，Na2HPO4-NaH2PO4)。
[0023]實(shí)施例1:
[0024]一種制備本發(fā)明納米熒光傳感器的制備方法，包括如下步驟:
[0025](I)在磁珠-金納米籠的復(fù)合物中加入200 μ L濃度為5.832mg/mL的Pdda溶液，室溫振蕩過(guò)夜；
[0026](2)磁分離上述溶液，用PBS緩沖溶液清洗后加入100 μ L1.0X 10_5mol/L羅丹明B的PBS溶液，室溫振蕩過(guò)夜；
[0027](3)向上述溶液加入1yL濃度為1.0X 10_5M的ATP適體溶液，室溫振蕩過(guò)夜，磁分離，移除上清液，納米熒光傳感器制備完成；
[0028]其中，所述的磁珠-金納米籠的復(fù)合物按如下方法制備而成:將10 μ L巰基磁珠與200 μ L金納米籠均勻混合，室溫振蕩反應(yīng)10h，磁分離，用PBS溶液清洗，移除上清液，即得；所述的巰基磁珠是購(gòu)買的商品(天津市倍思樂(lè)色譜技術(shù)開發(fā)中心)；所述的金納米籠按文獻(xiàn)方法獲得(G.D.Moon, S.ff.Choi, X.Cai, ff.Y.Li, E.C.Cho, U.Jeong, L.V.Wang andY.N.Xia.J.Am.Chem.Soc.2011，133，4762 - 4765)。
[0029]實(shí)施例2:
[0030]一種利用本發(fā)明的納米熒光傳感器用于ATP的檢測(cè)，方法如下:
[0031](I)將ATP樣品溶液加入到本發(fā)明的納米熒光傳感器中，用PBS緩沖溶液(PH =7.4)稀釋至200 μ L，37°C恒溫振蕩反應(yīng)lh，發(fā)生靶分子ATP與其適體的特異性結(jié)合，使ATP適體從金納米籠表面脫離，分子門被打開；
[0032](2)磁分離上述溶液，收集上清液，檢測(cè)其熒光信號(hào)，熒光檢測(cè)條件:激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)分別為530、573nm。
[0033]圖1為不同ATP濃度對(duì)應(yīng)的熒光信號(hào)強(qiáng)度，ATP的濃度分別為(0，1.0X 10_1(1，5.0X 1(T10，8.0X 1(T10，1.0X 1(Γ9，2.0X 1(Γ9，5.0X 1(Γ9，6.0X 1(Γ9，8.0X 1θΛ 1.0Χ 1θΛ2.0X10-8，5.0X10_8mOl/L);圖2為ATP濃度與熒光信號(hào)強(qiáng)度的線性關(guān)系。結(jié)果表明，ATP濃度在1.0X 10_1(1?8.0X 10 _9mol/L時(shí)，熒光信號(hào)強(qiáng)度與ATP的濃度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，其線性方程為:FL = 159.44257+20.13502 X Catp (l(T9mol/L)，線性相關(guān)系數(shù)為 0.9935。
[0034]本發(fā)明將納米技術(shù)與分子生物技術(shù)相結(jié)合，通過(guò)分子識(shí)別及特異性反應(yīng)，可實(shí)現(xiàn)對(duì)ATP高靈敏、高選擇性的檢測(cè)。本發(fā)明將金納米籠與核酸適體和表面正電荷修飾技術(shù)結(jié)合在一起，使該納米熒光傳感器具有可生物響應(yīng)的分子門，一旦加入需要檢測(cè)的靶分子如ATP，則發(fā)生靶分子及其適體的特異性識(shí)別反應(yīng)，導(dǎo)致適體鏈從金納米籠表面脫離，使封堵籠孔的分子門被打開，并使孔內(nèi)被封堵的熒光分子被釋放出來(lái)，因此，利用該熒光傳感器，能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)靶分子的高靈敏、高選擇性檢測(cè)。
[0035]本發(fā)明的納米熒光傳感器結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，穩(wěn)定性好，可控性強(qiáng)，熒光信號(hào)靈敏，同時(shí)，不受其它常見(jiàn)干擾物質(zhì)影響，具有高的選擇性。該納米熒光傳感器及其檢測(cè)技術(shù)在生物醫(yī)學(xué)、生命科學(xué)等領(lǐng)域具有較大的應(yīng)用潛力和廣闊的應(yīng)用前景，可用于ATP的特異性檢測(cè)，為癌癥等重大疾病的早期診斷及治療提供新的途徑和方法。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種納米熒光傳感器，其特征在于:以金納米籠作為載體，其內(nèi)部載有熒光分子，其表面被組裝上核酸適體，可將金納米籠孔封堵，防止熒光分子外泄。2.一種如權(quán)利要求1所述的納米熒光傳感器，其特征在于:所述的核酸適體可以通過(guò)靜電作用被組裝到金納米籠表面。3.一種如權(quán)利要求1-2中任一項(xiàng)所述的納米熒光傳感器，其特征在于:所述的核酸適體可以通過(guò)在金納米籠表面修飾正電荷而將其組裝到金納米籠表面。4.一種如權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的納米熒光傳感器，其特征在于:所述的正電荷可通過(guò)在金納米籠表面修飾一層聚陽(yáng)離子TODA，即聚二烯丙基二甲基氯化銨而產(chǎn)生。5.一種如權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的納米熒光傳感器，其特征在于:所述的熒光分子是羅丹明B。6.一種如權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)所述的納米熒光傳感器的制備方法，其特征在于步驟如下: (1)在磁珠-金納米籠的復(fù)合物中加入I3DDA溶液，室溫振蕩過(guò)夜； (2)磁分離上述溶液后加入羅丹明B溶液，室溫振蕩過(guò)夜； (3)向上述溶液中加入核酸適體溶液，室溫振蕩過(guò)夜，磁分離，用PBS緩沖溶液清洗后即制得納米熒光傳感器； 其中，所述的磁珠-金納米籠的復(fù)合物按如下方法制備而成:將磁珠與金納米籠的混合溶液置于室溫振蕩反應(yīng)10h，磁分離，用PBS緩沖溶液清洗，移除上清夜，即得。7.一種如權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)所述的納米熒光傳感器的應(yīng)用，其特征在于用于ATP的檢測(cè)，方法如下: (1)將ATP樣品溶液加入到如權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)所述的納米熒光傳感器的PBS懸浮液中，37°C恒溫振蕩反應(yīng)lh，發(fā)生ATP與其適體的特異性結(jié)合，使ATP適體從金納米籠表面脫離，分子門被打開； (2)磁分離上述溶液，收集上清液，檢測(cè)其熒光信號(hào)。
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種可用于生物醫(yī)學(xué)及生命科學(xué)領(lǐng)域的納米熒光傳感器及其制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明將金納米籠與核酸適體及表面正電荷修飾技術(shù)結(jié)合在一起，提出一種全新的納米熒光傳感器。該傳感器的特點(diǎn)是：以金納米籠作為納米容器，在其表面修飾了一層聚陽(yáng)離子，將熒光染料填充到金納米籠中，利用靜電作用將核酸適體組裝到金納米籠表面，形成具有生物響應(yīng)作用的分子門。一旦加入待檢測(cè)的靶分子如ATP，則發(fā)生靶分子及其適體的特異性識(shí)別反應(yīng)，導(dǎo)致適體鏈從金納米籠表面脫離，使封堵籠孔的分子門被打開，孔內(nèi)的熒光分子被釋放出來(lái)。因此，利用該熒光傳感器，能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)靶分子的高靈敏、高選擇性檢測(cè)，為癌癥等重大疾病的早期診斷、治療等提供新方法。
【IPC分類】G01N33/53, G01N21/64
【公開號(hào)】CN104931684
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510091552
【發(fā)明人】王衛(wèi), 李筱筱, 羅細(xì)亮
【申請(qǐng)人】青島科技大學(xué)
【公開日】2015年9月23日
【申請(qǐng)日】2015年2月28日