個(gè)樣本，使用血漿中代謝小分子的含量來(lái)對(duì)樣本進(jìn)行編碼，每一個(gè)樣本對(duì)于一個(gè)向量；利用向量之間的距離，來(lái)判斷樣本之間的相似性；二個(gè)樣本向量之間的距離越大，相似性越大；二個(gè)樣本向量之間的距離越小，相似性越小；向量之間距離的定義為:
[0024]距離(X，Y)= X.Y/ ( Il X Il * Il Y Il )
[0025]其中，X.Y為點(diǎn)乘，IlXlI與IlYlI分別為X與Y的模。
[0026]優(yōu)選地，所述的核磁共振模型的應(yīng)用，使用“刀切法”驗(yàn)證胃癌診斷的準(zhǔn)確性，其方法是:
[0027]I)每次從樣本集N中取出一個(gè)樣本，用剩下的N-1個(gè)樣本作為訓(xùn)練集來(lái)訓(xùn)練模型，然后用取出的那個(gè)樣本來(lái)檢驗(yàn)?zāi)Ｐ停?br>[0028]2)把剛才取出的樣本放回，又取出另外一個(gè)樣本；
[0029]3)重復(fù)檢驗(yàn)N次，直到N個(gè)樣本全部取遍；
[0030]4)統(tǒng)計(jì)模型應(yīng)用最終的預(yù)測(cè)準(zhǔn)確率。
[0031]有益效果
[0032]本發(fā)明與其它胃癌的檢測(cè)方法相比，具有以下優(yōu)點(diǎn):
[0033]I)本發(fā)明方法使用血液作為檢測(cè)的樣本，與傳統(tǒng)的內(nèi)窺鏡和鋇餐診斷方法，對(duì)患者造成的傷害$父小。
[0034]2)相較于癌癥基因的篩查方法，本方法的成本較低，適于方法的大范圍推廣。
[0035]3)具有較高的敏感性和特異性，能夠用于篩選抗肝癌的藥物。
[0036]專業(yè)術(shù)語(yǔ)解釋:
[0037]I)代謝小分子:是值在生命體中新陳代謝中存在的小分子，一般是指相對(duì)分子質(zhì)量小于1000的小分子物質(zhì)。
[0038]2) NMR:核磁共振波譜法(Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy)，將核磁共振現(xiàn)象應(yīng)用于測(cè)定分子結(jié)構(gòu)的一種譜學(xué)技術(shù)。
[0039]3)百分比差異度(percentage-difference value, PDV):是一種評(píng)價(jià)某個(gè)特征分布于特定集合的度量值。對(duì)于二分類，如果某個(gè)特征的PDV大于0，表明更多陽(yáng)性集的樣本具有該特征，反之，則表明更多陰性集的樣本具有該特征。
[0040]4)Mann-Whitney U test:該方法用于檢驗(yàn)這兩個(gè)總體的均值是否有顯著的差別。
[0041]5)代謝組學(xué):是指研究代謝物與生理病理變化的相對(duì)關(guān)系的研究方式，研究對(duì)象大都是相對(duì)分子質(zhì)量1000以內(nèi)的小分子物質(zhì)。
【附圖說(shuō)明】
[0042]圖1是實(shí)施例一中25種代謝小分子的PDV的得分圖。
[0043]圖2是實(shí)施例一中聚類后Ml與M2的ROC曲線。
【具體實(shí)施方式】
[0044]下面結(jié)合附圖與具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的描述。
[0045]實(shí)施例一
[0046]一、核磁共振模型及其制備方法
[0047]步驟一:樣本選擇
[0048]根據(jù)2010年國(guó)際抗癌聯(lián)盟/美國(guó)癌癥聯(lián)合委員會(huì)(UICC/AJCC)TNM分期標(biāo)準(zhǔn)，胃癌的分期則為:
[0049].0期:腫瘤浸潤(rùn)至粘膜層，但未累及粘膜固有層，無(wú)局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；
[0050].IA期:凡腫瘤浸潤(rùn)至粘膜或粘膜下層者，無(wú)局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；
[0051].IB期:腫瘤浸潤(rùn)至粘膜或粘膜下層，伴有距原發(fā)灶3CM以內(nèi)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；或腫瘤已浸潤(rùn)至肌層或漿膜下，但尚無(wú)局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者；
[0052].II期:腫瘤浸潤(rùn)至粘膜或粘膜下層，但已有距原發(fā)灶3CM以外局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者；腫瘤已浸潤(rùn)肌層、漿膜下層，但僅有距原發(fā)灶3CM以內(nèi)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；或腫瘤已穿透漿膜層，但尚無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；
[0053].IIIA期:腫瘤浸潤(rùn)肌層或漿膜下，并有距原發(fā)灶3CM以外淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；腫瘤已穿透漿膜外，但僅有3CM以內(nèi)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；甚或腫瘤已侵及鄰近組織、器官，但尚無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；
[0054].IIIB期:腫瘤已穿透漿膜層并有3CM以外的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；或腫瘤已累及鄰近組織器官，但有3CM以內(nèi)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；
[0055].IV期:腫瘤已累及鄰近組織、器官，并有距原發(fā)灶3CM以外淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；或已有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的任何T、N。
[0056]實(shí)驗(yàn)樣本來(lái)自于課題組前期973項(xiàng)目(2010CB933900)積累的胃癌血漿樣本。根據(jù)2010年國(guó)際抗癌聯(lián)盟/美國(guó)癌癥聯(lián)合委員會(huì)(uicc/ajcc)?m分期標(biāo)準(zhǔn)，選擇胃癌分期為II期的樣本，共30例，同時(shí)，選擇胃癌分期為III期的樣本，共30例，合計(jì)60例胃癌樣本，作為“病例組”。另外，選擇30例健康樣本最為“對(duì)照組”。其中，“病例組”分布為22?81歲，均值為55歲，男性42例，女性18例；“對(duì)照組”分布34?71歲，均值為55歲，男性26例，女性4例?！安±M”與“對(duì)照組”的年齡通過(guò)非參數(shù)檢驗(yàn)，P = 0.939，性別通過(guò)卡方檢驗(yàn)，P = 0.119 (精確顯著性，2端)。由此可知，抽樣年齡、性別組間無(wú)差別，符合進(jìn)行下一步分析的條件。
[0057]步驟二:樣本處理
[0058]全血樣本使用3000rpm的離心機(jī)進(jìn)行5分鐘的離心，而后在_80°C的冰箱進(jìn)行保存。使用前，進(jìn)行不超過(guò)20min的室溫解凍，并混合生理鹽水，一般為200uL樣本:400uL生理鹽水(在 10% D20/90 % H2O 中含有 0.9% NaCl)，12000Xg 離心 5min，吸取 550uL 進(jìn)行-80°C冷藏，而后進(jìn)行分析。
[0059]對(duì)于每一個(gè)血漿樣本，抽取200uL作為檢測(cè)對(duì)象，加入400uL Na+/K+緩沖液(45mM) (pH = 7.49，K2HPO4.3H20:0.830g !NaH2PO4.2H20:0.139g ；D20: 100ml ；NaCl:0.9g)，渦旋震蕩30s混勻后，離心(4°C，11180g，1min)得上清液。
[0060]步驟三:核磁共振波譜檢測(cè)
[0061]取上述所得上清液550uL至5mm核磁管，混勻后進(jìn)行核磁檢測(cè)。其中，NMR的條件為:使用CPMG序列[RD-90。-( τ -180。- On-ACQ]采集小分子信息。譜寬(Sff)為20ppm，等待時(shí)間(RD)為2s，90°脈寬為11.6 μ s，采樣點(diǎn)數(shù)為32K，F(xiàn)ID累加次數(shù)為64次?；夭ㄑ莼瘯r(shí)間(d20)為350us，回波循環(huán)(L4)為100，總回波時(shí)間(2η τ )為70ms。
[0062]共檢測(cè)到25種代謝小分子，包括氨基酸、酸、醇、糖、膽堿等。具體為:
[0063]a)氨基酸:異亮氨酸、亮氨酸、纈氨酸、丙氨酸、脯氨酸、谷氨酰胺、酪氨酸、甘氨酸、組氨酸和苯丙氨酸；
[0064]b)酸:3_羥基異丁酸、乳酸、乙酸、琥珀酸、肌酸和甲酸；
[0065]c)醇:甲醇、乙醇和鯊肌醇；
[0066]d)肌酐:肌酸酐；
[0067]e)糖:alpha-D_ 葡萄糖和 beta_D_ 葡萄糖；
[0068]f)其他:丙酬、膽喊和蛋白糖基。
[0069]步驟四:數(shù)據(jù)評(píng)估
[0070]對(duì)于NMR檢測(cè)到的25種代謝小分子，使用百分比差異度(percentage-differencevalue, PDV)進(jìn)行評(píng)估，發(fā)現(xiàn)脯氨酸的PDV得分最大(圖1)，結(jié)果表明在病例組和對(duì)照組的樣本中，癌癥組的脯氨酸含量明顯升高，在病例組和對(duì)照組中存在最大的差異。
[0071]步驟五:樣本聚類
[0072]通過(guò)ROC曲線的比較聚類后的Ml子類與M2子類曲線線下面積(圖2)，發(fā)現(xiàn)以脯氨酸的濃度為聚類分割值，將全部樣本分為2個(gè)子類以后，會(huì)得到更大的曲線線下面積，即得到更好的預(yù)測(cè)準(zhǔn)確率。因此，將2個(gè)子類分別指定為Ml和M2，其中，Ml子類與M2子類中的樣本比例為67:23。在Ml子類中，病例組與對(duì)照組樣本比例為52:15 ;在M2子類中，病例組與對(duì)照組的樣本比例為8:15。
[0073]步驟六:差異性檢驗(yàn)
[0074]對(duì)Ml子類和M2子類中的25種代謝小分子進(jìn)行差異性檢驗(yàn)，檢驗(yàn)的方法為Mann-Whitney U test，結(jié)果顯不:
[0075]Ml 子類中，beta-D-葡萄糖(P = 0.007)、肌酸酐(P = 0.005)、乙醇(P = 0.026)、組氨酸(P = 0.000)和脯氨酸(P = 0.020)在癌癥組和對(duì)照組中存在明顯差異；
[0076]M2 子類中，乳酸(P = 0.013)、肌酸(P = 0.000)、肌酸酐(P = 0.000)、亮氨酸(P=0.019)、纈氨酸(P = 0.034)和組氨酸(P = 0.001)在癌癥組和對(duì)照組中存在明顯差異。
[0077]其中乳酸、乙醇、亮氨酸、脯氨酸都在病例組中表達(dá)量過(guò)高，而beta-D-葡萄糖、肌酸、肌酸酐、纈氨酸、組氨酸的表達(dá)量在病例組中過(guò)低。
[0078]步驟七:建立核磁共振模型
[0079]在Ml子類中，使用beta-D-葡萄糖(P = 0.007)、乙醇(P = 0.026)、組氨酸(P =0.000)和脯氨酸(P = 0.020)共4個(gè)代謝小分子作為標(biāo)志物，在M2子類中，使用乳酸(P =0.013)、肌酸(P = 0.000)、肌酸酐(P = 0.000)、亮氨酸(P = 0.019)、纈氨酸(P = 0.034)和組氨酸(P = 0.001)共6個(gè)代謝小分子作為標(biāo)志物，合并后共為9種代謝小分子標(biāo)志物，以此建立用于胃癌相關(guān)代謝小分子標(biāo)志物檢測(cè)的核磁共振模型。
[0080]二、應(yīng)用
[0081]所述核磁共振模型的應(yīng)用通過(guò)最近鄰方法實(shí)現(xiàn)對(duì)胃癌