，注入液相色譜儀，以高效液相色譜法測(cè)定，記錄色譜圖，得到10批冠心丹參膠囊的圖譜；并進(jìn)行分析比較，得到由測(cè)定所得的指紋圖譜中有11個(gè)共有峰，其中，以5號(hào)峰即丹酚酸B為參照物峰，分別為:
[0068]峰I丹參素鈉:相對(duì)保留時(shí)間0.206，相對(duì)峰面積0.104 ；
[0069]峰2原兒茶醛:相對(duì)保留時(shí)間0.370，相對(duì)峰面積0.097 ；
[0070]峰3迷迭香酸:相對(duì)保留時(shí)間0.894，相對(duì)峰面積0.090 ；
[0071]峰4:相對(duì)保留時(shí)間0.924，相對(duì)峰面積0.080 ；
[0072]峰5丹酚酸B:相對(duì)保留時(shí)間1.000，相對(duì)峰面積1.000 ；
[0073]峰6:相對(duì)保留時(shí)間1.070，相對(duì)峰面積0.179 ；
[0074]峰7:相對(duì)保留