含蒙花苷25 μ g、木犀草苷40 μ g、綠原酸 〇· 5mg的對照品溶液；
[0033] 2)分別精密稱取復方感冒靈流膏1. 0g至錐形瓶中，精密加入50ml的質量百分比 濃度為50%的甲醇溶液，稱重，至90°C水浴鍋回流lh，冷卻，重新稱重，并以50%甲醇溶液 補重，搖勻，濾過，即得標準樣品溶液，其中復方感冒靈流膏的制備方法包括：將山銀花、五 指柑、野菊花、三叉苦、南板藍根、崗梅混合后反復煎煮1次，煎煮的時間控制在l_2h，再將 煎液濃縮即可；
[0034] 3)液相色譜條件的確定
[0035] a.波長的選擇：Kromasil C18色譜柱（250_X4. 6mm, 5 μm);流動相為乙腈 (八)-0.4%的磷酸水溶液出）梯度洗脫。柱溫：30°(：;流速：1.0111171^11;進樣量10以匕梯 度程序如下表1 :
[0036] 表1梯度洗脫程序
[0038] 將標準樣品溶液采用HPLC法檢測，且檢測波長在200-350nm之間，以15nm為單 位間隔，以不同波長對同一樣品進樣，以色譜峰數、分離度等評價，所得結果見附圖1，從圖 中可以看出檢測波長為326nm時，色譜峰數較多，主要色譜峰面積較高，雜質峰面積相對較 低，指紋特征明顯，故選定為最優(yōu)波長，結合本發(fā)明的主要原料山銀花、野菊花等藥材的主 要有效成分吸收波長在320-330nm之間，更優(yōu)的還可以選擇波長為325-326nm ;
[0039] b.流動相的選擇：由于復方感冒流膏中的野菊花、山銀花等藥材所含有效成分略 偏酸性，流動相應略偏酸，山銀花中主要成分的HPLC分尚一般米用有機相為乙腈，水相為 0. 4%磷酸溶液組合。由于色譜峰較多，為更好確保分離度和峰形，設置了五組不同流動相 比例進行梯度條件的優(yōu)化，具體流動相比例參考下表2 ;
[0040] 表2梯度洗脫程序 [0041 ]
[0043] 通過采用不同的流動相比例將標準溶液進行洗脫，得到的譜圖見附圖2，從圖中可 以看出，使用梯度4進行洗脫，得到的圖譜效果較好，基線平穩(wěn)，譜峰分離較好，峰數較多， 色譜峰高適中，故選擇梯度4做為流動相洗脫梯度。
[0044] c.參照物的選擇
[0045] 將本發(fā)明的三種對照品溶液混合后與標準溶液分別注入液相色譜10 μ 1，將混合 對照液與標準溶液的色譜圖進行比較，具體圖譜見附圖3,從圖3中可以看出，綠原酸、木 犀草苷和蒙花苷色譜峰在色譜圖中位置適中，吸收強度大，分離良好，符合參照物選擇的標 準。
[0046] 各個操作條件以及參照物均確定的條件下，將標準溶液注入液相色譜儀，得到的 色譜圖附圖4即為復方感冒靈流膏的化學指紋圖譜，可以看出其指紋圖譜分別呈現出與參 照物色譜峰保留時間相同的色譜峰。
[0047] 附圖4中共有10個峰，通過與對照品比對，峰2為綠原酸，峰5為木犀草苷，峰10 為蒙花苷，峰1為山銀花特征峰，峰4、6為野菊花特征峰，峰3、7為山銀花、野菊花共有特征 峰；峰8、9為山銀花、野菊花、崗梅、五指柑共有特征峰，后續(xù)進行質量檢測時樣品需要與該 指紋圖譜的近似度達到0. 9以上才算合格產品。
[0048] 實施例2
[0049] 本實施例的其他操作步驟與實施例1基本相同，只是色譜的流動相為乙腈 (八)-0.5%的磷酸水溶液出）梯度洗脫，柱溫：35°(：，流速：0.9111171^11。
[0050] 實施例3
[0051] 本實施例的其他操作步驟與實施例1基本相同，只是色譜的流動相為乙腈 (八)-0.5%的磷酸水溶液出）梯度洗脫，柱溫：32°(：，流速：0.8111171^11。
[0052] 實施例4
[0053] 本實施例的其他操作步驟與實施例1基本相同，只是色譜的流動相為乙腈 (A) -0. 5 %的磷酸水溶液（B)梯度洗脫，柱溫：33°C，流速：1. 2mL/min。
[0054] 實施例5
[0055] 本實施例的其他操作步驟與實施例1基本相同，只是色譜的流動相為乙腈 (A) -0. 5 %的磷酸水溶液（B)梯度洗脫，柱溫：33°C，流速：1. 2mL/min。
[0056] 實施例6
[0057] 本實施例的其他操作步驟與實施例1基本相同，只是制備對照品溶液時，分別制 成每lml含蒙花苷30 μ g、木犀草苷50 μ g、綠原酸0. 6mg的對照品溶液。
[0058] 實施例7
[0059] 本實施例的其他操作步驟與實施例1基本相同，只是復方感冒靈流膏的制備方法 為：將山銀花、五指柑、野菊花、三叉苦、南板藍根、崗梅混合后反復煎煮2次，每次煎煮的時 間控制在1. 5-1. 8h，加乙醇使其含乙醇量達60-65%，攪勻、靜置、過濾濃縮即得，制標準溶 液過程中95°C水浴鍋回流2h。
[0060] 實施例2-7通過實驗發(fā)現最佳洗脫條件與實施例1基本相同，說明本發(fā)明的洗脫 條件通過反復實踐已經達到在最優(yōu)條件下操作，這種條件的選擇也是發(fā)明人通過反復實驗 付出大量的創(chuàng)造性勞動獲得，通過現有技術的簡單選擇是絕對得不到的，最終得到的化學 成分指紋圖譜與實施例1得到的圖譜也基本類似。
[0061] 實驗例1
[0062] 取復方感冒靈顆粒流膏樣品，共計10批，按照實施例1的制備方法制備，色譜條件 測定，記錄色譜圖（見圖5)，色譜圖扣除0~3. 0min(溶劑峰），生成的圖譜與實施例1的 化學指紋圖譜進行比對（見圖6)，同時計算相似度，所得結果見表3。
[0063] 表3不同批次圖譜相似度評價

[0065] 從表3的試驗結果可以看出，大批的工藝生產的試制產品與本發(fā)明的化學指紋圖 譜的相似度幾乎接近1〇〇%，說明本發(fā)明的化學指紋圖譜應用效果好，可以很好的達到控制 產品質量的目的，從圖5-6中也可以看出，十批供試品的化學指紋圖譜與本發(fā)明的化學指 紋圖譜非常類似，精密度以及穩(wěn)定性均較好。
[0066] 盡管已用具體實施例來說明和描述了本發(fā)明，然而應意識到，在不背離本發(fā)明的 精神和范圍的情況下可以作出許多其它的更改和修改。因此，這意味著在所附權利要求中 包括屬于本發(fā)明范圍內的所有這些變化和修改。
【主權項】
1. 一種復方感冒靈流膏的化學成分標準指紋圖譜的構建方法，其特征在于，包括如下 步驟： (A) 將蒙花苷、木犀草苷以及綠原酸三種對照品溶液注入液相色譜儀并記錄出峰位置， 液相色譜儀的操作條件為：流動相A為乙腈，相B為磷酸水溶液，流速控制在0. 8-1. 2ml/ min，柱溫30-35°C，檢測波長控制在320-330nm; (B) 將復方感冒靈流膏制成標準樣品溶液在上述液相色譜操作條件下注入進行梯度洗 脫得到化學成分標準指紋圖譜。2. 根據權利要求1所述的一種復方感冒靈流膏的化學成分標準指紋圖譜的構建方法， 其特征在于，所述步驟（A)中，蒙花苷、木犀草苷以及綠原酸分別采用甲醇溶解制成對照品 溶液，蒙花苷對照品溶液的濃度控制在25-30μg/ml，木犀草苷對照品溶液的濃度控制在 40-50μg/ml，綠原酸對照品溶液的濃度控制在0. 5-0. 6mg/ml。3. 根據權利要求1所述的一種復方感冒靈流膏的化學成分標準指紋圖譜的構建方法， 其特征在于，所述步驟（A)中，相B的磷酸水溶液的質量百分比濃度控制在0. 4-0. 5%。4. 根據權利要求1所述的一種復方感冒靈流膏的化學成分標準指紋圖譜的構建方法， 其特征在于，所述步驟（A)中，流速控制在0. 9-1.Oml/min，柱溫32-33°C，檢測波長控制在 325-326nm〇5. 根據權利要求1所述的一種復方感冒靈流膏的化學成分標準指紋圖譜的構建方法， 其特征在于，所述步驟（B)中，所述復方感冒靈流膏的制備方法包括：將山銀花、五指柑、野 菊花、三叉苦、南板藍根、崗梅混合后反復煎煮1-2次，合并煎液濃縮即得。6. 根據權利要求5所述的一種復方感冒靈流膏的化學成分標準指紋圖譜的構建方法， 其特征在于，所述步驟（B)中，每次煎煮的時間控制在l-2h，優(yōu)選1. 5-1. 8h。7. 根據權利要求5所述的一種復方感冒靈流膏的化學成分標準指紋圖譜的構建方法， 其特征在于，所述步驟（B)中，將復方感冒靈流膏與甲醇溶液混合攪拌均勻，加熱提取、定 量、過濾即得標準樣品溶液； 優(yōu)選地，所述步驟（B)中，加熱提取的操作溫度控制在90°C以上。8. 根據權利要求7所述的一種復方感冒靈流膏的化學成分標準指紋圖譜的構建方法， 其特征在于，所述步驟（B)中，加熱提取的操作時間控制在l-2h。9. 采用權利要求1-8任一項所述的構建方法構建得到的復方感冒靈流膏化學成分標 準指紋圖譜。10. 權利要求9所述的復方感冒靈流膏的化學成分標準指紋圖譜在復方感冒靈的質量 檢測方面的應用； 優(yōu)選的，所述應用為將復方感冒靈流膏制成待測品溶液在權利要求1所述的液相色譜 操作條件下進行梯度洗脫得到待測品化學成分指紋圖譜，并與所述的化學成分標準指紋圖 譜進行對比。
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種復方感冒靈流膏的化學成分指紋圖譜的構建方法，包括如下步驟：(A)將蒙花苷、木犀草苷以及綠原酸三種對照品溶液注入液相色譜儀并記錄出峰位置，液相色譜儀的操作條件為：流動相A為乙腈，相B為磷酸水溶液，流速控制在0.8-1.2ml/min，柱溫30-35℃，檢測波長控制在320-330nm；(B)將復方感冒靈流膏制成標準樣品溶液在上述液相色譜操作條件下注入進行梯度洗脫得到化學成分指紋圖譜。本發(fā)明實施例得到的化學成分指紋圖譜能夠清晰的反應出復方感冒顆粒各有效成分的特征峰出峰位置，準確性以及清晰度很高，能夠完善復方感冒靈顆粒的質量控制體系。
【IPC分類】G01N30/86
【公開號】CN105353063
【申請?zhí)枴緾N201510888682
【發(fā)明人】陳海剛, 龔小兵, 符國成, 薛清香
【申請人】華潤三九（郴州）制藥有限公司
【公開日】2016年2月24日
【申請日】2015年12月7日