叔壬基苯基酸（商品名"TritonN"系列）等。運些表面活性 劑可W單獨使用，也可W兩種W上混合使用。非離子性表面活性劑的含量沒有特別限定，但 是可在相對于檢體稀釋液總重量為0.Ol~10. 0重量％的范圍內(nèi)使用，優(yōu)選在0. 1~5. 0 重量％的范圍內(nèi)使用，更優(yōu)選在0. 1~1.0重量％的范圍內(nèi)使用，進一步優(yōu)選在0.3~1.0 重量％的范圍內(nèi)使用。
[0093] 作為本發(fā)明的稀釋液中所用的乙締基類水溶性聚合物，優(yōu)選具有含氧原子和氮原 子的極性基團的乙締基類水溶性聚合物，可W列舉（例如）具有丙締酷胺、甲基丙締酷胺、 二甲基丙締酷胺、二甲基甲基丙締酷胺、乙締基化咯燒酬等乙締基類單體的雙鍵斷裂的結(jié) 構(gòu)單元的聚合物。本發(fā)明的乙締基類水溶性聚合物也可W是乙締醇、醋酸乙締醋、丙締酸燒 基醋等具有含氧原子的極性基團的乙締基類單體W(例如）50摩爾％ ^下、優(yōu)選30摩爾％ W下、特別優(yōu)選15摩爾％W下的比例共聚而成的聚合物。作為本發(fā)明的乙締基類水溶性聚 合物優(yōu)選的具體例子，可W列舉聚乙締基化咯燒酬、二甲基丙締酷胺/乙締基化咯燒酬共 聚物（二甲基丙締酷胺的共聚比例為50摩爾％W下的共聚物）、乙締醇/乙締基化咯燒酬 共聚物（乙締醇的共聚比例為50摩爾％W下的共聚物）、醋酸乙締醋/乙締基化咯燒酬共 聚物（醋酸乙締醋的共聚比例為20摩爾％W下的共聚物）等非離子性的共聚物。運些乙 締基類水溶性聚合物的分子量為1萬~100萬、更優(yōu)選為10萬~100萬、進一步優(yōu)選為20 萬~50萬。乙締基類水溶性聚合物的含量沒有特別限定，但相對于樣本稀釋液整體的重量 可W在0.01~5.0重量％的范圍內(nèi)使用，優(yōu)選在0. 1~2.0重量％的范圍內(nèi)使用。
[0094] 優(yōu)選的樣本稀釋液的組成為含有0. 1~1重量％的非離子表面活性劑、0. 05~ 0. 2M的堿金屬無機鹽、抑為7~11的緩沖劑、W及0. 1~1重量％的乙締基類水溶性聚 合物的水溶液。更優(yōu)選為含有0. 1~1重量％的HLB值為13~18的非離子表面活性劑、 0. 05~0. 2M的堿金屬無機鹽、抑為7~11的Tris緩沖劑或Good'S緩沖劑、W及具有含 氧原子和氮原子的極性基團的0. 1~1重量％的乙締基類水溶性聚合物的水溶液。
[0095]本發(fā)明的樣本稀釋液可W用來稀釋鼻拭子等粘度高、含固態(tài)物質(zhì)的樣本。通過用 樣本稀釋液稀釋樣本，防止樣本堵塞層析介質(zhì)并使樣本的移動變得容易。另外，也可W防止 溶解在樣本中的成分在層析介質(zhì)上的非特異性吸附。
[0096]本發(fā)明的樣本稀釋液也可W作為用W展開液量少的樣本的展開液使用。在樣本的 液量少、供給到試樣添加部的樣本無法到達吸收部的情況下，通過追加供給本發(fā)明的樣本 稀釋液，從而確保樣本通過判定部位并到達吸收部。
[0097]樣本稀釋液與免疫層析裝置一起包含在本發(fā)明的檢測試劑盒中。
[0098]本發(fā)明的RSV檢測用試劑盒至少含有免疫層析裝置和樣本稀釋液，并任選包含標 記試劑溶液。
[0099]此外，本發(fā)明的檢測用試劑盒根據(jù)需要也可W包含樣本取樣裝置、樣本過濾器、陽 性對照和陰性對照。樣本取樣裝置可根據(jù)樣本的性質(zhì)適當選擇，可W列舉（例如）消毒棉 簽等。樣本過濾器用于通過（例如）對采集的樣本本身或者用樣本稀釋液稀釋的樣本進行 過濾來除去固態(tài)物質(zhì)。 陽100] 下面說明本發(fā)明的檢測RSV的原理。 陽101] 若將含有RSV抗原的樣本液供給到免疫層析裝置的試樣添加部，則樣本液通過毛 細管現(xiàn)象到達層析介質(zhì)，并沿層析介質(zhì)移動。 陽102] 通過在供給前將樣本液與標記試劑溶液混合、或者使保持在標記試劑保持部的標 記試劑溶解于樣本液、或者在樣本液供給后供給標記試劑溶液，從而使樣本液所含的RSV 抗原與標記試劑結(jié)合。 陽103]RSV抗原與標記試劑一起通過層析介質(zhì)的判定部位。通過樣本液與抗體的接觸，固 定的抗F蛋白抗體或抗N蛋白抗體將RSV抗原捕獲在判定部位。 陽104] 剩余的樣本和標記試劑進一步沿著層析介質(zhì)移動從而在吸收部被吸收。
[0105]樣本含有RSV抗原的情況下，與標記試劑結(jié)合的F蛋白抗原和/或N蛋白抗原在 判定部位被捕獲，因此在判定部位出現(xiàn)肉眼可見的信號。目p，判定部位出現(xiàn)的明顯的信號意 味著樣本含有RSV，并將樣本判定為陽性。
[0106] 另一方面，在判定部位與標記試劑結(jié)合的RSV抗原未被W充分的量捕獲的情況 下，判定部位不出現(xiàn)信號。運通常意味著樣本不含RSV，或者即使含RSV，其量也在檢測限W下，并將樣本判定為陰性。 陽107] 根據(jù)本發(fā)明的RSV檢測方法的具體步驟示例如下。
[0108] (1)向在判定部位固定有與RSV的F蛋白特異性結(jié)合的抗體和與RSV的N蛋白特 異性結(jié)合的抗體的免疫層析裝置供給樣本液；
[0109] (2)與樣本液同時或之后向免疫層析裝置供給標記試劑溶液；
[0110] (3)使樣本與標記試劑一起通過所述判定部位，并使樣本與固定在判定部位的抗 體接觸； 陽111] (4)在判定部位，檢測標記試劑引起的顯色； 陽11引 妨在檢測到顯色的情況下將樣本判定為"RSV陽性"，在未檢測到顯色的情況下 將樣本判定為"RSV陰性"。
[0113] 需要說明的是，步驟（1)中，樣本液也可W是用樣本稀釋液稀釋的樣本。另外，步 驟（2)是任選的，例如在免疫層析裝置中設(shè)置有標記試劑保持部的情況下可W省略。
[0114] 利用上述步驟可W進行樣本中所含RSV的檢測。特別是，與利用傳統(tǒng)的免疫層析 法的檢測方法相比，通過利用上述的步驟進行RSV的檢測，可W大幅提高病毒的檢測率。
[0115] 下面，利用實施例對本發(fā)明更具體地進行說明，但本發(fā)明并不受運些實施例的任 何限定。 陽116] 實施例 陽117](實施例1) 陽11引 （1)抗RSV單克隆抗體的制作
[0119] 用純化RSV株或RSV感染細胞對BALB/c小鼠免疫，并通過采血確認針對RSV的F 蛋白或N蛋白的抗體值的上升。從確認抗體值上升的小鼠上摘出脾臟，通過凱勒等人的方 法化Ohleretal.，化Uire，vol，256，p495-497(1975))使之與小鼠骨髓瘤細胞融合。
[0120] 將所得融合細胞（雜交瘤）在37°C的恒溫箱中培養(yǎng)，通過使用固定了RSV的F蛋 白抗原或N蛋白抗原的板的ELISA來確認培養(yǎng)上清液的抗體值。針對分別來源于RSV的亞 型A和B的F蛋白或N蛋白，選擇確認了培養(yǎng)上清液中的抗體值上升的雜交瘤。進一步進 行克隆W純化（單克隆化）雜交瘤。 陽121] 將單克隆化的抗體產(chǎn)生雜交瘤腹腔內(nèi)給予進行了姥較燒處理的BALB/c小鼠，約2 周后，采集含有抗體的腹水。使用ProteinA柱層析（アアシ卡厶公司制造）利用親和純化 從所得腹水中純化IgG,從而得到抗F蛋白單克隆抗體或抗N蛋白單克隆抗體。 陽122] (2)層析介質(zhì)的判定部位的制作 陽123] 將上述（1)制作的抗F蛋白單克隆抗體或抗N蛋白單克隆抗體W重量比1:1混合， 并用含5重量％異丙醇的憐酸緩沖液（pH7. 4)稀釋到0. 5mg/mL的濃度從而制作抗體溶液。 [0124] 使用抗體涂布機度ioDot公司制造）將上述抗體溶液涂布到25X2. 5cm的硝化纖 維素膜（Sy術(shù)六公司制造：HF120)上，并在50°C下干燥30分鐘，然后在室溫下干燥過夜， 從而在層析介質(zhì)上制作判定部位。 陽125] (3)標記試劑溶液的制作
[0126] 使用與用于判定部位制作的抗F蛋白抗體或抗N蛋白抗體不同的從克隆所獲得的 抗F蛋白抗體或抗N蛋白抗體，從而進行標記試劑的制作。 陽127] 向0. 5血金膠體懸濁液（田中貴金屬工業(yè)社制造：平均粒徑40nm)中加入0. 1血 用肥陽S緩沖液（pH7. 5)稀釋到0.Img/mL濃度的抗F蛋白單克隆抗體或抗N蛋白單克隆 抗體，在室溫下靜置10分鐘。接著，加入0.ImL含10重量％牛血清白蛋白的肥陽S緩沖液 (pH7. 5)，并在室溫下靜置10分鐘。其后，充分攬拌，然后W8000Xg進行離屯、分離15分鐘， 除去上清液后，加入0.ImL含1重量％牛血清白蛋白的憐酸緩沖液（pH7. 4)，從而制作含有 抗F蛋白抗體的標記試劑溶液或含有抗N蛋白抗體的標記試劑溶液。 陽12引 （4)免疫層析裝置的制作
[0129] 將如上制作的含有抗F蛋白抗體的標記試劑溶液和含有抗N蛋白抗體的標記試劑 溶液W體積比1:1混合。向200yL混合后的標記試劑溶液中加入IOOiiL25重量％的海 藻糖水溶液，將所得的溶液均勻添加到16mmX100mm的玻璃纖維墊（Sy術(shù)六公司制造） 上，然后通過真空干燥機干燥，從而制作標記試劑保持部。然后，將具有判定部位的層析介 質(zhì)、標記試劑保持部、作為試樣添加部的玻璃纖維制的樣本墊、用來吸收剩余的樣本和標記 物的吸收墊粘貼在塑料制的底板上。并且用切割機切成寬5mm從而制成免疫層析裝置。 陽130] (5)樣本稀釋液的制作 陽131] 制作由0.