，滴加6yUlXlO—5?100 ng/mL的一系列不同濃度的人免疫球蛋白溶液，室溫孵化lh，超純水清洗，置于4°C冰箱中干燥；
(6)將6uL、3 mg/mL的檢測抗體孵化物Cr3+@Au@OMC-Ab2溶液滴涂于電極表面上，室溫孵化lh，超純水清洗干凈，置于4°C冰箱中晾干，制得一種基于Cr3+@Au@0MC的人免疫球蛋白傳感器。
[0020]實施例4.構(gòu)建人免疫球蛋白免疫傳感器的各種傳感材料的制備方法，包括以下步驟:
(1)金納米粒子溶液的制備
將1.0 mL氯金酸(1 wt%)加入到99 mL超純水中，邊攪拌邊加入2.5 mL的檸檬酸鈉(1wt%)，在100 °(:下回流15 min，離心分離，棄去沉淀，分散均勾的酒紅色的上清液即為金納米粒子溶液；
(2)Au@0MC的制備
準確稱取10 mg的0MC加入離心管中，向離心管中加入1 mL超純水使其分散均勻，再將50 mL金納米粒子溶液加入離心管中，超聲10 min，放在振蕩器上振蕩24 h，離心分離，并用超純水洗滌，直至上清液無色，35°C真空干燥，制得黑色粉末AuOOMC;
(3)Cr3+@Au@0MC的制備
首先配置1 mg/mL的硝酸鉻溶液，然后準確稱取4 mg的AuOOMC并加入4 mL的硝酸鉻溶液，超聲10 min，然后將其震蕩24 h，離心分離，并用超純水洗滌，直至上清液無色，35°C真空干燥，制得Cr3+@Au@0MC ；
(4)檢測抗體孵化物Cr3+@Au@OMC-Ab2溶液的制備
在2 mL、2 mg/mL的Cr3+@Au@0MC溶液中，加入2mL的8 mg/mL的人免疫球蛋白檢測抗體Ab2溶液，4°C恒溫振蕩培養(yǎng)箱中振蕩孵化12 h;離心分離后，加入1 mL 50 mmol/L的pH=7.4磷酸鹽緩沖溶液，得到檢測抗體孵化物Cr3+@Au@OMC-Ab2溶液，4°C下保存?zhèn)溆谩?br>[0021]實施例5.構(gòu)建人免疫球蛋白免疫傳感器的各種傳感材料的制備方法，包括以下步驟:
(1)金納米粒子溶液的制備
將1.0 mL氯金酸(1 wt%)加入到99 mL超純水中，邊攪拌邊加入2.5 mL的檸檬酸鈉(1wt%)，在100 °(:下回流15 min，離心分離，棄去沉淀，分散均勾的酒紅色的上清液即為金納米粒子溶液；
(2)Au@OMC的制備
準確稱取15 mg的OMC加入離心管中，向離心管中加入1.5 mL超純水使其分散均勻，再將50 mL金納米粒子溶液加入離心管中，超聲10 min，放在振蕩器上振蕩24 h，離心分離，并用超純水洗滌，直至上清液無色，35°C真空干燥，制得黑色粉末AuOOMC;
(3)Cr3+@Au@0MC的制備
首先配置1 mg/mL的硝酸鉻溶液，然后準確稱取5 mg的AuOOMC并加入4 mL的硝酸鉻溶液，超聲10 min，然后將其震蕩24 h，離心分離，并用超純水洗滌，直至上清液無色，35°C真空干燥，制得Cr3+@Au@0MC ；
(4)檢測抗體孵化物Cr3+@Au@OMC-Ab2溶液的制備
在2 mL、3 mg/mL的Cr3+@Au@0MC溶液中，加入2 mL的10 mg/mL的人免疫球蛋白檢測抗體Ab2溶液，4°C恒溫振蕩培養(yǎng)箱中振蕩孵化12 h;離心分離后，加入1 mL 50 mmol/L的pH=7.4磷酸鹽緩沖溶液，得到檢測抗體孵化物Cr3+@Au@OMC-Ab2溶液，4°C下保存?zhèn)溆谩?br>[0022]實施例6.構(gòu)建人免疫球蛋白免疫傳感器的各種傳感材料的制備方法，包括以下步驟:
(1)金納米粒子溶液的制備
將1.0 mL氯金酸(1 wt%)加入到99 mL超純水中，邊攪拌邊加入2.5 mL的檸檬酸鈉(1wt%)，在100 °(:下回流15 min，離心分離，棄去沉淀，分散均勾的酒紅色的上清液即為金納米粒子溶液；
(2)Au@0MC的制備
準確稱取20 mg的0MC加入離心管中，向離心管中加入2 mL超純水使其分散均勻，再將50 mL金納米粒子溶液加入離心管中，超聲10 min，放在振蕩器上振蕩24 h，離心分離，并用超純水洗滌，直至上清液無色，35°C真空干燥，制得黑色粉末AuOOMC;
(3)Cr3+@Au@0MC的制備
首先配置1 mg/mL的硝酸鉻溶液，然后準確稱取6 mg的AuOOMC并加入4 mL的硝酸鉻溶液，超聲10 min，然后將其震蕩24 h，離心分離，并用超純水洗滌，直至上清液無色，35°C真空干燥，制得Cr3+@Au@0MC ；
(4)檢測抗體孵化物Cr3+@Au@OMC-Ab2溶液的制備
在2 mL、4 mg/mL的Cr3+@Au@0MC溶液中，加入2 mL的12 mg/mL的人免疫球蛋白檢測抗體Ab2溶液，4°C恒溫振蕩培養(yǎng)箱中振蕩孵化12 h;離心分離后，加入1 mL 50 mmol/L的pH=7.4磷酸鹽緩沖溶液，得到檢測抗體孵化物Cr3+@Au@OMC-Ab2溶液，4°C下保存?zhèn)溆谩?br>[0023]實施例7.所構(gòu)建的免疫傳感器，用于人免疫球蛋白IgG的檢測，檢測步驟如下:
(1)使用電化學工作站以三電極體系進行測試，飽和甘汞電極為參比電極，鉑絲電極為輔助電極，所制備的傳感器為工作電極，在10 mL、50 mmol/L的pH 5.59- 8.02磷酸鹽緩沖溶液中進行測試； (2)用計時電流法對人免疫球蛋白進行檢測，輸入電壓為-0.4V，取樣間隔0.1 s，運行時間400 s；
(3)當背景電流趨于穩(wěn)定后，每隔50s向10 mL、50 mmol/L的pH=7.4的磷酸鹽緩沖溶液中加入10μL、5 mo 1 /L的雙氧水溶液，記錄電流變化。
[0024](4)根據(jù)所得電流強度與IgG濃度之間的線性關(guān)系，繪制工作曲線，測得其線性范圍為0.01 pg/mL?100 ng/mL，檢測限為0.003 pg/mL。
[0025]實施例8.人免疫球蛋白IgM的檢測
繪制工作曲線步驟同實施例7，按照繪制工作曲線的方法進行IgM樣品分析，測得線性范圍為0.02pg/mL ?110 ng/mL，檢測限為0.007 pg/mL。
【主權(quán)項】
1.一種基于Cr3+@Au@OMC的免疫傳感器的制備方法，其特征在于，步驟如下: (1)將直徑為3~5mm的玻碳電極用A1203拋光粉打磨，超純水清洗干凈； (2)將HAuCl4(1 wt%)用計時電流法從-0.2V-0.2V電沉積到電極表面，晾干，用超純水沖洗，瞭干； (3)滴涂6仙、8?12ug/mL的人免疫球蛋白捕獲抗體Ah溶液于電極表面，4°C冰箱中干燥； (4)超純水沖洗掉未結(jié)合的捕獲抗體六匕后，滴加3tiL、0.1?1.0 mg/mL的牛血清白蛋白BSA溶液于電極表面，4°C冰箱中晾干； (5)超純水沖洗掉未結(jié)合的BSA后，滴加6yUlXlO—5?100 ng/mL的一系列不同濃度的人免疫球蛋白溶液，室溫孵化lh，超純水清洗，置于4°C冰箱中干燥； (6)將6燦、1?3mg/mL的檢測抗體孵化物Cr3+@Au@OMC-Ab2溶液滴涂于電極表面上，室溫孵化lh，超純水清洗干凈，置于4°C冰箱中晾干，制得一種基于Cr3+@Au@OMC的人免疫球蛋白傳感器。2.如權(quán)利要求1所述的一種基于Cr3+MU@0MC的免疫傳感器的制備方法，所述的所述Cr3+iAu1MC _Ab2二抗孵化物溶液的制備，其特征在于，制備步驟如下: (1)金納米粒子溶液的制備 將1.0 mL氯金酸(1 wt%)加入到99 mL超純水中，邊攪拌邊加入2.5 mL的檸檬酸鈉(1wt%)，在100 °(:下回流15 min，離心分離，棄去沉淀，分散均勾的酒紅色的上清液即為金納米粒子溶液； (2)Au@0MC的制備 準確稱取10?20 mg的0MC加入離心管中，向離心管中加入卜2 mL超純水使其分散均勾，再將50 mL金納米粒子溶液加入離心管中，超聲10 min，放在振蕩器上振蕩24 h，離心分離，并用超純水洗滌，直至上清液無色，35°C真空干燥，制得黑色粉末AuOOMC; (3)Cr3+@Au@0MC的制備 首先配置1 mg/mL的硝酸鉻溶液，然后準確稱取4?6 mg的AuOOMC并加入4 mL的硝酸鉻溶液，超聲10 min，然后將其震蕩24 h，離心分離，并用超純水洗滌，直至上清液無色，35°C真空干燥，制得Cr3+@Au@0MC ； (4 )檢測抗體孵化物Cr3+@Au@OMC-Ab2溶液的制備 在2 mL、2?4 mg/mL的Cr3+@Au@0MC溶液中，加入2 mL的8?12 mg/mL的人免疫球蛋白檢測抗體Ab2溶液，4°C恒溫振蕩培養(yǎng)箱中振蕩孵化12 h;離心分離后，加入1 mL 50 mmol/L的pH=7.4磷酸鹽緩沖溶液，得到檢測抗體孵化物Cr3+@Au@OMC-Ab2溶液，4°C下保存?zhèn)溆谩?.如權(quán)利要求1所述的制備方法制備的一種基于Cr3+@Au@OMC-Ab2的免疫傳感器用于人免疫球蛋白的檢測，步驟如下: (1)使用電化學工作站以三電極體系進行測試，飽和甘汞電極為參比電極，鉑絲電極為輔助電極，所制備的傳感器為工作電極，在10 mL、50 mmol/L的pH 5.59- 8.02磷酸鹽緩沖溶液中進行測試； (2)用計時電流法對人免疫球蛋白進行檢測，輸入電壓為-0.4V，取樣間隔0.1 s，運行時間400 s； (3)當背景電流趨于穩(wěn)定后，每隔50s向10 mL、50 mmol/L的pH=7.4的磷酸鹽緩沖溶液中加入1 ΟμL、5 mo 1 /L的雙氧水溶液，記錄電流變化。4.如權(quán)利要求1所述的一種基于Cr3+@Au@0MC的免疫傳感器的制備方法，所述人免疫球蛋白選自下列之一:IgG和IgM。
【專利摘要】本發(fā)明屬于納米功能材料、免疫分析以及生物傳感技術(shù)領(lǐng)域，提供了一種基于Cr3+AuOMC的免疫傳感器的制備方法及應(yīng)用。具體是采用Cr3+AuOMC作為檢測抗體標記物，制備一種人免疫球蛋白的夾心型電化學免疫傳感器，利用Cr3+AuOMC優(yōu)異的生物相容性和高的催化性能，使所制作的傳感器具有特異性強，靈敏度高和檢出限低等優(yōu)點。
【IPC分類】G01N27/327, G01N33/68, G01N33/58
【公開號】CN105467132
【申請?zhí)枴緾N201510915356
【發(fā)明人】劉青, 楊玉瑩, 董云會, 馮曼曼, 尹夢杰, 李月云, 劉會
【申請人】山東理工大學
【公開日】2016年4月6日
【申請日】2015年12月11日