復(fù)方感冒靈流膏化學(xué)成分標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜及構(gòu)建方法、應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及復(fù)方感冒靈顆粒的質(zhì)量檢測領(lǐng)域，具體而言，涉及一種復(fù)方感冒靈流 膏的化學(xué)成分標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜及其構(gòu)建方法、應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 復(fù)方感冒靈顆粒應(yīng)用非常普遍，主要用于辛涼解表，清熱解毒，風(fēng)熱感冒及溫病之 發(fā)熱，微惡風(fēng)寒，頭身痛，口干而渴，鼻塞涕濁，咽喉紅腫疼痛，咳嗽，痰黃粘稠等病癥，尤其 對治療感冒、頭疼、發(fā)熱等身體狀況有奇效。而且采用中藥為原料，不會增加腸胃負(fù)擔(dān)，尤其 不會對肝有損害，相比于容易致人體產(chǎn)生抗藥性，使得病人對藥物產(chǎn)生依賴性，還會對機(jī)體 功能有不同程度的損害的西藥，其具有顯著的功效。
[0003] 眾所周知，復(fù)方感冒靈顆粒主要采用山銀花、五指柑、野菊花、三叉苦、南板藍(lán)根、 崗梅、對乙酰氨基酚、馬來酸氯苯那敏以及咖啡因制得，為了保證復(fù)方感冒靈顆粒的出廠質(zhì) 量均會建立一定的質(zhì)量監(jiān)控體系，但是現(xiàn)有技術(shù)中一般是采用滴定法檢測對乙酰氨基酚的 含量，或者采用簡單的薄層色譜法檢測對乙酰氨基酚以及馬來酸氯苯那敏的含量，但是這 些質(zhì)量檢測方法不夠完善，僅僅檢測了原料組成，對各個(gè)原料中所含的中藥有效成分沒有 進(jìn)行有效的測定，導(dǎo)致其每個(gè)批次的藥效不夠穩(wěn)定，質(zhì)量上有所差異，從而會間接影響到復(fù) 方感冒靈顆粒藥品的推廣力度，以及影響其對患者病情的治療程度，因此如何建立一套完 善健全的復(fù)方感冒靈顆粒的質(zhì)量體系是現(xiàn)有技術(shù)中亟待解決的技術(shù)問題。
[0004] 有鑒于此，特提出本發(fā)明。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的第一目的在于提供一種復(fù)方感冒靈流膏的化學(xué)成分標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的構(gòu) 建方法，該方法切實(shí)解決了現(xiàn)有技術(shù)中存在的諸多技術(shù)問題，具有方法簡單、操作方便，實(shí) 現(xiàn)了全方位多方面的檢測復(fù)方感冒顆粒，并實(shí)現(xiàn)了中間過程的質(zhì)量監(jiān)控，提高了復(fù)方感冒 靈顆粒整體的品質(zhì)，完善了質(zhì)量檢測體系，利于藥品本身的擴(kuò)大應(yīng)用范圍等優(yōu)點(diǎn)。
[0006] 本發(fā)明的第二目的在于提供由上述構(gòu)建方法得到的復(fù)方感冒靈流膏的化學(xué)成分 標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，該指紋圖譜能夠清晰的反應(yīng)出復(fù)方感冒顆粒各有效成分的特征峰的出峰位 置，準(zhǔn)確性以及清晰度很高，能夠完善復(fù)方感冒靈顆粒的質(zhì)量控制體系，并且提高了藥物的 質(zhì)量后也有利于擴(kuò)大市場，提高產(chǎn)品的知名度，更能加快患者病情好轉(zhuǎn)的速度，可謂益處多 多。
[0007] 為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，特采用以下技術(shù)方案：
[0008] 本發(fā)明實(shí)施例提供了一種復(fù)方感冒靈流膏的化學(xué)成分指紋圖譜的構(gòu)建方法，包 括：(A)將蒙花苷、木犀草苷以及綠原酸三種對照品溶液注入液相色譜儀并記錄出峰位置， 液相色譜儀的操作條件為：流動相A為乙腈，相B為磷酸水溶液，流速控制在0. 8-1. 2ml/ min，柱溫30-35°C，檢測波長控制在320-330nm ;
[0009] (B)將復(fù)方感冒靈流膏制成標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液在上述液相色譜操作條件下注入進(jìn)行梯 度洗脫得到化學(xué)成分標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。
[0010] 現(xiàn)有技術(shù)中，都是采用高效液相色譜或者化學(xué)滴定法將原料成分比如對乙酰氨基 酚、馬來酸氯苯那敏的含量進(jìn)行測定，但是這種方法僅僅檢測了原料組成，對各個(gè)原料中所 含的化學(xué)有效成分沒有進(jìn)行有效的測定，其實(shí)真正產(chǎn)生藥效的是每一種原料中所含的有效 成分，化學(xué)有效成分含量的多與少也是復(fù)方感冒靈顆粒質(zhì)量監(jiān)控的關(guān)鍵，但是現(xiàn)有技術(shù)的 質(zhì)量檢測體系往往忽略了這一點(diǎn)，導(dǎo)致其質(zhì)量檢測不夠嚴(yán)格，從而不能充分保證藥品的藥 效。本發(fā)明的方案恰恰解決了這一問題的出現(xiàn)，通過將山銀花、五指柑、野菊花、三叉苦、南 板藍(lán)根、崗梅這些原料中所含的主要化學(xué)有效成分蒙花苷、木犀草苷以及綠原酸進(jìn)行定性 檢測，從而完善質(zhì)量體系，對這三種有效成分的檢測正好彌補(bǔ)了現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)空白，而 且本發(fā)明創(chuàng)造性的針對復(fù)方感冒靈流膏建立質(zhì)量體系，并不是像現(xiàn)有技術(shù)中針對最終產(chǎn)品 復(fù)方感冒靈顆粒進(jìn)行質(zhì)量檢測，顯然本發(fā)明通過對藥品生產(chǎn)的中間過程進(jìn)行質(zhì)量把控可以 更有利于配方以及工藝的隨時(shí)調(diào)整，更具有現(xiàn)實(shí)意義。
[0011] 另外，本發(fā)明通過具體實(shí)踐得知出較優(yōu)的液相色譜梯度洗脫的工藝條件，這些工 藝條件均是發(fā)明人通過大量的創(chuàng)造性實(shí)驗(yàn)得出，并不是隨便選擇的，通過液相色譜從而最 終知曉蒙花苷、木犀草苷以及綠原酸三種對照品溶液的具體出峰位置，這三種對照品溶液 可以混合進(jìn)樣也可以單獨(dú)進(jìn)樣，根據(jù)實(shí)際條件自行選擇。然后將復(fù)方感冒靈流膏制成標(biāo)準(zhǔn) 樣品溶液也在該梯度洗脫的操作條件下注入液相色譜，得到完整的復(fù)方感冒靈流膏的化 學(xué)成分指紋圖譜，這個(gè)指紋圖譜上除了常規(guī)的復(fù)方感冒靈顆粒的原料的出峰位置，還創(chuàng)造 性的增加了蒙花苷、木犀草苷以及綠原酸這三個(gè)峰，從而在后續(xù)檢測樣品時(shí)，更能準(zhǔn)確的 把關(guān)藥品的質(zhì)量，保證復(fù)方感冒靈顆粒的質(zhì)量的穩(wěn)定性。為了使得得到的化學(xué)成分指紋 圖譜更加準(zhǔn)確，本發(fā)明進(jìn)一步優(yōu)化了色譜條件，更優(yōu)的液相色譜操作條件為：流速控制在 0· 9-1.0ml/min，柱溫 32-33°C，檢測波長控制在 325-326nm。
[0012] 進(jìn)一步的，蒙花苷、木犀草苷以及綠原酸對照品溶液采用甲醇作為溶劑進(jìn)行溶解 制得，蒙花苷對照品溶液的濃度最好控制在25-30 μ g/ml，木犀草苷對照品溶液的濃度最好 控制在40-50 μ g/ml，綠原酸對照品溶液的濃度最好控制在0. 5-0. 6mg/ml，相B的磷酸水溶 液的質(zhì)量百分比濃度控制在〇. 4-0. 5%，濃度不能太高，這樣在后續(xù)進(jìn)行洗脫操作時(shí)保證溶 液均一穩(wěn)定的通過色譜柱。
[0013] 本發(fā)明所采用的檢測樣品復(fù)方感冒靈流膏為復(fù)方感冒靈顆粒生產(chǎn)過程中的中間 產(chǎn)品，其主要制備方法為將山銀花、五指柑、野菊花、三叉苦、南板藍(lán)根、崗梅混合后反復(fù)煎 煮1-2次，合并煎液濃縮即得，得到的流膏再加其他三味藥以及白糖等輔料，干燥制成最終 顆粒產(chǎn)品。每次煎煮的時(shí)間最好控制在l_2h，優(yōu)選1. 5-1. 8h，一般煎煮兩次第一次2h，第二 次1. 5h，煎液合并后過濾濃縮，加乙醇使其含乙醇量達(dá)60-65 %，攪勻、靜置、過濾濃縮得到 流膏，通過對流膏的質(zhì)量檢測實(shí)現(xiàn)生產(chǎn)中間過程的質(zhì)量監(jiān)控，現(xiàn)有技術(shù)中還沒有針對復(fù)方 感冒靈流膏建立的質(zhì)量檢測方法，本發(fā)明尚屬首創(chuàng)。
[0014] 檢測之前，將復(fù)方感冒靈流膏與甲醇溶液混合攪拌均勻，加熱提取、定量、過濾制 成標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液，其中加熱提取的操作溫度控制在90°C以上，加熱提取的操作時(shí)間控制在 1-2h，具體操作時(shí)，先精密稱取復(fù)方感冒靈流膏1. Og至錐形瓶中，精密加入50ml的50%甲 醇溶液，稱重，至90°C以上水浴鍋回流l_2h，冷卻，重新稱重，并以50%甲醇溶液補(bǔ)重定容， 搖勻，濾過，即得。
[0015] 采用本發(fā)明上述構(gòu)建方法得到的復(fù)方感冒靈流膏化學(xué)成分標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜能夠清 晰的反應(yīng)出復(fù)方感冒顆粒各有效成分的特征峰出峰位置，準(zhǔn)確性以及清晰度很高，能夠完 善復(fù)方感冒靈的質(zhì)量控制體系，提高了藥物的質(zhì)量也有利于擴(kuò)大市場，提高產(chǎn)品的知名度， 更能加快患者病情好轉(zhuǎn)的速度，可謂益處多多。
[0016] 還有，復(fù)方感冒靈流膏的化學(xué)成分標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜在復(fù)方感冒靈顆粒的質(zhì)量檢測方 面具有很好的應(yīng)用，具體應(yīng)用時(shí)將復(fù)方感冒靈流膏制成待測品（樣品）溶液在上述優(yōu)化后 的最佳液相色譜操作條件下進(jìn)行梯度洗脫得到待測品化學(xué)成分指紋圖譜，并與化學(xué)成分標(biāo) 準(zhǔn)指紋圖譜進(jìn)行對比，以確定其產(chǎn)品是否合格。
[0017] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為：
[0018] (1)本發(fā)明創(chuàng)造性的將蒙花苷、木犀草苷以及綠原酸這三種有效成分的檢測納入 質(zhì)量體系，通過增加這三個(gè)指標(biāo)檢測，從而在后續(xù)檢測樣品時(shí)，更能準(zhǔn)確的把關(guān)藥品的質(zhì) 量，保證復(fù)方感冒靈顆粒的質(zhì)量的穩(wěn)定性，得到的復(fù)方感冒靈流膏的化學(xué)成分指紋圖譜更 加清晰完整；
[0019] (2)本發(fā)明通過具體實(shí)踐得知了較優(yōu)的液相色譜梯度洗脫的工藝條件，這些工藝 條件均是發(fā)明人通過大量的創(chuàng)造性實(shí)驗(yàn)得出來的，并不是隨便選擇的，在最佳的工藝條件 下操作更能提高結(jié)果的準(zhǔn)確性，完善整個(gè)藥品的質(zhì)量檢測體系；
[0020] (3)本發(fā)明還創(chuàng)造性的第一次提出了針對復(fù)方感冒靈流膏構(gòu)建化學(xué)成分指紋圖 譜，打破了現(xiàn)有技術(shù)只是針對最終產(chǎn)品構(gòu)建指紋圖譜的傳統(tǒng)，具有開拓性的意義；
[0021] (4)本發(fā)明的構(gòu)建方法操作成本較低，簡單方便，不用專業(yè)人員也可進(jìn)行操作，所 涉及的實(shí)驗(yàn)儀器價(jià)格也比較平民化，人力成本以及操作成本都比較低，整個(gè)測定過程中所 涉及的試劑均為常見化工原料，量大價(jià)低，原料易得；
[0022] (5)本發(fā)明所用的各種試劑對環(huán)境友好、不含重金屬和有害成分，對人體健康沒有 傷害，不會給操作人員帶來任何身體上的危害，非常環(huán)保。
【附圖說明】
[0023] 為了更清楚地說明本發(fā)明實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，以下將對實(shí)施例或現(xiàn) 有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹。
[0024] 圖1為本發(fā)明實(shí)施例一的不同檢測波長的條件下標(biāo)準(zhǔn)溶液對應(yīng)的HPLC圖譜；
[0025] 圖2為本發(fā)明實(shí)施例一的不同流動相的條件下標(biāo)準(zhǔn)溶液的HPLC圖譜；
[0026] 圖3為本發(fā)明實(shí)施例一的對照品溶液與標(biāo)準(zhǔn)溶液的HPLC圖譜對比；
[0027] 圖4為本發(fā)明實(shí)施例一的復(fù)方感冒靈流膏的化學(xué)成分指紋圖譜；
[0028] 圖5為本發(fā)明實(shí)驗(yàn)例一的十批復(fù)方感冒靈顆粒流膏樣品的HPLC色譜圖；
[0029] 圖6為本發(fā)明實(shí)驗(yàn)例一的十批復(fù)方感冒靈顆粒流膏樣品經(jīng)過校正后得到的化學(xué) 指紋圖譜。
【具體實(shí)施方式】
[0030] 下面將結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明的實(shí)施方案進(jìn)行詳細(xì)描述，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員將會 理解，下列實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明，而不應(yīng)視為限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例中未注明具體 條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為 可以通過市售購買獲得的常規(guī)產(chǎn)品。
[0031] 實(shí)施例1
[0032] 1)分別精密稱取適量蒙花苷對照品、木犀草苷對照品和綠原酸對照品，用甲醇 溶解并超聲處理直至完全溶解，分別制成每lml