。
[0016]2.技術(shù)方案
[0017]為了解決上述問(wèn)題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案如下:
[0018]一種促進(jìn)生物試劑與生物分子結(jié)合的方法，其步驟為:
[0019](I)將生物分子固定在帶有微孔的微孔支持體上，形成一個(gè)或多個(gè)生物分子點(diǎn)，得到檢測(cè)體；
[0020](2)將生物試劑通過(guò)微孔穿過(guò)微孔支持體，在此過(guò)程中，生物試劑與生物分子結(jié)合；
[0021](3)重復(fù)步驟(2)，使得生物試劑重復(fù)多次穿過(guò)微孔支持體。
[0022]優(yōu)選地，所述微孔支持體為硝酸纖維膜或尼龍膜或聚丙烯酰胺膜或者由硝酸纖維、尼龍、聚丙烯酰胺衍生物構(gòu)成的膜。
[0023]優(yōu)選地，所述微孔支持體的橫截面積為10?1000mm2。
[0024]優(yōu)選地，所述步驟(I)中的檢測(cè)體為多個(gè)生物分子點(diǎn)固定在微孔支持體上形成的生物分子點(diǎn)陣。
[0025]優(yōu)選地，所述步驟(I)中的檢測(cè)體上至少有2個(gè)生物分子點(diǎn)，每一個(gè)生物分子點(diǎn)被固定在微孔支持體上至少一個(gè)預(yù)先確定的位置上。
[0026]優(yōu)選地，所述步驟(I)中的檢測(cè)體上至少有5個(gè)生物分子點(diǎn)，每一個(gè)生物分子點(diǎn)被固定在微孔支持體上至少一個(gè)預(yù)先確定的位置上。
[0027]優(yōu)選地，所述檢測(cè)體為蛋白質(zhì)經(jīng)過(guò)電泳分離然后轉(zhuǎn)移并固定在微孔支持體上形成的蛋白質(zhì)印跡膜。
[0028]優(yōu)選地，所述的生物分子為抗體或者所述的生物試劑為抗體。
[0029]優(yōu)選地，所述步驟⑵中生物試劑溶液以單一方向通過(guò)微孔穿過(guò)微孔支持體。
[0030]優(yōu)選地，所述步驟⑵中生物試劑溶液以雙向通過(guò)微孔穿過(guò)微孔支持體。
[0031]優(yōu)選地，所述步驟(3)中重復(fù)步驟(2)2到100次。
[0032]優(yōu)選地，所述步驟(3)中重復(fù)步驟(2) 5到30次。
[0033]一種促進(jìn)生物試劑與生物分子結(jié)合的裝置，包括檢測(cè)體、柱缸和柱塞，所述檢測(cè)體由微孔支持體和固定在上面的生物分子形成，所述的柱缸為中空結(jié)構(gòu)，所述的柱塞位于柱缸的中空結(jié)構(gòu)中，柱塞與柱缸之間形成密封結(jié)構(gòu)。
[0034]優(yōu)選地，所述的檢測(cè)體為微孔支持體上固定有多個(gè)生物分子點(diǎn)形成的生物分子點(diǎn)陣，至少有2個(gè)生物分子點(diǎn)，每一個(gè)生物分子點(diǎn)被固定在微孔支持體上至少一個(gè)預(yù)先確定的位置上。
[0035]優(yōu)選地，所述的檢測(cè)體為微孔支持體上固定有多個(gè)生物分子點(diǎn)形成的生物分子點(diǎn)陣，至少有5個(gè)生物分子點(diǎn)，每一個(gè)生物分子點(diǎn)被固定在微孔支持體上至少一個(gè)預(yù)先確定的位置上。
[0036]優(yōu)選地，所述的生物分子為抗體。
[0037]優(yōu)選地，所述的檢測(cè)體為蛋白質(zhì)經(jīng)過(guò)電泳分離然后轉(zhuǎn)移并固定在微孔支持體上形成的蛋白質(zhì)印跡膜。
[0038]優(yōu)選地，所述的檢測(cè)體固定于柱缸的一端。
[0039]優(yōu)選地，所述的柱缸為一端封閉的中空結(jié)構(gòu)，所述的柱塞為中空結(jié)構(gòu)，檢測(cè)體固定于柱塞的一端。
[0040]優(yōu)選地，所述柱塞的中空結(jié)構(gòu)中設(shè)有第二柱塞，第二柱塞與柱塞之間形成密封結(jié)構(gòu)。
[0041]優(yōu)選地，所述柱塞和柱缸的中空結(jié)構(gòu)為橢圓柱形。
[0042]優(yōu)選地，柱塞和柱缸的中空結(jié)構(gòu)為四方柱形，四角帶有弧度。
[0043]優(yōu)選地，還包括一個(gè)或多個(gè)襯托，至少一個(gè)所述的襯托設(shè)置在檢測(cè)體的一側(cè)與檢測(cè)體直接接觸。
[0044]—種促進(jìn)生物試劑與生物分子結(jié)合的多級(jí)裝置，將η個(gè)上述的一種促進(jìn)生物試劑與生物分子結(jié)合的裝置組合得到，其中n ^ 2。
[0045]優(yōu)選地，2^ n ^ 384ο
[0046]優(yōu)選地，2彡η彡96。
[0047]優(yōu)選地，4彡η彡96。
[0048]現(xiàn)有技術(shù)中，利用類似過(guò)濾過(guò)程可以實(shí)現(xiàn)生物試劑與生物分子之間的結(jié)合，在有些情況下，這種方法甚至優(yōu)越于其他常用的方法。但是人們沒有意識(shí)到現(xiàn)有方法沒有達(dá)到分子結(jié)合的最大化；特別是沒有發(fā)現(xiàn)現(xiàn)有類似過(guò)濾的方法通常不能達(dá)到試劑與分子的最大結(jié)合。本發(fā)明中促進(jìn)生物試劑與生物分子結(jié)合的方法，通過(guò)反復(fù)循環(huán)的模式能顯著增強(qiáng)生物試劑與生物分子的有效結(jié)合，使用本發(fā)明所述方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)獲得的結(jié)果比常規(guī)方法所獲得的結(jié)果至少提高了五倍。
[0049]在現(xiàn)有的類似過(guò)濾的方法中，生物試劑不容易回收。例如，在斑點(diǎn)免疫滲濾法中，生物試劑滲入吸水材料中，無(wú)法回收，由于使用的生物試劑溶液體積一般很小，利用真空泵的方法也很難有效回收，特別是很難多次、循環(huán)使用試劑溶液。這些困難妨礙了現(xiàn)有方法的改進(jìn)。另外，利用類似過(guò)濾過(guò)程來(lái)實(shí)現(xiàn)生物試劑與生物分子之間結(jié)合的機(jī)制并不清楚。比如，一般認(rèn)為抗體-抗原反應(yīng)需要較長(zhǎng)時(shí)間結(jié)合，但實(shí)際中，通過(guò)過(guò)濾過(guò)程可在短時(shí)間內(nèi)實(shí)現(xiàn)結(jié)合，目前關(guān)于短時(shí)間內(nèi)實(shí)現(xiàn)結(jié)合的機(jī)理并不清楚，因此也妨礙了方法的改進(jìn)。
[0050]發(fā)明人在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，通過(guò)延長(zhǎng)生物試劑與生物分子結(jié)合時(shí)間的方法，無(wú)論延長(zhǎng)多長(zhǎng)時(shí)間，都無(wú)法達(dá)到比較高的結(jié)合效率，例如，將生物分子固定在微孔支持體表面，然后與生物試劑孵育，無(wú)論多長(zhǎng)時(shí)間，結(jié)合的效率均沒有本發(fā)明中多次循環(huán)的方法好。因此本發(fā)明的方法不僅保證生物分子與生物試劑能充分接觸，而且還提高了生物試劑的有效結(jié)合濃度。在利用類似過(guò)濾過(guò)程的方法實(shí)現(xiàn)生物試劑與生物分子結(jié)合時(shí)，在過(guò)濾操作前需要經(jīng)過(guò)孵育結(jié)合的過(guò)程，使用本發(fā)明的方法可以省去孵育結(jié)合過(guò)程，節(jié)約了操作時(shí)間，使操作效率大大提尚。
[0051]3.有益效果
[0052]相比于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的有益效果為:
[0053](I)本發(fā)明利用一種促進(jìn)生物試劑與生物分子結(jié)合的裝置，實(shí)現(xiàn)生物試劑溶液循環(huán)反復(fù)穿過(guò)固定有生物分子的微孔支持體，促進(jìn)生物分子與生物試劑之間快速、有效結(jié)合，比現(xiàn)有的檢測(cè)方法更加快捷、靈敏；
[0054](2)本發(fā)明一種促進(jìn)生物試劑與生物分子結(jié)合的裝置，包括柱缸、柱塞和微孔支持體，微孔支持體固定于柱缸的一端，柱塞位于柱缸的另一端可在柱缸內(nèi)做活塞運(yùn)動(dòng)，在操作過(guò)程中，生物試劑溶液放置在由微孔支持體、柱缸和柱塞構(gòu)成的密封空間中，微孔支持體上固定有生物分子，柱塞在柱缸內(nèi)做活塞運(yùn)動(dòng)，使生物試劑溶液穿過(guò)微孔支持體流出，收集流出的生物試劑溶液重復(fù)進(jìn)行上述操作，促進(jìn)生物分子與生物試劑的有效結(jié)合；柱塞的活塞運(yùn)動(dòng)可通過(guò)正壓或負(fù)壓或兩者結(jié)合的方式來(lái)實(shí)現(xiàn)，如氣泵、真空泵、往復(fù)泵、蠕動(dòng)泵等；
[0055](3)本發(fā)明一種促進(jìn)生物試劑與生物分子結(jié)合的裝置，柱缸為一端封閉的中空結(jié)構(gòu)，柱塞為中空結(jié)構(gòu)，微孔支持體位于柱塞的一端，柱塞在柱缸內(nèi)做活塞運(yùn)動(dòng)時(shí)，使生物試劑溶液穿過(guò)微孔支持體進(jìn)入柱塞的中空結(jié)構(gòu)中，柱塞的中空結(jié)構(gòu)中設(shè)有第二柱塞，第二柱塞通過(guò)活塞運(yùn)動(dòng)可以使生物試劑溶液再次穿過(guò)微孔支持體，如此反復(fù)操作，促進(jìn)生物試劑與生物分子的結(jié)合，具有操作簡(jiǎn)便、結(jié)合時(shí)間短、檢測(cè)靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)；
[0056](4)本發(fā)明突破傳統(tǒng)的生物分子與生物試劑結(jié)合方法，巧妙利用循環(huán)操作的原理促進(jìn)生物分子與生物試劑的充分結(jié)合，并以此為基礎(chǔ)設(shè)計(jì)了一種便于操作的裝置，實(shí)現(xiàn)了生物試劑溶液的回收利用，節(jié)省了大量的生物分子與生物試劑結(jié)合的時(shí)間，使檢測(cè)效率顯著提高，且檢測(cè)靈敏度至少提高了五倍；
[0057](5)本發(fā)明的裝置可以組合使用進(jìn)行批量檢測(cè)，提高檢測(cè)效率；例如可以將裝置按照I X4，I X8，I X 12排列或者按照2X4，4X6，8X12等規(guī)律排列，此外，可以將多個(gè)柱缸設(shè)計(jì)成一體結(jié)構(gòu)。
【附圖說(shuō)明】
[0058]圖1為本發(fā)明生物分子與生物試劑結(jié)合過(guò)程示意圖；
[0059]圖2為本發(fā)明一種促進(jìn)生物試劑與生物分子結(jié)合的裝置的結(jié)構(gòu)示意圖；
[0060]圖3為本發(fā)明一種促進(jìn)生物試劑與生物分子結(jié)合的裝置的結(jié)構(gòu)示意圖；
[0061]圖4為本發(fā)明一種促進(jìn)生物試劑與生物分子結(jié)合的裝置的結(jié)構(gòu)示意圖；
[0062]圖5為比較本發(fā)明的方法與傳統(tǒng)方法用于檢測(cè)抗體的一個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果；
[0063]圖6為比較本發(fā)明的方法與傳統(tǒng)方法用于檢測(cè)抗體的一個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果；
[0064]圖7為比較本發(fā)明的方法與傳統(tǒng)方法在用于蛋白免疫印跡中檢測(cè)蛋白質(zhì)的一個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
[0065]圖中:1、檢測(cè)體；2、柱缸；3、柱塞；4、密封結(jié)構(gòu)；5、第二柱塞。
【具體實(shí)施方式】
[0066]下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步進(jìn)行描述。
[0067]本發(fā)明提供了在檢測(cè)蛋白質(zhì)及其它生物分子領(lǐng)域中能夠促進(jìn)生物試劑與生物分子結(jié)合的方法。方法的一個(gè)特征是使用循環(huán)的過(guò)程使生物試劑溶