比例與含量，液體組分 為體積比例與含量；
[0041] 本發(fā)明的有益效果是：
[0042] 本發(fā)明的糖類抗原CA19-9定量檢測試劑盒（磁微粒分離化學(xué)發(fā)光法）各試劑組 分包括校準(zhǔn)品、質(zhì)控品、抗試劑、磁微粒試劑、發(fā)光底物，具有以下有益效果；
[0043] 1、本發(fā)明以堿性磷酸酶為標(biāo)記酶，通過化學(xué)反應(yīng)標(biāo)記抗體，并使用凝膠層析分離 純化，提高了反應(yīng)的靈敏度；
[0044] 2、本發(fā)明以以抗異硫氰酸熒光素抗體與羧基磁珠偶聯(lián)制得磁微粒試劑，使免疫反 應(yīng)更容易混勻和分離，而且大大提高了反應(yīng)速度；
[0045] 3、本發(fā)明以APLS為底物，該底物是輝光性底物，靈敏度高，可以快速達(dá)到平臺期， 平臺穩(wěn)定期長且信號較強(qiáng)，有利于信號的檢測，提高了最終試劑盒的靈敏度和特異性性 能；
[0046] 4、本試劑盒穩(wěn)定性良好，有效期可至一年以上。
【附圖說明】
[0047] 附圖用來提供對本發(fā)明的進(jìn)一步理解，并且構(gòu)成說明書的一部分，與本發(fā)明的實(shí) 施例一起用于解釋本發(fā)明，并不構(gòu)成對本發(fā)明的限制。
[0048] 圖1是糖類抗原CA19-9的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
[0049] 圖2是糖類抗原CA19-9定量測定試劑盒與進(jìn)口檢測試劑的檢測效果相關(guān)性曲線。
【具體實(shí)施方式】
[0050] 以下結(jié)合附圖對本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例進(jìn)行說明，應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的優(yōu)選實(shí) 施例僅用于說為了更清楚地理解本發(fā)明，參照下列實(shí)施例進(jìn)一步描述本發(fā)明。實(shí)施例僅用 于解釋而不以任何方式限制本發(fā)明。實(shí)施例中所用各試劑材料均可商購獲得，所用各儀器 設(shè)備也是所屬領(lǐng)域的現(xiàn)有儀器設(shè)備，未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法為所屬領(lǐng)域熟知的常規(guī)方 法和常規(guī)條件，或按照制造商所建議的條件。
[0051] 實(shí)施例1 :
[0052] 各種緩沖液的配置，具體如下：
[0053] I、Tris 鹽 pH8. 0 緩沖液
[0054] Tris :12. 12mg，氯化鈉5. 82mg,加入IL純化水中，充分?jǐn)嚢柚镣耆芙?，用鹽酸調(diào) 整最終pH為8.0。
[0055] 2、校準(zhǔn)品緩沖液的制備
[0056] 在IL新生牛血清中加入O.Olg四環(huán)素和0.1 g硫酸新霉素，充分溶解后經(jīng)過 0. 22 μ m濾膜處理獲得。
[0057] 3、抗試劑緩沖液
[0058] Tris :12. 12mg ~60. 57mg，四環(huán)素：0· Olg ~0· 05g，綿羊血清：Ig ~5g，新生牛血 清3g~IOg,馬血清Ig~5g加入IL純化水中，充分?jǐn)嚢柚镣耆芙猓?br>[0059] 4、磁微粒緩沖液
[0060] Tris :12. 12mg，氯化鈉5. 82mg，甲基纖維醚50g，加入IL純化水中，充分?jǐn)嚢柚镣?全溶解。
[0061] 5、發(fā)光底物緩沖液
[0062] Trisl2. 12g~121. 14g，氯化鈉5.82g，光澤精0.3g，加入IL純化水中，充分?jǐn)嚢?至完全溶解，用鹽酸調(diào)節(jié)緩沖液的pH至9. 5 ;
[0063] 6、清洗液的濃縮液的配置
[0064] Trisl2. 12g，氯化鈉 5. 82g，Tween-2050mL，曲拉通-100,50mL，加入 IL 純化水中， 充分?jǐn)嚢柚镣耆芙狻?br>[0065] 實(shí)施例2 :糖類抗原CA19-9的定量測定試劑盒的制備
[0066] 1、校準(zhǔn)品和質(zhì)控品的制備
[0067] 首先：用標(biāo)準(zhǔn)品緩沖液溶解糖類抗原CA19-9,配置成如表1所示的目標(biāo)濃度的校 準(zhǔn)品和質(zhì)控品；
[0068] 表1 :校準(zhǔn)品和質(zhì)控品的制備
[0069]
[0070] 2、抗試劑的制備方法如下：
[0071] (1)、異硫氰酸熒光素與糖類抗原CA19-9抗體偶聯(lián)，獲得異硫氰酸熒光素標(biāo)記的 CA 19-9包被抗體：
[0072] 首先用抗試劑緩沖液將異硫氰酸熒光素配制成濃度為2. 5mg/mL異硫氰酸熒光素 溶液，按照糖類抗原CA19-9與異硫氰酸熒光素的質(zhì)量之比為1:1. 1，將二者同時轉(zhuǎn)移到棕 色玻璃瓶中，，室溫下攪拌1~2小時，充分反應(yīng)后使用pH = 8~9的碳酸氫鹽緩沖液進(jìn)行 平衡，然后凝膠層析分離純化得到的異硫氰酸熒光素標(biāo)記的CA19-9包被抗體；
[0073] (2)、堿性磷酸酶與糖類抗原CA19-9抗體的偶聯(lián)，獲得堿性磷酸酶標(biāo)記的CA19-9 標(biāo)記抗體：
[0074] 首先用抗試劑緩沖液將堿性磷酸酶配制成濃度為2. 5mg/mL的堿性磷酸酶溶液， 按照堿性磷酸酶與糖類抗原CA19-9的摩爾比為1:2的量將二者轉(zhuǎn)移至棕色瓶中，室溫下攪 拌4~5小時,充分反應(yīng)后使用pH = 8~9的碳酸氫鹽緩沖液平衡,然后使用凝膠層析分 離純化得到的堿性磷酸酶標(biāo)記的CA19-9標(biāo)記抗體；
[0075] (3)、將步驟⑴中獲得的異硫氰酸熒光素標(biāo)記的CA19-9包被抗體和和步驟（2) 中獲得的堿性磷酸酶標(biāo)記的CA19-9標(biāo)記抗體，加入含有0. 1 % Tween20的Tris鹽緩沖液 中，充分?jǐn)嚢韬螳@得所述抗試劑；
[0076] 3、磁微粒試劑的制備：
[0077] 將抗異硫氰酸熒光素抗體與羧基偶聯(lián)制得磁微粒試劑。
[0078] (1)、取IOmL的充分混勻后的羧基磁珠濃縮液至反應(yīng)瓶中，將該反應(yīng)瓶在磁場放 置15min，待羧基磁珠全部沉降后吸去上清，向反應(yīng)瓶中加入5倍于反應(yīng)瓶中羧基磁珠體積 的磁微粒緩沖液，震蕩清洗20~30min ;再將反應(yīng)瓶置于磁場中15min后吸去上清。重復(fù) 清洗羧基磁珠3遍。最后將羧基磁珠溶液定容到10-50mg/mL，混勻；
[0079] (2)、連接反應(yīng)：按照羧基磁珠與抗異硫氰酸熒光素抗體質(zhì)量比為100:1的比例，， 在羧基磁珠中加入抗異硫氰酸熒光素抗體，在2~8°C內(nèi)保持混勻狀態(tài)反應(yīng)18小時；
[0080] (3)、反應(yīng)瓶在在磁場放置15min，待羧基磁珠沉降后用磁微粒緩沖液清洗3遍，隨 后定容至10mg/mL，2~8°C保存，制得所需待用磁微粒試劑。
[0081] 4、發(fā)光底物的制備
[0082] 用7倍于ALPS體積的發(fā)光底物緩沖液充分溶解ALPS。
[0083] 5、將糖類抗原CA 19-9校準(zhǔn)品、糖類抗原CA 19-9質(zhì)控品、抗試劑、磁微粒試劑、發(fā)光 底物獨(dú)立地置于包裝容器內(nèi)，得到糖類抗原CA19-9的定量測定試劑盒。
[0084] 實(shí)施例3 :用糖類抗原CA19-9定量測定試劑盒檢測糖類抗原CA19-9的步驟
[0085] 利用這種糖類抗原CA19-9定量測定試劑盒檢測糖類抗原CA19-9的方法，該方法 包括步驟：
[0086] (1)取三支試管分別加15 μ L糖類抗原CA19-9的校準(zhǔn)品、15 μ L糖類抗原CA19-9 的質(zhì)控品、15 μ L待測樣本；
[0087] (2)每一試管中加入60 μ L抗試劑，用塑料薄膜覆蓋試管，輕輕振蕩試管30s，置 37 °C下水浴15分鐘；
[0088] (3)每一試管中加入30 μ L磁微粒試劑，用塑料薄膜覆蓋試管，輕輕振蕩試管30s， 置37 °C下水浴5分鐘；
[0089] (4)將試管在磁分離器上沉淀2分鐘，緩慢的倒轉(zhuǎn)試管和磁分離器，倒出上清液， 把倒轉(zhuǎn)的試管連同磁分離器一起放在濾紙上，用力拍擊磁分離器底部以除去粘在管壁上的 所有液滴；
[0090] (5)每支試管中加入300 μ L清洗液，用塑料薄膜覆蓋試管，輕輕振蕩試管30s，混 勻后緩慢的倒轉(zhuǎn)試管和磁分離器，倒出上清液，把倒轉(zhuǎn)的試管連同分離器一起放在濾紙上， 用力拍擊分離器底部以除去粘在管壁上的所有液滴；
[0091] (6)重復(fù)步驟（5) -次；
[0092] (7)每一試管中加入200 μ L發(fā)光底物溶液，振蕩混勻3s，用化學(xué)發(fā)光儀檢測發(fā)光 強(qiáng)度；
[0093] (8)數(shù)據(jù)的處理：
[0094] 通過四參數(shù)非線性擬合校準(zhǔn)品的濃度值和發(fā)光值獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線的四參數(shù) Logistic 方程：Y = 13658. 7961+(1560596. 0896-13658. 7961)Λ?+(Χ/292· 7304) a -1. 1289 (R = 0. 999784)，標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1所示，其中，橫軸代表校準(zhǔn)品的濃度值，縱軸代 表發(fā)光值。
[0095] 臨床數(shù)據(jù)：
[0096] 1、為了評價(jià)本發(fā)明的糖類抗原CA19-9定量測定試劑盒的穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性，每隔2 個月對本實(shí)施例的試劑盒性能進(jìn)行測定。測試結(jié)果如表2所示，由表2可以看出：糖類抗原 CA19-9與發(fā)光值的相關(guān)性連續(xù)15個月保持在0. 99以上，本發(fā)明的試劑盒的最低檢測限也 大于國家標(biāo)準(zhǔn)的〇. 2 (mIU/mL)，準(zhǔn)確度的相對偏差在±6. 2%左右，同時每批次的