源金黃色葡萄球菌isdB蛋白多克隆抗體；
[0036]檢測線的制備:采用三維噴膜儀，調(diào)整噴液量為53?55dotS/mL/cm，用包被緩沖液稀釋兔源金黃色葡萄球菌isdB蛋白多克隆抗體，濃度為60?65 μ g/ml，在NC膜中檢測線位置劃線，即為檢測線，晾干備用；所述的包被緩沖液為經(jīng)過0.40?0.45 μ I濾膜過濾的0.05Μ、ρΗ9.6 的 CBS 緩沖液；
[0037]質(zhì)控線的制備:采用三維噴膜儀，調(diào)整噴液量為50?55dotS/mL/cm，用包被緩沖液稀釋羊抗鼠IgG抗體，濃度為1.6mg/ml，在NC膜上與檢測線平行的位置劃線，間隔5mm，即為質(zhì)控線，所述的包被緩沖液為經(jīng)過0.40?0.45 μ I濾膜過濾的0.03Μ、ρΗ9.4的CBS緩沖液；
[0038]NC膜組裝制備:晾干檢測線和質(zhì)控線，得到含有檢測線和質(zhì)控線的NC膜；用封閉工作液將制備的NC膜于室溫72h晾干，封存?zhèn)溆?；所述的封閉工作液為2.5?2.8% BSA、2.2?2.6%脫脂奶粉和0.01Μ、ρΗ7.0的CBS緩沖液混合后用0.42?0.45 μ I濾膜過濾得到的封閉工作液；
[0039](2)制備涂覆金標(biāo)抗體墊
[0040]用20mM含質(zhì)量百分比為1.5% BSA,0.1% NaNjP 3%四硼酸鈉的稀釋緩沖液，將金標(biāo)鼠源金黃色葡萄球菌單克隆抗體稀釋至終濃度0.08mg/mL ;裁取規(guī)格為300 X 7_的玻璃纖維棉，將金標(biāo)抗體溶液用單向噴點(diǎn)儀，以6 μ L/cm的速度(大約22ng/條)，均勻噴灑于玻璃纖維棉，56°C干燥lh，加入干燥劑真空密封后，室溫保存?zhèn)溆谩?br>[0041](3)組裝金黃色葡萄球菌膠體金檢測試紙卡
[0042]將涂有檢測線和質(zhì)控線的NC膜粘貼在支持板的中部，在NC膜的一側(cè)依次粘貼含有金標(biāo)抗體的玻璃纖維膜和樣品墊，在NC膜的另一側(cè)粘貼吸收墊，得到試紙板，將試紙板切割成不同寬度的試紙條，將試紙條安放于卡槽中即為金黃色葡萄球菌膠體金檢測試紙卡。
[0043](4)金黃色葡萄球菌膠體金檢測試紙卡使用及判定
[0044]金黃色葡萄球菌膠體金檢測試紙卡在診斷畜禽、奶牛養(yǎng)殖場臨床樣本或食品中的金黃色葡萄球菌中應(yīng)用，將增菌后的培養(yǎng)液50 μ I加至1.5mlEP管中，加入200 μ I滅菌水混勻即得待檢樣品，將所得的待檢樣品100 μ I滴加在本試紙卡的載樣墊中，在試紙卡的檢測線、質(zhì)控線位置均出現(xiàn)紅色條帶時，金黃色葡萄球菌檢測為陽性；僅質(zhì)控線出現(xiàn)一條紅色條帶時，為陰性結(jié)果；在試紙卡的質(zhì)控線未出現(xiàn)紅色條帶時為無效結(jié)果。
[0045]其中，步驟(I)中檢測線和質(zhì)控線的線寬為1mm，兩線相距4mm，位于膜的中間，距NC膜的邊距6?7_。
[0046]上述實(shí)施例為本發(fā)明的有效的實(shí)施方式，但本發(fā)明實(shí)施方式并不局限于上述實(shí)施方式的限制，根據(jù)每批次的生產(chǎn)實(shí)際情況，來調(diào)整具體的實(shí)施條件，整體沒有特別大的改變。其他發(fā)明沒有背離此發(fā)明基本原則和操作方法所作出的替代、組合、優(yōu)化等均在本發(fā)明的有效保護(hù)范圍內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.金黃色葡萄球菌膠體金檢測試紙卡，其特征在于:所述金黃色葡萄球菌膠體金檢測試紙卡由膠體金試紙條和扣板式卡槽組成；扣板式卡槽具有一個容置膠體金試紙條的內(nèi)置空腔，且扣板式卡槽上設(shè)置有觀察區(qū)和加樣區(qū)；膠體金試紙條主要由支持板、NC膜、金標(biāo)抗體墊、樣品墊和吸收墊組成； 所述的NC膜設(shè)置在支持板的中部，NC膜一側(cè)的支持板上依次粘貼有金標(biāo)抗體墊和樣品墊，NC膜另一側(cè)的支持板上粘貼有吸收墊；所述NC膜的中部有一條含有金黃色葡萄球菌多克隆抗體的檢測線和一條含有羊抗鼠二抗的質(zhì)控線；膠體金試紙條設(shè)置在卡槽的內(nèi)置空腔內(nèi)，卡槽的觀察區(qū)對應(yīng)膠體金試紙條的顯色區(qū)，加樣孔對應(yīng)膠體金試紙條的樣品墊； 所述樣品墊中金標(biāo)抗體為兔抗金黃色葡萄球菌isdB蛋白單克隆抗體； 所述NC膜中金黃色葡萄球菌抗體為兔源金黃色葡萄球菌isdB蛋白多克隆抗體；所述NC膜中羊抗鼠二抗為羊抗鼠I gG抗體。
2.如權(quán)利要求1所述的金黃色葡萄球菌膠體金檢測試紙卡的制備方法，其特征在于:包括以下步驟: (1)制備NC膜 兔源金黃色葡萄球菌isdB蛋白多克隆抗體的制備:采用原核表達(dá)并純化的金黃色葡萄球菌isdB蛋白作為免疫原，提取IgG抗體，制備兔源金黃色葡萄球菌isdB蛋白多克隆抗體； 檢測線的制備:采用三維噴膜儀，調(diào)整噴液量為53?55dotS/mL/cm，用包被緩沖液稀釋兔源金黃色葡萄球菌isdB蛋白多克隆抗體，濃度為60?65 μ g/ml，在NC膜中檢測線位置劃線，即為檢測線，晾干備用；所述的包被緩沖液為經(jīng)過0.40?0.45 μ I濾膜過濾的0.05Μ、ρΗ9.6 的 CBS 緩沖液； 質(zhì)控線的制備:采用三維噴膜儀，調(diào)整噴液量為50?55dotS/mL/cm，用包被緩沖液稀釋羊抗鼠IgG抗體，濃度為1.6mg/ml，在NC膜上與檢測線平行的位置劃線，間隔5mm，即為質(zhì)控線，所述的包被緩沖液為經(jīng)過0.40?0.45 μ I濾膜過濾的0.03Μ、ρΗ9.4的CBS緩沖液； NC膜組裝制備:晾干檢測線和質(zhì)控線，得到含有檢測線和質(zhì)控線的NC膜；用封閉工作液將制備的NC膜于室溫72h晾干，封存?zhèn)溆?；所述的封閉工作液為2.5?2.8% BSA,2.2?2.6%脫脂奶粉和0.01M、pH7.0的CBS緩沖液混合后用0.42?0.45 μ I濾膜過濾得到的封閉工作液； (2)制備涂覆金標(biāo)抗體墊 用20mM含質(zhì)量百分比為1.5% BSA,0.1% NaNjP 3%四硼酸鈉的稀釋緩沖液，將金標(biāo)鼠源金黃色葡萄球菌單克隆抗體稀釋至終濃度0.08mg/mL ;裁取規(guī)格為300 X 7_的玻璃纖維棉，將金標(biāo)抗體溶液用單向噴點(diǎn)儀，以6 μ L/cm的速度(大約22ng/條)，均勻噴灑于玻璃纖維棉，56°C干燥lh，加入干燥劑真空密封后，室溫保存?zhèn)溆谩? (3)組裝金黃色葡萄球菌膠體金檢測試紙卡 將涂有檢測線和質(zhì)控線的NC膜粘貼在支持板的中部，在NC膜的一側(cè)依次粘貼含有金標(biāo)抗體的玻璃纖維膜和樣品墊，在NC膜的另一側(cè)粘貼吸收墊，得到試紙板，將試紙板切割成不同寬度的試紙條，將試紙條安放于卡槽中即為金黃色葡萄球菌膠體金檢測試紙卡。 (4)金黃色葡萄球菌膠體金檢測試紙卡使用及判定 金黃色葡萄球菌膠體金檢測試紙卡在診斷畜禽、奶牛養(yǎng)殖場臨床樣本或食品中的金黃色葡萄球菌中應(yīng)用，將增菌后的培養(yǎng)液50 μ I加至1.5mlEP管中，加入200 μ I滅菌水混勻即得待檢樣品，將所得的待檢樣品100 μ I滴加在本試紙卡的載樣墊中，在試紙卡的檢測線、質(zhì)控線位置均出現(xiàn)紅色條帶時，金黃色葡萄球菌檢測為陽性；僅質(zhì)控線出現(xiàn)一條紅色條帶時，為陰性結(jié)果；在試紙卡的質(zhì)控線未出現(xiàn)紅色條帶時為無效結(jié)果。
3.如權(quán)利要求2所述的金黃色葡萄球菌膠體金檢測試紙卡的制備方法，其特征在于:步驟⑴中檢測線和質(zhì)控線的線寬為1mm，兩線相距4mm，位于膜的中間，距NC膜的邊距6?7mm0
【專利摘要】本發(fā)明涉及金黃色葡萄球菌膠體金檢測試紙卡及其制備方法，所述檢測試紙卡由膠體金試紙條和扣板式卡槽組成，膠體金試紙條主要由支持板、NC膜、金標(biāo)抗體墊、樣品墊和吸收墊組成，所述的NC膜設(shè)置在支持板的中部，NC膜一側(cè)的支持板上依次粘貼有含有金標(biāo)金黃色葡萄球菌isdB蛋白單克隆抗體墊，NC膜另一側(cè)的支持板上粘貼有吸收墊，所述NC膜的中部有一條含有金黃色葡萄球菌isdB蛋白多克隆抗體的檢測線和一條含有羊抗鼠二抗的質(zhì)控線，該試紙卡具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、檢測快速的優(yōu)點(diǎn)，且不需要使用儀器設(shè)備，成本低廉，操作方便，能廣泛應(yīng)用于畜禽、奶牛養(yǎng)殖場及食品業(yè)對金黃色葡萄球菌的快速、準(zhǔn)確診斷，減少重大經(jīng)濟(jì)損失。
【IPC分類】G01N33-68
【公開號】CN104820101
【申請?zhí)枴緾N201510194258
【發(fā)明人】張國祖, 王興濤, 郭振環(huán), 金燕飛, 陳獻(xiàn)忠
【申請人】河南省康星藥業(yè)股份有限公司
【公開日】2015年8月5日
【申請日】2015年4月22日