s4.0軟件進行分析。將源于基質(zhì)或纖維素載體 的峰減去平均質(zhì)譜。在與文獻數(shù)據(jù)比較的基礎(chǔ)上，提出了脂質(zhì)峰的分布。
[0112] 利用本發(fā)明的方法，存在于血液代謝產(chǎn)物中的至少35種脂質(zhì)被鑒定（識別）。
[0113] 從纖維素載體h的干血斑樣本中檢測外源件的小藥物化合物（圖3)
[0114] 右美沙芬和胺碘酮的儲備液（lmmol/L)在水和水-甲醇（溶質(zhì)溶劑體積比為1:1) 中分別制備。用空白全血稀釋儲存液到500,100和20pmol/L的濃度以制備工作溶液。將 血液工作溶液（25y1)的部分用移液管滴加到Whatman903纖維素紙上并讓其在室溫下干 燥3小時。然后，將干血斑樣本用含干燥劑的密封塑料袋密封并儲存在-20°C的溫度下，直 到用來分析。
[0115] 從纖維素載體切下其上的干血斑樣品，并使用雙面碳導(dǎo)電膠帶（SPIs提供）將其 固定在導(dǎo)電的ITO鍍膜玻璃片（BrukerDaltonics)上。
[0116] 紫外光吸收化合物是CHCA。CHCA被溶解在濃度為5mg/ml的乙腈/0. 2 %TFA中 (溶質(zhì)溶劑體積比70:30)。溶解的CHCA用ImagePrep裝置（BrukerDaltonics)噴霧。
[0117] 噴霧過程是一個多步驟過程：第一步包括功率為20±20%，12個溶解的DHB的噴 霧循環(huán)（刻度從〇%到最大功率的100%且可以進行功率調(diào)節(jié)，這意味著在這種情況下噴霧 功率可在0%到55%之間變化），接著在每噴霧循環(huán)之間進行20秒的干燥。然后，三個隨 后的步驟分別在噴霧功率為22±22%，19±19%和20±20%時實施，并隨之增加循環(huán)次數(shù) (步驟2 :6循環(huán)到18循環(huán)，步驟3 :12循環(huán)到40循壞和步驟4 :30循環(huán)到60循環(huán)）。每一 個完成的干燥階段之間的循環(huán)數(shù)也在增加（步驟2每隔兩個循壞，步驟3每隔四個循壞，步 驟4每隔6個循壞）。
[0118] 在紫外光吸收化合物沉積并干燥后，將ITO鍍膜玻璃片裝入MALDI-FT-ICR裝置 (SolariX9.4T,BrukerDaltonics)。樣品在正模式下通過功率為50%，頻率為1000赫 茲的激光電離。質(zhì)量范圍設(shè)置在200到800m/z之間。四級桿1質(zhì)量設(shè)置在300m/z，并 累積15質(zhì)譜的平均。在這些條件下，外部校準(zhǔn)導(dǎo)致質(zhì)量精度在Ippm以內(nèi)。CHCA的一個 單體（[CHCA+Na]+)，三聚物（[2CHCA-H20+H]+, [2CHCA+H]+and[2CHCA+Na]+)和一個三聚物 ([3CHCA+Na]+)被用作外部校準(zhǔn)。質(zhì)譜通過DataAnalysis4.0軟件進行分析。正如所看到 的，小藥物化合物的檢測根據(jù)本發(fā)明所述的方法在干血斑上進行，導(dǎo)致了藥物化合物的存 在性快速且可靠的分析。
[0119] 以上用特定實施例描述了本發(fā)明，但這只是為了說明本發(fā)明而不應(yīng)解釋為對本發(fā) 明的限定。更一般地，本領(lǐng)域技術(shù)人員將會理解，本發(fā)明并不被在上文中所特別展示和/或 描述的內(nèi)容所限定。
[0120] 權(quán)利要求中的附圖標(biāo)記不限制其保護范圍。
[0121] 動詞"包括"，"包含"，"具有"、"由……組成"，或任何其他的變體，以及它們各自的 變化，不排除被包含的因素之外的其他因素的存在。
[0122] 不定冠詞和定冠詞的使用不限定數(shù)量。
[0123] 本發(fā)明還可描述如下：本發(fā)明提供了一種通過沒有任何消解步驟或液體萃取步驟 的干液斑MLDI-MS分析，用于存在于生物體液中至少一種分子化合物的檢測和/或定量的 方法，其允許進一步分析干液斑內(nèi)至少一種分子的物理分布。
【主權(quán)項】
1. 一種檢測存在于液體中的至少一種化合物的方法，所述方法包括以下步驟： 步驟a，在載體上提供至少一個干液斑； 步驟b，固定在所述載體上的所述干液斑的至少一部分到導(dǎo)電表面上； 步驟c，提供紫外光吸收化合物的水溶液或有機溶液； 步驟d，將所述紫外光吸收化合物沉積到固定在所述導(dǎo)電表面上所述載體上干液斑的 至少一部分上； 步驟e，使載體上所述干液斑的至少一個區(qū)域經(jīng)受基質(zhì)輔助激光解吸/電離過程來產(chǎn) 生咼子； 步驟f，用質(zhì)譜儀分析儀獲取所述離子的全掃描模式質(zhì)譜，和 步驟g，通過分析所述全掃描模式質(zhì)譜確定至少一種化合物的存在。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，步驟b包括： ?轉(zhuǎn)移來自于干液斑的至少一種化合物到膜上， ?固定所述膜的至少一部分到導(dǎo)電表面上。3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中，所述在載體上提供干液斑的步驟包括以下幾 步： ?提供生物液體樣本， ?沉積所述液體樣本的至少一個液滴到至少一個載體上，從而在載體上至少形成一個 干液斑。4. 根據(jù)上述權(quán)利要求任一項所述的方法，其中，步驟g是這樣執(zhí)行的：通過對應(yīng)于存在 于干液斑區(qū)域中至少一種化合物的至少一個計算出的質(zhì)量電荷比（m/z)，選擇至少一個精 確質(zhì)量電荷比（m/z)。5. 根據(jù)上述權(quán)利要求任一項所述的方法，其中，所述獲取所述離子的全掃描模式質(zhì)譜 的步驟是這樣執(zhí)行的：采用傅里葉變換離子回旋共振質(zhì)譜儀、飛行時間質(zhì)譜儀、四級桿離子 阱飛行時間質(zhì)譜儀、四極桿軌道阱質(zhì)譜儀、線性離子阱軌道阱質(zhì)譜儀來進行。6. 根據(jù)上述權(quán)利要求任一項所述的方法，其中，所述待檢測的化合物是計算出的質(zhì)量 電荷比低于或等于1500m/z的化合物。7. 根據(jù)上述權(quán)利要求任一項所述的方法，其中，將校準(zhǔn)化合物沉積在所述導(dǎo)體表面，并 且所述溶解的紫外光吸收化合物在所述步驟e之前沉積在所述校準(zhǔn)混合物的至少一部分 上。8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其包括： 步驟h，使所述校準(zhǔn)混合物的至少一個區(qū)域經(jīng)受基質(zhì)輔助激光解吸電離來產(chǎn)生校準(zhǔn)離 子， 步驟i，用質(zhì)譜分析儀獲取所述校準(zhǔn)離子的全掃描質(zhì)譜， 步驟j，利用所述校準(zhǔn)離子的質(zhì)譜來校準(zhǔn)所述質(zhì)譜儀的m/z刻度， 其中步驟i和步驟j可在步驟e之前或之后進行。9. 根據(jù)上述權(quán)利要求任一項所述的方法，其中，所述紫外光吸收化合物是在一個化合 物集合內(nèi)選擇，該化合物集合包括：a-氰基-4-羥基肉桂酸（CHCA);二羥基苯甲酸（DHB) 的異構(gòu)體；反式-3, 5-二甲氧基-4-羥基肉桂酸（SA);煙酸；吡啶酸（PA);反式-3-甲氧 基-4-羥基肉桂酸（阿魏酸）；2, 4, 6-三羥基苯乙酮（THAP) ;2, 6-二羥基苯乙酮（DHA); 3-羥基吡啶甲酸（HPA) ;3氨基喹啉；反式-3-吲哚丙烯酸（IAA);地蒽酚（DIT) ;1，8, 9-三 羥基蒽；2-(4-羥基苯基偶氮）-苯甲酸（HABA) ;6_氮雜-2-硫代胸腺嘧啶（ATT) ;3_氨 基-4-甲基-5-硝基吡啶（AMNP) ;5_氨基-1-萘酚（5, 1-ANL) ;5_羥基-1-萘酚（5, 1-HNL); 或以上化合物的混合物。10. 根據(jù)上述權(quán)利要求任一項所述的方法，其中，步驟c的溶液進一步包括酸，該酸選 自如下的集合，該集合包括：體積分數(shù)最優(yōu)為〇. 05-1 %的甲酸，三氟乙酸或磷酸，濃度范圍 最優(yōu)為〇? 01 - 〇? 2mol/L的醋酸或鹽酸。11. 根據(jù)上述權(quán)利要求任一項所述的方法，所述方法包括： 步驟k，獲取存在于干液斑內(nèi)在至少2個區(qū)域離子的完整掃描模式質(zhì)譜，相對于第二區(qū) 域，第一區(qū)域更靠近所述干液斑的中心， 步驟1，對應(yīng)于在所述干液斑區(qū)域內(nèi)待檢測的至少一種化合物計算出的質(zhì)量電荷比，選 擇精確質(zhì)量電荷比（m/z)， 步驟m，確定所述干液斑內(nèi)的所述至少一種化合物的空間分布。12. 根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中，提供至少兩個干液斑所述步驟k是在所提供的 每個不同干液斑的至少兩個區(qū)域上實現(xiàn)的，所述方法還包括步驟： 步驟n，在所提供的不同干液斑之間比較待檢測的至少一種化合物的空間分布。13. 根據(jù)上述權(quán)利要求任一項所述的方法，其中，所述導(dǎo)電表面在如下集合中選擇：銦 錫氧化物（ITO)鍍膜玻璃片，不銹鋼板或鍍金板。14. 根據(jù)上述權(quán)利要求任一項所述的方法，其中，所述方法的步驟d通過所述溶解的紫 外光吸收化合物的噴霧實現(xiàn)，其噴霧采用手動噴霧器、自動噴霧器、氣動噴霧器或上述裝置 混合使用。15. 根據(jù)上述權(quán)利要求任一項所述的方法，其中，所述待檢測的化合物在如下的化合物 集合中選擇：核苷酸，氨基酸，有機酸，糖類，脂類，尿素，肌醇，所述化合物存在于體內(nèi)代謝 組以及候選藥物和試驗性藥物中。
【專利摘要】本發(fā)明涉及用質(zhì)譜分析方式來測定干液斑中化合物的方法，提供了一種通過沒有任何消解步驟或液體萃取步驟的干液斑MALDI-MS分析方法，用來檢測和/或量化存在于血液中的至少一種成分。本發(fā)明的方法允許進一步分析干液斑內(nèi)至少一種成分的物理分布。
【IPC分類】G01N33/68
【公開號】CN105074471
【申請?zhí)枴緾N201480014782
【發(fā)明人】瑪利亞·達洛亞, 尼古拉斯·斯馬爾賈索, 戴爾芬·德布瓦, 埃德溫·德·波夫
【申請人】智圖公司
【公開日】2015年11月18日
【申請日】2014年3月13日
【公告號】EP2778684A1, WO2014140202A1