具有可變對(duì)照線的用于快速檢測(cè)的條帶以及使用該條帶的診斷試劑盒的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】 本發(fā)明設(shè)及具有可變對(duì)照線的用于快速檢測(cè)的條帶、包括用于快速檢測(cè)的條帶的診斷 試劑盒、W及用于通過(guò)使用該條帶定性和定量分析樣品中分析物的方法。
【背景技術(shù)】 免疫層析法，被稱為快速檢測(cè)方法，是用于通過(guò)短時(shí)期內(nèi)的抗原-抗體反應(yīng)來(lái)定性和 定量分析少量分析物的方法，并且已經(jīng)應(yīng)用于多個(gè)領(lǐng)域，例如醫(yī)療領(lǐng)域、農(nóng)業(yè)、牧畜業(yè)、食 品、軍事、環(huán)境等，連同用于多種疾病的診斷或檢查。通常，利用包含與祀標(biāo)分析物反應(yīng)W產(chǎn) 生變化的試劑的分析條，或者利用包括塑料盒和安裝在該盒中的分析條的分析裝置來(lái)實(shí)施 該免疫層析法。圖1是用于免疫層析法的常規(guī)分析條的截面視圖。如圖1所示，常規(guī)分析 條由W下組成：用于接收液體樣品的樣品墊；包含結(jié)合物的結(jié)合墊，該結(jié)合物通過(guò)將產(chǎn)生 由肉眼或傳感器可檢測(cè)的信號(hào)的標(biāo)記（例如，金顆粒）結(jié)合到配體（例如抗原或抗體）進(jìn) 行制備；檢測(cè)墊，在該檢測(cè)墊上形成了固定有特異性結(jié)合到該樣品中分析物和/或該結(jié)合 物的結(jié)合劑（抗體或抗原）的檢測(cè)線W及用于確定該樣品遷移的對(duì)照線；和用于最后接收 該液體樣品的吸附墊。將運(yùn)些功能墊按W上描述它們的順序連接成彼此部分地重疊，并且 連續(xù)地安排在固體支撐件上。如果使用了安裝在塑料盒中的分析條，則用于將樣品引入到 樣品墊的樣品接收孔形成在該盒的上部部分上，并且用于觀察該檢測(cè)結(jié)果的結(jié)果觀察窗形 成在該檢測(cè)墊的結(jié)合劑被固定的位置上。在利用該分析條的免疫層析法中，當(dāng)將液體樣品 注射到該樣品墊內(nèi)時(shí)，液體樣品通過(guò)毛細(xì)作用沿該結(jié)合墊和該檢測(cè)墊流動(dòng)，并且最后被吸 附墊吸附。例如，能夠與祀標(biāo)抗原結(jié)合的一個(gè)抗體在膜墊上固定成一條線（檢測(cè)線），并且 其他抗體與標(biāo)記（例如金顆粒中的一個(gè)）結(jié)合，然后允許該樣品遷移。當(dāng)該樣品跨越該結(jié) 合墊遷移時(shí)，它的一部分產(chǎn)生抗原-金顆?？贵w的復(fù)合物，并且在固定的檢測(cè)線處捕獲該 抗原-金顆粒抗體W形成"在檢測(cè)線-抗原-金顆?？贵w處固定的抗體"。此時(shí)，該檢測(cè)線 由于金顆粒被染成紅色。如此，包含于結(jié)合墊中的該結(jié)合物還與該液體樣品一起遷移。如 果祀標(biāo)分析物存在于該樣品中，則該結(jié)合物通過(guò)該分析物被結(jié)合到固定在該檢測(cè)墊上的結(jié) 合劑（通常稱為"夾層反應(yīng)"），或者該結(jié)合物或該分析物競(jìng)爭(zhēng)性地結(jié)合到該結(jié)合劑（通常 稱為"競(jìng)爭(zhēng)性反應(yīng)"）?；谶\(yùn)種概念，該分析條用于利用肉眼或傳感器來(lái)檢測(cè)樣品中分析 物的存在。 發(fā)明披露 技術(shù)問(wèn)題 先前所述的該快速檢測(cè)方法，即利用快速試劑盒的免疫層析法，通常處于條帶的形式， 通過(guò)在長(zhǎng)膜片上沿若干水平線固定單獨(dú)的具體物質(zhì)然后縱向切割它來(lái)制備該條帶。因此， 優(yōu)勢(shì)在于，它W簡(jiǎn)單方式進(jìn)行大量生產(chǎn)是可能的；另外，與酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定等相比，不需 要額外的洗涂步驟或第二級(jí)反應(yīng)，并且該反應(yīng)時(shí)間短至10分鐘。因此，該免疫層析法在便 利性方面為極好的。然而，缺點(diǎn)在于，它的檢測(cè)極限為相對(duì)較低的，并且由于基于肉眼檢測(cè) 的緣故，精確的定量分析為困難的。出于運(yùn)個(gè)原因，該常規(guī)免疫層析法通常用于定性分析， 并且在其定量分析方面存在許多限制。 諸位發(fā)明人已經(jīng)盡力改進(jìn)該免疫層析條在定量分析連同定性分析方面的可靠性，并且 因此，他們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)通過(guò)添加含有等同于分析物或其類似物的可控對(duì)照線，然后對(duì)比該檢 測(cè)線和該可變對(duì)照線之間的信號(hào)強(qiáng)度，定量分析為可能的。因此，本發(fā)明提供具有可控對(duì)照 線的用于快速檢測(cè)的條帶，該條帶可W用于利用肉眼進(jìn)行樣品中分析物的高度可靠的定量 分析連同其定性分析。 問(wèn)題的解決方案 在一個(gè)方面，本發(fā)明提供用于與結(jié)合墊和檢測(cè)墊進(jìn)行快速檢測(cè)的條帶，其中該結(jié)合墊 具有與分析物反應(yīng)的第一預(yù)定量的第一配體和結(jié)合到該第一配體的信號(hào)檢測(cè)標(biāo)記，該第一 配體和該標(biāo)記在樣品遷移之前或在樣品遷移時(shí)彼此鏈接W形成結(jié)合物，并且該結(jié)合物可W 在樣品遷移時(shí)遷移到檢測(cè)墊， 其中該檢測(cè)墊具有彼此分離的檢測(cè)線和可變對(duì)照線， 其中該檢測(cè)線與和該樣品中分析物反應(yīng)的第二配體一起固定，并且 其中該可變對(duì)照線與第二預(yù)定量的第=配體一起固定，該第=配體等同于與該第一配 體反應(yīng)的該分析物或其類似物，從而能夠與沒(méi)有結(jié)合到樣品中分析物的裸結(jié)合物反應(yīng)。 在優(yōu)選的實(shí)施例中，用于快速檢測(cè)的條帶的特征在于，該第一預(yù)定量的第一配體的部 分與該樣品中分析物發(fā)生反應(yīng)，W從而形成復(fù)合物，其中該分析物結(jié)合到具有該第一配體 和該標(biāo)記的結(jié)合物，并且所形成的復(fù)合物的量隨著該樣品中分析物濃度的增加而增加，然 而該裸結(jié)合物的量降低。 在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施例中，用于快速檢測(cè)的條帶的特征在于，具有第一配體、標(biāo)記和分 析物的該復(fù)合物與在該檢測(cè)線處捕獲的第二配體發(fā)生反應(yīng)，沒(méi)有結(jié)合到該樣品中的分析物 并且具有第一配體和標(biāo)記的該裸結(jié)合物與在該可變對(duì)照線處捕獲的該第=配體發(fā)生反應(yīng)， 并且可W通過(guò)測(cè)量來(lái)自該檢測(cè)線和該可變對(duì)照線的信號(hào)來(lái)確定該樣品中的分析物是否存 在或其量或者上述兩者。 仍在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施例中，用于快速檢測(cè)的條帶的特征在于，該可變對(duì)照線的信號(hào) 強(qiáng)度隨著該樣品中分析物濃度的增加而降低。 還在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施例中，用于快速檢測(cè)的條帶的特征在于，來(lái)自該可變對(duì)照線的 信號(hào)強(qiáng)度保持為恒定水平，直到該樣品中分析物的濃度達(dá)到M值，但是當(dāng)該濃度超過(guò)M值時(shí) 該信號(hào)強(qiáng)度逐漸降低，并且最后收斂為0,其中在W該第二預(yù)定量固定的所有第=配體通過(guò) 與該裸結(jié)合物反應(yīng)達(dá)到飽和的情況下M值為樣品中分析物的最大濃度。 還在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施例中，用于快速檢測(cè)的條帶的特征在于，該檢測(cè)墊進(jìn)一步具有 用于確定樣品遷移的恒定對(duì)照線，該恒定對(duì)照線與報(bào)道分子一起固定。 另外在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施例中，用于快速檢測(cè)的條帶的特征包括： 樣品墊，將包含待分析的分析物的樣品引入到該樣品墊內(nèi)； 結(jié)合墊，該結(jié)合墊的一端連接到該樣品墊； 檢測(cè)墊，該檢測(cè)墊的一端連接到該結(jié)合墊的另一端； 吸附墊，該吸附墊的一端連接到該檢測(cè)墊的另一端，提供該樣品從樣品墊運(yùn)輸?shù)尿?qū)動(dòng) 力訊 放置在用于快速檢測(cè)的條帶的下側(cè)上的固體支撐件。 還在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施例中，用于快速檢測(cè)的條帶的特征在于該支撐件由選自下組的 材料制成，該組由W下各項(xiàng)組成：硝化纖維、尼龍、PVDF(聚偏氣乙締）、玻璃和塑料。 還在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施例中，用于快速檢測(cè)的條帶的特征在于該第一配體、該第二配 體和該第S配體為蛋白質(zhì)、抗原、抗體、DNA、RNA、PNA或適體。 還在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施例中，用于快速檢測(cè)的條帶的特征在于該標(biāo)記為膠態(tài)金、乳膠 粒、彩色的聚苯乙締微粒、酶、巧光顏料、導(dǎo)電聚合物、發(fā)光物質(zhì)或磁性顆粒。 還在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施例中，用于快速檢測(cè)的條帶為免疫層析條。 在另一方面，本發(fā)明提供包括如上所述額外安裝在盒中的用于快速檢測(cè)的條帶的診斷 試劑盒，其中該試劑盒在下部盒中具有導(dǎo)向件和條帶支撐件，在上部盒中具有樣品接收孔， 并且結(jié)果觀察窗放置在對(duì)應(yīng)于該檢測(cè)線和該可變對(duì)照線的位置。 在優(yōu)選的實(shí)施例中，診斷試劑盒的特征在于該試劑盒配備有標(biāo)準(zhǔn)信號(hào)數(shù)據(jù)，該標(biāo)準(zhǔn)信 號(hào)數(shù)據(jù)包含用于含有處于多種濃度的分析物的樣品的檢測(cè)線和可變對(duì)照線的標(biāo)準(zhǔn)比色表。 在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施例中，該診斷試劑盒的特征在于可W通過(guò)用肉眼檢查檢測(cè)線和可 變對(duì)照線的標(biāo)記的信號(hào)是否存在及其強(qiáng)度，來(lái)實(shí)施定性或半定量分析。 仍在另一方面，本發(fā)明提供利用上述的用于快速檢測(cè)的條帶對(duì)樣品中分析物進(jìn)行定量 或定性分析的方法， 該方法包括如下步驟： 將該樣品引入到該結(jié)合墊或在該結(jié)合墊之前定位的墊內(nèi)，并且允許該樣品遷移（步驟 1); 檢測(cè)來(lái)自該檢測(cè)線和該可變對(duì)照線的標(biāo)記的信號(hào)是否存在及其強(qiáng)度（步驟2);和 將該檢測(cè)線和該可變對(duì)照線的信號(hào)強(qiáng)度與標(biāo)準(zhǔn)信號(hào)數(shù)據(jù)進(jìn)行對(duì)比W確定該分析物的 量， 其中通過(guò)使包含不同已知濃度的該分析物的樣品中的每一個(gè)經(jīng)歷步驟1和2來(lái)獲得該 步驟信號(hào)數(shù)據(jù)（步驟3)。 在優(yōu)選的實(shí)施例中，該方法的特征在于，在步驟2中，利用光密度計(jì)檢查來(lái)自該檢測(cè)線 和該可變對(duì)照線的標(biāo)記的信號(hào)是否存在及其信號(hào)強(qiáng)度。 仍在另一方面，本發(fā)明提供用于樣品中一種或多種分析物的定量或定量分析的方法， 包括使該樣品與吸附在固體支撐件上的配體發(fā)生反應(yīng)，其特征在于對(duì)一個(gè)分析物施加了兩 種不同的反應(yīng)機(jī)制。 在優(yōu)選的實(shí)施例中，該方法的特征在于該兩種不同的反應(yīng)機(jī)制為夾層反應(yīng)和競(jìng)爭(zhēng)性反 應(yīng)。 本發(fā)明的有利效應(yīng) 因?yàn)楸景l(fā)明的用于快速檢測(cè)的條帶具有可變對(duì)照線，所W由于鉤效應(yīng)克服分析物在定 量分析方面的困難并且還利用肉眼W簡(jiǎn)單快速方式進(jìn)行高度可靠的定量分析連同定性分 析是可能的。此外，存在如下作用：分析物的動(dòng)態(tài)范圍可W通過(guò)檢測(cè)線和可變對(duì)照線的互補(bǔ) 效應(yīng)來(lái)改進(jìn)。
【附圖說(shuō)明】 圖1是示出了用于典型的免疫層析法中的分析條的橫截面視圖的示意圖； 圖2是示出了用于本發(fā)明的免疫層析法中的分析條的示意圖； 圖3是示出了在引入樣品之前和之后，在本