中的取向(圖1B)。在此，流動(dòng)方向P指向X方向。
[0026]圖1示出根據(jù)本發(fā)明用于進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)測量的裝置10的實(shí)施例的示意圖。裝置10包括室12和通道14。在細(xì)胞計(jì)數(shù)期間存在的層流的流動(dòng)方向在圖1和在后續(xù)的圖中均由箭頭P指示。在一側(cè)上(S2)，室12能夠包括磁體16，在這種情況下所述磁體例如附接在室12的外部。根據(jù)流動(dòng)方向P，通道14布置在室12的下游。室12和通道14形成閉合系統(tǒng)。通道14還包括在同一通道側(cè)(SI)處(例如通道下側(cè))的偏轉(zhuǎn)裝置20和磁體22 (特別地，永磁體)。
[0027]傳感器18或用于細(xì)胞計(jì)數(shù)測量的傳感器陣列(特別地，包括傳感器芯片)附接至偏轉(zhuǎn)裝置20下游的通道14，并且它被配置用于計(jì)數(shù)磁性標(biāo)記細(xì)胞。
[0028]特別地，磁阻電阻器能夠用于傳感器18中，優(yōu)選GMR傳感器。傳感器18和/或傳感器陣列連接至電子評(píng)估裝置23，其包括例如用于評(píng)估測量結(jié)果的計(jì)算機(jī)的處理器。
[0029]使用所述裝置，例如有可能來檢查未稀釋的血液樣本的關(guān)于(例如)白細(xì)胞的濃度。
[0030]在通道14的需要富集磁性標(biāo)記細(xì)胞的一側(cè)上，通道14包括偏轉(zhuǎn)裝置20，所述偏轉(zhuǎn)裝置在這種情況下布置在(例如)通道14的底座上。磁體22布置在偏轉(zhuǎn)裝置20下方。以示例的方式，通道14被分成四個(gè)濃度區(qū)域Cl、C2、C3、C4。然而，此處的總計(jì)四個(gè)的濃度區(qū)域的數(shù)量不是強(qiáng)制性的，即通道14能夠配備有任何數(shù)量的濃度區(qū)域。通道的高度h能夠在通道14的不同濃度區(qū)域C1、C2、C3、C4中是不同的。在圖2A中所示的實(shí)施例中，通道的高度在例如濃度區(qū)域Cl中最高(例如100 Pm)，并且在每個(gè)隨后的下游濃度區(qū)域C2、C3、C4中減少。在細(xì)胞的部分標(biāo)記的情況下(參見下文)，高度h優(yōu)選地在所有濃度區(qū)域Cl、C2、C3、C4中例如是逐步相等的。
[0031]圖2B闡明偏轉(zhuǎn)裝置20的設(shè)計(jì)。在示例性通道14中，偏轉(zhuǎn)裝置20被分成例如三個(gè)區(qū)段20-1、20-2、20-3，其中每個(gè)區(qū)段位于濃度區(qū)域C1、C2、C3中的不同的一個(gè)中。在此，每個(gè)區(qū)段20-1、20-2、20-3能夠包括布置成與軸線成角度處的多個(gè)導(dǎo)向元件24，其用作引導(dǎo)細(xì)胞的裝置。為清楚起見，在圖2B中導(dǎo)向元件24中僅一些設(shè)有附圖標(biāo)記。單個(gè)區(qū)段20-1、20-2、20-3各自具有寬度b和長度a，其能夠在不同濃度區(qū)域C1、C2、C3的區(qū)段20_1、20_2、20-3中分別是不同的。優(yōu)選地，在這種情況下寬度b在下游減小，使得寬的區(qū)段布置在上游且窄的區(qū)段布置在下游。偏轉(zhuǎn)裝置20的寬度b是垂直于通道的軸線A (虛線)延伸的路徑，其中通道的軸線A沿通道14的流動(dòng)方向P延伸。因此，寬度b是偏轉(zhuǎn)裝置20在通道14內(nèi)沿水平“y”_軸的流域。因此，長度a是偏轉(zhuǎn)裝置20沿通道的軸線A的相應(yīng)區(qū)段的長度。在這種情況下通道寬度(例如100 Pm)在每個(gè)濃度區(qū)域C1、C2、C3、C4中是恒定的。以示例的方式，區(qū)段20-3具有10 Pm的寬度，然后富集通道寬度的1/10的標(biāo)記細(xì)胞26，即小于例如區(qū)段20-1的一個(gè)對(duì)數(shù)級(jí)，如果后者包括100 Pm的寬度b。
[0032]導(dǎo)向元件24能夠布置在與軸線A成角度處，優(yōu)選地在關(guān)于軸線A成0°與90°之間的銳角處，特別是在0°與45°之間，并且單獨(dú)地或一起形成在流動(dòng)方向P上漸縮的至少一個(gè)漏斗形狀。以示例的方式，這種導(dǎo)向元件24包括壁，在所述實(shí)施例中所述壁在此附接至通道14的外壁的內(nèi)側(cè)且突出至通道14中。
[0033]例如，導(dǎo)向元件24能夠是由例如光致抗蝕劑制成的屏障，其機(jī)械地引導(dǎo)標(biāo)記細(xì)胞26且因此將這些富集在軸線A或例如鐵磁性“魚骨狀結(jié)構(gòu)”上，其磁性地集中且富集標(biāo)記細(xì)胞。偏轉(zhuǎn)裝置20的區(qū)段20-1、20-2、20-3中的一個(gè)或不同幾個(gè)中兩者結(jié)構(gòu)的組合也是可能的。圖2B示出導(dǎo)向元件24的原理，其以放大方式描繪于圖3中。以磁泳方式引導(dǎo)的導(dǎo)向元件24優(yōu)選地完全或部分地由鐵磁性材料制成和/或具有例如10 nm至100 nm的壁高度。優(yōu)選地，壁高度小于待檢測的細(xì)胞的平均細(xì)胞直徑的20%，特別地小于10%。用于機(jī)械引導(dǎo)的導(dǎo)向元件24的壁高度優(yōu)選地大于標(biāo)記細(xì)胞26的直徑的20%，特別地大于10%。在此，使用血小板的示例，這是基于3 Pm的平均細(xì)胞直徑。
[0034]例如偏轉(zhuǎn)裝置20的區(qū)段20-1的導(dǎo)向元件24的示例在圖3A中示出，其形成機(jī)械引導(dǎo)。在此示例中，多個(gè)導(dǎo)向元件24在流動(dòng)方向P上在軸線A上偏移。傳感器18也在圖3A中示出在偏轉(zhuǎn)裝置20的下游。此外示出磁性標(biāo)記細(xì)胞26和標(biāo)記細(xì)胞26的運(yùn)動(dòng)，其由導(dǎo)向元件24引導(dǎo)，以箭頭Z的方式示出。
[0035]指定為圖3B和圖3C的附圖分別圖示偏轉(zhuǎn)裝置20的另外的實(shí)施例，其中例如區(qū)段20-1由導(dǎo)向元件24形成，其引起標(biāo)記細(xì)胞26的磁泳引導(dǎo)。導(dǎo)向元件24完全或部分地由磁性材料形成，即這些是例如鎳條。這種導(dǎo)向元件24的壁高度優(yōu)選地是100 nm。導(dǎo)向元件24布置在與軸線A成一定角度處。
[0036]在圖3B中示出的示例性實(shí)施例的兩個(gè)導(dǎo)向元件24 (其關(guān)于軸線A彼此相對(duì))在圖3B的示例性實(shí)施例中相對(duì)于彼此并未偏移?？赏耆虿糠值赜纱判圆牧?例如鎳)形成的磁性腹板28 (所謂的芯)在其間I上延伸，即在軸線A上延伸。在此，磁性材料優(yōu)選地不暴露出來，而是由具有例如100 nm的厚度的鈍化層覆蓋，且因此與細(xì)胞樣本30分離。腹板28與指向軸線A的導(dǎo)向元件24的那些端部的距離優(yōu)選地小于標(biāo)記細(xì)胞26的直徑。
[0037]在圖3C的示例性實(shí)施例中示出的且關(guān)于軸線A鄰近的導(dǎo)向元件24在流動(dòng)方向P上偏移。
[0038]圖4A至圖6闡明在根據(jù)本發(fā)明的方法的示例性實(shí)施例中，例如在流式細(xì)胞術(shù)中借助于根據(jù)本發(fā)明的裝置10的磁性標(biāo)記細(xì)胞26的運(yùn)動(dòng)。在這些示例中，借助于根據(jù)本發(fā)明的方法確立例如全血樣本的凝固性。為此目的，例如在操作之前，根據(jù)患者情況，例如基于全血樣本中的血小板數(shù)量估計(jì)凝血情況以便確定止血異常。
[0039]為了給細(xì)胞樣本30內(nèi)的特定細(xì)胞(例如血小板或CD4+細(xì)胞)定量，特別是在復(fù)雜的樣本內(nèi)(如全血樣本)，所述細(xì)胞必須首先用細(xì)胞特異性標(biāo)記來進(jìn)行磁性標(biāo)記，因?yàn)閺?fù)雜樣本含有不同細(xì)胞和顆粒，例如蛋白質(zhì)。借助于例如超順磁標(biāo)記物，例如使用結(jié)合細(xì)胞特異性或顆粒特異性抗體的磁性顆粒(所謂的微珠)來進(jìn)行標(biāo)記。磁性顆粒能夠具有小于500 nm的直徑，優(yōu)選地具有小于300 nm或在40 nm與300 nm之間的直徑。對(duì)于將這類標(biāo)記物結(jié)合至抗體和對(duì)于產(chǎn)生細(xì)胞特異性或顆粒特異性抗體而言，本領(lǐng)域的技術(shù)人員能夠使用常規(guī)技術(shù)。
[0040]有可能借助于根據(jù)本發(fā)明的裝置10進(jìn)行具有例如I至16個(gè)細(xì)胞/微升的總細(xì)胞濃度的復(fù)雜樣本內(nèi)的細(xì)胞特異性標(biāo)記。為了標(biāo)記所需細(xì)胞類型的所有細(xì)胞，將細(xì)胞樣本30和標(biāo)記的抗體置于裝置10的室12中。所述抗體然后特定地結(jié)合至待富集的細(xì)胞。其中標(biāo)記待富集的所有細(xì)胞的這一過程能夠通過攪拌細(xì)胞溶液來輔助。在此，磁體16能夠輔助攪拌和/或混合過程。此變型對(duì)于具有高達(dá)14個(gè)細(xì)胞/微升的總細(xì)胞濃度的細(xì)胞樣本而言是有利的。
[0041]可替代地，標(biāo)記也能夠是局部的，例如有可能僅標(biāo)記等于待富集的所有細(xì)胞的1%的部分。這是有利的，特別是在具有極高的總細(xì)胞濃度(例如16個(gè)細(xì)胞/微升)的細(xì)胞樣本的情況下，因?yàn)榉駝t細(xì)胞計(jì)數(shù)會(huì)使傳感器18的動(dòng)態(tài)范圍超負(fù)荷。在此，首先將與磁性標(biāo)記物連接的抗體放入裝置10的通道14中。磁場能夠由通道14的預(yù)定側(cè)SI處的磁體22產(chǎn)生(參見圖1)，所述磁體的磁場將磁性標(biāo)記的抗體拉至通道14的預(yù)定側(cè)SI并且使其在此處富集。磁體16優(yōu)選地附接至通道14的外側(cè)，使得它不被通道內(nèi)容物所污染。隨后將細(xì)胞樣本30引入至通道14中。待富集的細(xì)胞(即在此實(shí)施例中的血小板)位于由于層流的結(jié)果流經(jīng)通道14的預(yù)定側(cè)SI的細(xì)胞樣本30的一部分中，由此待富集的細(xì)胞與標(biāo)記的抗體相接觸。在這種情況下，如果每個(gè)細(xì)胞存在大量標(biāo)記物則是有利的。所有其它細(xì)胞不與標(biāo)記相接觸。根據(jù)例如通道14的形式和尺寸，因此有可能磁性標(biāo)記限定部分的細(xì)胞，例如1%或10%的血小板，因?yàn)樵诩?xì)胞樣本30插入之后，這些細(xì)胞在通道14中可獲得均勻的空間分布。在標(biāo)記之后可獲得標(biāo)記細(xì)胞26。
[0042]是否應(yīng)進(jìn)行混合或是否應(yīng)標(biāo)記僅一部分能夠在使用血細(xì)胞計(jì)數(shù)進(jìn)行根據(jù)本發(fā)明的方法之前進(jìn)行估計(jì)。
[0043]在富集標(biāo)記細(xì)胞26的方法步驟中，例如借助于抽吸裝置將含有磁性標(biāo)記細(xì)胞26的細(xì)胞樣本30通過層流引導(dǎo)至通道14中，且由此提供用于富集，如圖4A中所示(方法步驟SlO ;為了保持清除，在圖4A至圖6中僅個(gè)別的標(biāo)記細(xì)胞26由附圖標(biāo)記標(biāo)示)。
[0044]在通道14的每個(gè)濃度區(qū)域C1、C2、C3、C4中的富集(或集中)程度由濃度區(qū)域Cl、C2、C3、C4的體積確定，即由通道14的高度h、由濃度區(qū)域C1、C2、C3中的偏轉(zhuǎn)裝置20的區(qū)段20-1、20-2、20-3的寬度b和/或長度a確定。
[0045]圖4A以示例性方式示出在緊接將細(xì)胞樣本30引入到通道14中之后標(biāo)記細(xì)胞26在偏轉(zhuǎn)裝置20上的隨機(jī)分布。當(dāng)通過磁體22產(chǎn)生磁場時(shí)，每個(gè)濃度區(qū)域(:1工2、03、04中的標(biāo)記細(xì)胞在磁體22 (圖4B和圖5A)的方向上沿z軸