用于慢性阻塞性肺疾?。╟opd）的診斷和預(yù)后的方法
【專利說明】用于慢性阻塞性肺疾?。–OPD)的診斷和預(yù)后的方法
[0001] 本發(fā)明涉及慢性阻塞性肺疾?。–0PD)的評(píng)價(jià)和治療。
[0002] 慢性阻塞性肺疾病（C0PD)是以慢性氣道炎癥和肺氣腫為特征的肺病，其引起不 能完全可逆的氣道受限。炎性反應(yīng)隨著疾病的嚴(yán)重度而增加，但是對(duì)治療響應(yīng)差，并且盡管 已經(jīng)證實(shí)糖皮質(zhì)激素類固醇是用于治療哮喘的非常有效的抗炎藥，但由于患者對(duì)它們的敏 感性降低，它們?cè)贑0PD中的治療價(jià)值有限。
[0003] 雖然，歷史觀點(diǎn)認(rèn)為C0PD的發(fā)病機(jī)制是由于異常的先天反應(yīng)，然而，越來越多的 證據(jù)表明有適應(yīng)性免疫系統(tǒng)的參與。在患有疾病的受試者的小氣道和肺組織中檢測(cè)到CD8 和⑶4T細(xì)胞以及B細(xì)胞的數(shù)量增加，并且還已經(jīng)注意到淋巴小結(jié)。（Saetta，DiStefanoet al. 1998 ；Hogg,Chuetal. 2004 ；Sullivan,Simonianetal. 2005；vanderStrate,Postma etal. 2006 ；Brusselle,Demooretal. 2009)〇
[0004] 然而，驅(qū)動(dòng)這一具體免疫反應(yīng)的一種或多種抗原的性質(zhì)仍不清楚。與其他的慢 性炎性疾病一樣，C0PD具有自身免疫功能障礙的標(biāo)志；并且以天然構(gòu)象或以某種方式在 化學(xué)上改變或酶促學(xué)上改變的自身抗原（如高豐度結(jié)構(gòu)蛋白）是潛在的來源。已經(jīng)報(bào)道 了針對(duì)肺上皮細(xì)胞（1(11〇,〇^1^6丨31.2010)、內(nèi)皮細(xì)胞（？681131；[-1308丨￥；[01<：，63(^；[16七 al.2008;Kirkham，Caramorietal.2011)和細(xì)胞外基質(zhì)蛋白如彈性蛋白（Lee，Goswamiet al· 2007)和膠原蛋白（Rinaldi,Lehoucketal· 2012)的抗體。
[0005] 暴露于來自煙草煙霧、工業(yè)空氣污染產(chǎn)物或有機(jī)燃燒產(chǎn)物（如室內(nèi)烹飪煙火）的 活性氧簇（R0S)被視為是發(fā)展成世界范圍內(nèi)影響數(shù)百萬(wàn)人的C0PD的最大風(fēng)險(xiǎn)因素。然 而，并不是所有暴露于這些風(fēng)險(xiǎn)因素的個(gè)體均將會(huì)呈現(xiàn)出癥狀。有趣的是，肺部炎癥甚至 在戒煙后仍然持續(xù)存在，這提示炎癥是由直接暴露于煙霧之外的一些因素驅(qū)動(dòng)。已經(jīng)顯 示有機(jī)燃燒產(chǎn)物（如煙草煙霧）中的組分或組織氧化損傷（如脂質(zhì)過氧化作用）的產(chǎn)物 容易直接修飾蛋白質(zhì)（如存在的反應(yīng)性羰基產(chǎn)物能夠在體外和體內(nèi)不可逆地修飾蛋白質(zhì) (Cerami,Foundsetal. 1997；NichollandBucala1998 ；Nicholl,Stittetal. 1998； Negre-Salvayreetal.2008;Burchametal.2010))或促進(jìn)酶的釋放，其可以（如瓜氨 酸化（Makrygiannakis，Hermanssonetal.2008)，蛋白質(zhì)中的精氨酸殘基酶促轉(zhuǎn)化為瓜氨 酸）。這一性質(zhì)的修飾可導(dǎo)致足夠的構(gòu)象改變，以賦予蛋白質(zhì)潛在的免疫原性，即產(chǎn)生"新抗 原"，造成之前惰性的"自體"蛋白質(zhì)成為有效的自身抗原，由此有助于驅(qū)動(dòng)自身免疫病變， 其可能部分地導(dǎo)致C0PD中觀察到的隨后發(fā)生的肺損傷。
[0006] 1秒鐘用力呼氣量（FEV1)是目前coro疾病嚴(yán)重度和進(jìn)展的最常用的測(cè)量，但是它 與癥狀和其他疾病標(biāo)志沒有很好關(guān)聯(lián)。C〇ro嚴(yán)重度將根據(jù)GOLD程度分類為G0LD1 (輕度）、 G0LD2(中度）或G0LD3(嚴(yán)重）或G0LD4(非常嚴(yán)重）。參見例如GlobalStrategyfor theDiagnosis,ManagementandPreventionofCOPD,GlobalInitiativeforChronic ObstructiveLungDisease(GOLD)2013.http://goldcopd.org/〇
[0007] 我們已經(jīng)吃驚地發(fā)現(xiàn)，在具有不同coro狀態(tài)的患者中對(duì)羰基化波形蛋白（而不是 所調(diào)查的其他豐富結(jié)構(gòu)蛋白/修飾）的抗體反應(yīng)（特別是抗體反應(yīng)的類型）的顯著差異。 我們認(rèn)為抗體反應(yīng)（特別是抗體反應(yīng)的類型）以及重要地是這些抗體類型之間對(duì)羰基化波 形蛋白的反應(yīng)比值代表了COPD的預(yù)后和預(yù)測(cè)因子，以及COPD的治療目標(biāo)。
[0008] 在本說明書中對(duì)表面上是之前出版的文件的列舉或討論并不必然被認(rèn)為是承認(rèn) 該文件是現(xiàn)有技術(shù)的一部分或是公知常識(shí)。
[0009] 本文引用的任何文件的整體通過引用并入本文。
[0010] 本發(fā)明的第一方面提供了幫助分類或確定患有C0PD的受試者的預(yù)后，或幫助選 擇針對(duì)患有coro的受試者的治療策略，或幫助監(jiān)控coro的疾病進(jìn)展或評(píng)價(jià)針對(duì)coro的治 療方案的有效性的方法，所述方法包括評(píng)價(jià)從所述受試者獲得的樣品中對(duì)羰基化波形蛋白 的抗體反應(yīng)的步驟。該方法還可包括利用樣品中對(duì)羰基化波形蛋白的抗體反應(yīng)的信息來選 擇治療方案的步驟。
[0011] 通常，評(píng)價(jià)對(duì)羰基化波形蛋白的抗體反應(yīng)的步驟包括確定對(duì)羰基化波形蛋白的抗 體反應(yīng)中IgG與IgM的比值的步驟?？蛇x的或額外的，可以確定對(duì)羰基化波形蛋白的抗體 反應(yīng)中IgG與IgM的比值。確定對(duì)羰基化波形蛋白的抗體反應(yīng)中IgG或IgGl與IgM的比 值的步驟通?？砂ù_定針對(duì)羰基化波形蛋白的IgM抗體和IgG或IgGl抗體的水平。
[0012] IgG或IgGl與IgM的比值當(dāng)然可以被可選的確定或表示為IgM與IgG或IgGl的 比值，因?yàn)閮烧叻磻?yīng)相同的潛在關(guān)系。如果不表示為IgG或IgGl與IgM的比值，而是表達(dá) 為IgM與IgG或IgGl的比值，當(dāng)然要將數(shù)值和它們變化的方向反轉(zhuǎn)。
[0013] 應(yīng)了解，評(píng)價(jià)對(duì)羰基化波形蛋白的抗體反應(yīng)，任選地（如）確定對(duì)羰基化波形蛋白 的抗體反應(yīng)中IgG與IgM的比值，任選地確定對(duì)羰基化波形蛋白的抗體反應(yīng)中IgGl與IgM 的比值，本身可允許分類或確定患有coro的受試者的預(yù)后，或選擇針對(duì)患有coro的受試者 的治療策略；或更通常，其可以被臨床醫(yī)師用作幫助分類或確定預(yù)后或治療策略的選擇。
[0014] 例如，如果臨床醫(yī)師實(shí)施如由GOLD指南規(guī)定的肺功能評(píng)價(jià)和/或如通過CT掃描 的肺損傷程度的評(píng)價(jià)，這是有用的。參見例如用于示例典型患者評(píng)價(jià)參數(shù)的實(shí)施例1和3。 應(yīng)了解，在分類或確定預(yù)后或治療策略的選擇之前，臨床醫(yī)師將愿意考慮這些或其他因素， 并考慮對(duì)羰基化波形蛋白的抗體反應(yīng)，如對(duì)羰基化波形蛋白的抗體反應(yīng)中IgG與IgM的比 值。
[0015] GOLD評(píng)價(jià)系統(tǒng)對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是熟知的。參見以上提到的GOLD指南。還 參見圖7的概要。
[0016] 確定樣品中對(duì)羰基化波形蛋白的抗體反應(yīng)，如對(duì)羰基化波形蛋白的抗體反應(yīng)中 IgG(或IgGl)與IgM的比值對(duì)于臨床醫(yī)師確定如何控制受試者的coro將是有用的。例如， 由于高的IgG(或IgGl)與IgM的比值（如IgG:IgM比值高于4或4. 5,如5或更高或6或 更高的比值）被認(rèn)為與更晚期的疾?。℅0LD2或G0LD3)相關(guān)，臨床醫(yī)師可利用有關(guān)對(duì)羰基 化波形蛋白的抗體反應(yīng)的信息，如對(duì)羰基化波形蛋白的抗體反應(yīng)中IgG(或IgGl)與IgM的 比值，便于做出關(guān)于受試者的治療的決定。因此例如，如果IgG(或IgGl)與IgM的比值低 (如IgG:IgM比值為4或更低，如3. 5或更低），并且因此指示存在更晚期的COPD(G0LD2或 G0LD3)的可能性較低，可以避免不必要的治療和/或監(jiān)控。相似地，如果（例如）IgG(或 IgGl)與IgM的比值高，并且因此指示存在更晚期的C0PD(G0LD2或G0LD3)的可能性較 高，則更大范圍的治療干預(yù)可能更加合適。即使不適合改變進(jìn)行的治療類型，確定IgG(或 IgGl)與IgM的比值是否高并且因此是否指示存在更晚期的COPD(G0LD2或G0LD3)的可能 性較高可以幫助臨床醫(yī)師確定患者是否需要更多定期監(jiān)控（如更頻繁地就診臨床醫(yī)師，以 評(píng)估疾病進(jìn)展或治療干預(yù)的有效性）。
[0017] 臨床醫(yī)師可以使用關(guān)于對(duì)羰基化波形蛋白的抗體反應(yīng)的信息，如對(duì)羰基化波形蛋 白的抗體反應(yīng)中IgG(或IgGl)與IgM的比值，以有助于做出關(guān)于治療受試者的惡化的決 定。高IgG/IgM比值被認(rèn)為是指示與肺損傷相關(guān)的機(jī)制的發(fā)作。因此，在高IgG:IgM受試 者中，可能需要/選擇治療惡化需要的抗生素之外的額外治療，或甚至是替代治療，從而防 止惡化以及改變的自身免疫狀態(tài)。這些額外治療或替代治療可以是免疫調(diào)節(jié)的/免疫抑制 的以及是補(bǔ)體級(jí)聯(lián)抑制劑，以抑制破壞性自身免疫反應(yīng)的先天和獲得性免疫臂（immunity arm)。這樣的治療的實(shí)例將是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的，并且如下文所示。在低IgG:IgM受 試者中，可不需要/選擇這樣的額外治療或替代治療。
[0018] 如下文還將進(jìn)一步討論的，可用的進(jìn)一步的治療可包括：抗氧化劑治療（如 η-乙酰半脫氨酸BiswasS,HwangJ，KirkhamPA和Rahman1(2012)Therapeutic interventionforOxidativeandCarbonylstressinRespiratorydisease. CurrMedChem-EPubaheadofprint);或抗幾基化劑（anticarbonyls)(如二甲雙 狐；AGE化合物；還參見Negre-Salvayre,A.，C.Coatrieux,etal. (2008).''Advanced lipidperoxidationendproductsinoxidativedamnagetoproteins.Potential roleindiseasesandtherapeuticprospectsforinhibitors.''BritishJournal ofPharmacology153 (1) : 6-20中提到的化合物類型和特定的化合物；并且還參見 Aldinietal(2007)InterventionStrategiestoInhibitProteinCarbonylation byLipoxidation-DerivedReactiveCarbonylsMedicinalResearchReviews 27(6)，817-868中的化合物類型和特定的化合物）。還參見以下實(shí)施例5中討論的化合物 和治療，其于2013年7月出版在雜志Chest中，作者Kirkham和Barnes。
[0019] 在樣品中確定對(duì)羰基化波形蛋白的抗體反應(yīng)，如對(duì)羰基化波形蛋白的抗體反應(yīng)中 IgG(或IgGl)與IgM的比值，被認(rèn)為在監(jiān)控疾病進(jìn)展或評(píng)價(jià)治療方案的有效性方面是有用 的。因此，（例如）C0PDG0LD1受試者的（抗羰基化波形蛋白）IgG:IgM比值從"低"比值至 "高"比值的變化（如上所示）可提供疾病進(jìn)展的早期指示（可能連同其他評(píng)價(jià)，如FEV1和 CT掃描）（其可能指示治療方案應(yīng)該停止或改變，或（例如在臨床試驗(yàn)方面）不被選擇用于 進(jìn)一步的研究）。（例如）C0PDG0LD2或G0LD3受試者的（抗羰基化波形蛋白）IgG:IgM比 值從"高"比值至"低"比值的變化（如上所示）（可能連同其他評(píng)價(jià)，如FEV1和CT掃描）可 提供疾病改善的指示（其可指示治療方案應(yīng)該繼續(xù)，或（例如在臨床試驗(yàn)方面）應(yīng)被選擇 用于進(jìn)一步的研究）。因此，評(píng)價(jià)IgG:IgM比值可用于監(jiān)控該受試者的疾病進(jìn)展和/或針對(duì) 該受試者的治療方案的有效性。這還可以用在臨床試驗(yàn)方面，其中出于監(jiān)管目的（如與治 療劑或治療方案的市場(chǎng)審批相關(guān)，或與成本效益/補(bǔ)償評(píng)價(jià)（reimbursementassessment) 相關(guān)），評(píng)價(jià)治療方案的有效性。因此，（抗羰基化波形蛋白）IgG:IgM比值（例如）可在與 C0PD相關(guān)的臨床試驗(yàn)中用作生物標(biāo)記或替代終點(diǎn)（surrogateendpoint)。
[0020] 從受試者獲得的樣品可以是其中能夠確定抗體反應(yīng)的任何樣品類型。如本領(lǐng)域技 術(shù)人員所熟知的，樣品通常可以是血液或血清樣品，但可以是例如另一種體液或組織，如唾 液或尿液或痰或組織活檢（如肺）。
[0021] 當(dāng)受試者首次顯示出可能的C0PD(例如，或在試驗(yàn)中首次登記）時(shí)；之后以定期間 隔（如每六個(gè)月或每年）或當(dāng)受試者的疾病似乎出現(xiàn)變化時(shí)，可從一個(gè)或多個(gè)受試者獲得 樣品（如在特定治療性方案或治療方案的臨床試驗(yàn)期間）。例如，可以在患有COPD的受試 者經(jīng)歷惡化時(shí)或在其之后立即從受試者獲得樣品。
[0022] 與不具有臨床確認(rèn)的C0PD的已知對(duì)應(yīng)受試者（如健康的不吸煙者）相比，指示 存在更加晚期的COPD(G0LD2或G0LD3或G0LD4)的高可能性的（對(duì)羰基化波形蛋白的抗 體反應(yīng)中）IgG(或IgGl)與IgM的比值可以定義為在患有臨床確認(rèn)的COPDG0LD2、G0LD3 或G0LD4的已知受試者的至少一個(gè)子組中存在的增加（高）的比值。在患有COPDG0LD2、 G0LD3或G0LD4的受試者中，羰基化波形蛋白的抗體反應(yīng)中IgG與IgM的比值可以是例如 至少4或4. 5,如至少5或6。在不具有C0PD或不具有G0LD2、G0LD3或GOLD4C0PD的受試 者中，如在患有G0LD1 (但不具有G0LD2或G0LD3或G0LD4)的不吸煙者中、吸煙者或受試者 中，對(duì)羰基化波形蛋白的抗體反應(yīng)中IgG與IgM的比值可以是例如降低（低）的比值，并且 可以是小于4或3. 5,如小于3。
[0023] 可以以任何合適的方式確定樣品中的對(duì)羰基化波形蛋白的抗體反應(yīng)，任選地對(duì)羰 基化波形蛋白的抗體反應(yīng)中IgG(或IgGl)與IgM的比值。如本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的，可 以使用定量分析，該定量分析通過酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA)測(cè)量或替代的基于免疫學(xué)的 測(cè)定形式。例如，免疫印跡法、免疫組織化學(xué)法、放射性免疫測(cè)定、ELISPOT為可使用的技術(shù) 的實(shí)例。還可以使用利用抗體或其亞組成片段的免疫學(xué)性質(zhì)的任何其他方法，以有助于評(píng) 價(jià)對(duì)羰基化波形蛋白的抗體滴度或免疫反應(yīng)性，從而允許測(cè)定IgG/IgM或其相反的比值。 可以使用如酶聯(lián)_、熒光染料聯(lián)-或放射性同位素聯(lián)-二級(jí)檢測(cè)試劑定量抗羰基Ab或其片 段。
[0024] 例如，可以使用ELISA測(cè)定，使用羰基化波形蛋白多肽作為靶蛋白并且（例如）使 用對(duì)IgG(或IgGl)和IgM具有特異性從而測(cè)定IgG或（IgGl)和IgM組分的第二抗體，來 評(píng)價(jià)對(duì)羰基化波形蛋白的抗體反應(yīng)。實(shí)施例1提供了合適的試劑和分析的實(shí)例?？梢酝ㄟ^ 用丙二醛（MDA)或任何其他反應(yīng)性羰基或其組合，如4-羥基壬烯酸、丙烯醛或甲基乙二醛 處理，使波形蛋白羰基化。例如，實(shí)施例1描述了羰基化波形蛋白多肽的制備。合適的試劑 來源（如SigmaAldrichInc)也描述在如Kirkhametal(2011)AmJRespirCritCare Med184, 796-802 中。
[0025] 還可以使用其他測(cè)定形式，如放射性免疫測(cè)定（RIA)、免疫放射分析（IRMA)和免 疫酶測(cè)定（IEMA)，包括使用單克隆抗體和/或多克隆抗體的夾心法。
[0026] 可能有用的是，測(cè)定是以能夠在護(hù)理環(huán)境（caresetting)中快速且可靠地使用的 形式，如在手術(shù)環(huán)境或出診時(shí)或在緊急評(píng)估或治療中心由全科醫(yī)生或護(hù)士（如C0PD?？谱o(hù) 士）使用。測(cè)定可以是受試者本人能夠使用的形式，如在受試者家中，例如是受試者本人主 動(dòng)購(gòu)買的，或作為醫(yī)護(hù)人員（healthprofessionals)同意的護(hù)理方案的一部分?；蛘撸?能有用的是，測(cè)定是適合于高通量的形式，如基于微芯片的測(cè)定。當(dāng)該評(píng)價(jià)作為評(píng)價(jià)治療方 案的一部分時(shí)，如作為臨床試驗(yàn)的一部分時(shí)，這樣的形式可能是特別有用的。
[0027] 僅能夠結(jié)合羰基化波形蛋白的抗體與能夠結(jié)合羰基化波形蛋白和非羰基化波形 蛋白兩者的抗體的區(qū)分，被認(rèn)為沒有必要。因此，評(píng)價(jià)結(jié)合到羰基化波形蛋白的抗體，被認(rèn) 為足以。如本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的，通常，羰基化波形蛋白是天然羰基化波形蛋白，即不 是例如通過暴露于過量的熱或極端的pH或鹽濃度而已經(jīng)故意變性的波形蛋白。實(shí)施例1的 評(píng)價(jià)中用作靶蛋白的羰基化波形蛋白被認(rèn)為是適合于實(shí)施本發(fā)明的天然波形蛋白的實(shí)例。
[0028] 使用二硝基苯肼測(cè)定檢驗(yàn)實(shí)施例1中使用的波形蛋白，該二硝基苯肼測(cè)定檢測(cè)所 述蛋白質(zhì)的羰基修飾（參見Kirkhametal2011)，但是并不認(rèn)為對(duì)天然結(jié)構(gòu)的任何其他檢 驗(yàn)或另外的檢驗(yàn)是相關(guān)的。
[0029] 應(yīng)了解，對(duì)結(jié)合羰基化波形蛋白的抗體的評(píng)價(jià)可使用波形蛋白的羰基化片段來評(píng) 價(jià)?？梢酝ㄟ^本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的技術(shù)容易地確定所述合適的片段。例如，賴氨酸上的 ε氨基是羰基化的合適位點(diǎn)，只要該位點(diǎn)可用于體內(nèi)修飾。類似地，如果賴氨酸或任何其他 氨基酸或肽上的α氨基可用于體內(nèi)修飾，其也可以被羰基化。表位作圖研究可用于鑒別特 別合適的片段。
[0030] 波形蛋白序列是熟知的，并且可參見例如
[0031]
[0032] ID0MIM:193060MGI:98932
[0033] HomoloGene:2538
[0034] http://en.wikipedia.org/wiki/GeneCards
[0035] 優(yōu)選地是，羰基化波形蛋白多肽是羰基化人類波形蛋白多肽。優(yōu)選地是，羰基化人 類波形蛋白多肽是羰基化全長(zhǎng)人類波形蛋白。
[0036] 本發(fā)明的方法還包括評(píng)價(jià)測(cè)試樣品中所述對(duì)羰基化波形蛋白的抗體反應(yīng)，任選地 所述對(duì)羰基化波形蛋白的抗體反應(yīng)中的IgG(或IgGl)與IgM的比值，以及對(duì)照樣品中它們 的比較。
[0037] 本發(fā)明的又一方面提供了用于評(píng)價(jià)C0PD(如用于評(píng)價(jià)coro的嚴(yán)重度）、監(jiān)控疾病 進(jìn)展或評(píng)價(jià)治療方案的有效性的試劑盒（kitofparts)，其包括：（1)試劑，其能夠?qū)ｉT用 于評(píng)價(jià)樣品中對(duì)羰基化波形蛋白的抗體反應(yīng)，任選地所述對(duì)羰基化波形蛋白的抗體反應(yīng)中 IgG(或IgGl)與IgM的比值。該試劑盒可任選地適合作為點(diǎn)護(hù)理試劑盒（pointofcare kit)，如可以配置成能夠在例如在啟動(dòng)具體評(píng)價(jià)后（例如從受試者獲取樣品后）小于約6、 3、2或1小時(shí)內(nèi)（如小于30分鐘內(nèi)）提供讀出。該試劑盒可以被配置成經(jīng)由可視信號(hào)提供 讀出，該可視信號(hào)在沒有使用儀器下就可以理解；或可以包括將讀出傳遞至遠(yuǎn)端的使用儀 器、軟件或指令。
[0038] 能夠特別用于評(píng)價(jià)樣品中對(duì)羰基化波形蛋白的抗體反應(yīng)，任選地所述對(duì)羰基化波 形蛋白的抗體反應(yīng)中IgG(或IgGl)與IgM的比值的試劑可以是羰基化波形蛋白多肽，其任 選地設(shè)置在或涂布在適合于實(shí)施免疫測(cè)定（如ELISA測(cè)定）的支持體（如微量滴定板或微 芯片）上。
[0039] 優(yōu)選地，試劑盒還包括對(duì)照樣品。對(duì)照樣品可以是陰性對(duì)照（其可以含有未患有 C0PD的受試者的血清，具有例如在對(duì)羰基化波形蛋白的抗體反應(yīng)中低的IgG:IgM比值的受 試者的血清），或其可以是陽(yáng)性對(duì)照（含有患有C0PDG0LD2、3或4的受試者的血清，所述受 試者已知在對(duì)羰基化波形蛋白的抗體反應(yīng)中具有高IgG:IgM比值）。例如，陰性對(duì)照可以是 血清稀釋緩沖液。試劑盒可含有陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照。有用地是，試劑盒可含有可與羰基 化波形蛋白反應(yīng)的不同量的抗體對(duì)照品，從而可制成校準(zhǔn)曲線。
[0040] 有用的是，試劑盒可含有對(duì)照品和檢測(cè)材料（如對(duì)于免疫組織化學(xué)，第二抗體標(biāo) 記的熒光團(tuán)或酶或生物素或地高辛等）。對(duì)于免疫測(cè)定，試劑盒的額外組分可包括例如針 對(duì)一種抗體類型（如IgM或IgG)的一種或多種第二抗體（任選地具有標(biāo)記或連接到支持 體），以及稀釋和反應(yīng)緩沖劑。有用的是，本發(fā)明的所有試劑盒均可以包含類似的額外組分。
[0041] 本發(fā)明的又一方面提供了一種試劑，其能夠?qū)ｉT用于評(píng)價(jià)樣品中對(duì)羰基化波形蛋 白的抗體反應(yīng)，任選地所述對(duì)羰基化波形蛋白的抗體反應(yīng)中IgG(或IgGl)與IgM的比值， 以幫助分類或確定患有C〇ro的受試者的預(yù)后，或幫助選擇針對(duì)患有C0PD的受試者的治療 策略，或幫助監(jiān)控C0PD的疾病進(jìn)展或評(píng)價(jià)針對(duì)C0PD的治療方案的有效性。
[0042] 本發(fā)明的又一方面提供了一種試劑在制備用于幫助分類或確定患有C0PD的受試 者的預(yù)后，或幫助選