一種茯苓三萜類化合物的檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及藥物化合物檢測領(lǐng)域。具體設(shè)及一種藥物的檢測方法，尤其設(shè)及一種 食品或藥品中巧等Ξ祗類化合物的檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 巧等為多孔菌科真菌化ria cocos(Schw. )Wolf的干燥菌核，性平，味甘、淡，歸屯、、 肺、脾、腎經(jīng)，是一味常用的利水滲濕、健脾和胃、寧屯、安神的中藥。常用于水腫尿少、疲飲眩 惇、脾虛食少、便漉泄瀉、屯、神不安、驚惇失眠等病癥的治療?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，巧等具 有抑制腫瘤、抗炎、抗衰老、調(diào)節(jié)免疫功能、保肝等多方面的藥理作用，在臨床上應(yīng)用廣泛， 且效果顯著。自70年代W來，中外學(xué)者從巧等中分離出了多種Ξ祗化合物，并對其藥理作 用、生物活性等方面進(jìn)行了研究。運些藥理研究表明，巧等中所含的Ξ祗類化合物具有明顯 的抗腫瘤、抗炎和免疫調(diào)節(jié)作用，是巧等的重要有效成分
[0003] 此外，CN105085598A公開了，巧等Ξ祗中的巧等酸(pachymic acid)及去氨巧等酸 (dehydropachymic acid)、上莫酉《（tumulosic acid)、去氨上莫酉《（dehydrotumulosic acid)、豬等酸C(polyporenic acid C)、W及3-表-去氨±莫酸（3-邱i-dehy化otumulosic acid)為巧等Ξ祗中的主要成分，也是主要活性物質(zhì)，具有利尿、抗氧化、抗癌癥、抗發(fā)炎、抗 高血糖、調(diào)節(jié)免疫等功效;CN103665679A公開了 一種巧等酸單體的分離純化方法，其雖然W 巧等為原料，并通過提取、萃取、結(jié)晶得到巧等酸單體，但其僅僅得到一種巧等Ξ祗化合物， 對其它巧等Ξ祗化合物如何檢測或分離，并未提及。隨著巧等Ξ祗的功效被人們廣泛認(rèn)可， 越來越多的食品或藥品中添加了巧等Ξ祗類物質(zhì)，探索建立有效檢測食品或藥品中巧等Ξ 祗類化合物含量的新方法對于食品或者藥品原料的監(jiān)測具有更加重要的意義。
[0004] 巧等S祗中的巧等酸（pachymic acid)及去氨巧等酸（dehy化opachymic acid)、 上莫酉《（tumulosic acid)、去氨上莫酉《（dehydrotumulosic acid)、豬等酉《C(polyporenic acid C)、W及3-表-去氨±莫酸(3-epi-dehy化otumulosic acid)如下所示：
[0005]


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是針對目前無法全面、有效、準(zhǔn)確地對食品或藥品中巧等Ξ祗類主 要活性物質(zhì)含量檢測方法的不足，提供了一種檢測方法，該方法簡單，易于操作，能夠全面、 有效、準(zhǔn)確地對食品或者藥品中巧等Ξ祗類主要活性物質(zhì)的含量進(jìn)行檢測，從而為巧等Ξ 祗類化合物在食品中或者藥品中的規(guī)?；褂锰峁┝思夹g(shù)支持。
[0007] 本發(fā)明的目的在于提供了一種巧等Ξ祗類化合物的檢測方法。
[0008] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用下述技術(shù)方案：
[0009] -種食品或藥品中巧等Ξ祗類化合物的檢測方法，該方法包括W下步驟：
[0010] (1)超聲提??；
[0011] (2)利用有機溶劑對步驟(1)的產(chǎn)物進(jìn)行萃取，并用醇溶解；
[0012] (3)對步驟(2)醇溶液進(jìn)行高效液相色譜檢測。
[0013] 優(yōu)選地，步驟(1)包括下述步驟:稱取待測樣品，粉碎后配制成樣品醇溶液，密塞超 聲提取，過濾，再將濾液蒸干;其中，所述粉碎后過的篩網(wǎng)為60目W上;所述超聲提取次數(shù)為 2~3次，每次20~40min;所述每次使用醇提取的量為樣品質(zhì)量的25~35倍。
[0014] 優(yōu)選地，步驟(2)包括下述步驟：用有機溶劑對步驟（1)得到的蒸干物質(zhì)進(jìn)行萃取 數(shù)次，合并有機層，蒸干后，再使用醇溶解;其中，所述使用有機溶劑萃取次數(shù)為3次W上，每 次有機溶劑的用量為樣品質(zhì)量的15~25倍;所述蒸干后溶解所需醇的量為4~6mL。
[0015] 優(yōu)選地，步驟(3)包括下述步驟:取步驟(2)醇溶液進(jìn)行高效液相色譜檢測；其中， 高效液相色譜的檢測條件為:采用C18液相色譜柱，流動相由A相和B相組成，進(jìn)行梯度洗脫， 使用PDA二極管陣列檢測器進(jìn)行檢測，其中所述A相為色譜乙臘，B相為含有體積分?jǐn)?shù)0.05 % ~0.5 %的憐酸水溶液，檢測波長為210nm和24化m，柱溫為20~40°C，流速為1.7mL/min，所 述梯度洗脫的條件為:〇~33min，流動相A相的體積分?jǐn)?shù)保持為51%，B相的體積分?jǐn)?shù)保持為 49% ; 33~45min，流動相A相的體積分?jǐn)?shù)由51 %升為54%，流動相B相的體積分?jǐn)?shù)由49%降 至46% ;45~51min，流動相A相的體積分?jǐn)?shù)由54%繼續(xù)升為100%，流動相B相的體積分?jǐn)?shù)由 4 6 %降至0 % ; 51~5 5 m i η，流動相A相的體積分?jǐn)?shù)保持10 0 %，流動相B相的體積分?jǐn)?shù)保持 0% ; 55~55.5min，流動相A相的體積分?jǐn)?shù)由100%降至51 %，流動相B相的體積分?jǐn)?shù)由0%升 至54% ;55.5~60min，流動相A相的體積分?jǐn)?shù)保持51%，流動相財目的體積分?jǐn)?shù)保持54%。
[0016] 更優(yōu)選地，所述檢測方法包括下述步驟：
[0017] (1)稱取待測樣品，粉碎后配制成樣品醇溶液，密塞超聲提取，過濾，再將濾液蒸 干;其中，所述粉碎后過的篩網(wǎng)為60目W上;所述超聲提取次數(shù)為2~3次，每次20~40min; 所述每次使用醇提取的量為樣品質(zhì)量的25~35倍；
[0018] (2)用有機溶劑對步驟(1)得到的蒸干物質(zhì)進(jìn)行萃取數(shù)次，合并有機層，蒸干后，再 使用醇溶解;其中，所述使用有機溶劑萃取次數(shù)為3次W上，每次有機溶劑的用量為樣品質(zhì) 量的15~25倍;所述蒸干后溶解所需醇的量為4~6n止；
[0019] (3)取步驟(2)醇溶液進(jìn)行高效液相色譜檢測;其中，高效液相色譜的檢測條件為： 采用C18液相色譜柱，流動相由A相和財目組成，進(jìn)行梯度洗脫，使用PDA二極管陣列檢測器進(jìn) 行檢測，其中所述A相為色譜乙臘，B相為含有體積分?jǐn)?shù)0.05%~0.5%的憐酸水溶液，檢測 波長為210nm和24化m，柱溫為20~40°C，流速為1.7mL/min，所述梯度洗脫的條件為：0~ 33min，流動相A相的體積分?jǐn)?shù)保持為51 %，B相的體積分?jǐn)?shù)保持為49% ; 33~45min，流動相A 相的體積分?jǐn)?shù)由51 %升為54%，流動相B相的體積分?jǐn)?shù)由49%降至46% ;45~51min，流動相 A相的體積分?jǐn)?shù)由54%繼續(xù)升為100%，流動相B相的體積分?jǐn)?shù)由46%降至0% ; 51~55min， 流動相A相的體積分?jǐn)?shù)保持100%，流動相B相的體積分?jǐn)?shù)保持0% ; 55~55.5min，流動相A相 的體積分?jǐn)?shù)由100%降至51 %，流動相B相的體積分?jǐn)?shù)由0%升至54% ; 55.5~60min，流動相 A相的體積分?jǐn)?shù)保持51 %，流動相B相的體積分?jǐn)?shù)保持54%。
[0020] 所述的巧等Ξ祗類化合物主要是起主要藥理作用的巧等Ξ祗類物質(zhì)，分別為：巧 等酸（pachymic acid，PA)及去氨巧等酸（dehy化opachymic acid，DPA)、±莫酸（tumulosic 曰。1(1，了4)、去氨±莫酸（(16117(11'〇1:加1111〇3；[0日。1(1，0了4)、豬等酸"901790'6]1；[03。1(1〔， PAC)、W及3-表-去氨±莫酸（3-epi-dehy化otumulosic acid，EDA)。
[0021 ] 所述的巧等Ξ祗類化合物的保留時間為：PA為52.17min、DPA為52.57min、TA為 25.47min、DTA為29.07min、PAC為41.98min、EDA為47.70min。
[0022] 所述的樣品，其可W是食品、藥品、藥材、藥材提取物或者它們的混合物。
[0023] 所述的醇，其可W是甲醇、乙醇、異丙醇或正下醇中的一種或幾種。
[0024] 所述的有機溶劑，其可W是乙酸乙醋、乙酸下醋、氯仿或二氯甲燒中的一種或幾 種。
[0025] 本發(fā)明通過兩步預(yù)處理有效地去除了食品或者藥品中的干擾物質(zhì)，通過常規(guī)的高 效液相色譜法就可W完成食品或藥品中的巧等Ξ祗類化合物各物質(zhì)的含量檢測，為了使本 領(lǐng)域技術(shù)人員更好地實施本發(fā)明，在此提供一種優(yōu)選的高效液相色譜檢測方法，本液相檢 測方法使被檢測的巧等Ξ祗均能與其他雜質(zhì)分離開來，分離度均大于1.5,并且各Ξ祗的色 譜峰具有較好的對稱性，對稱因子均保證在0.8~1.2，具體色譜條件如下：
[0026] 高效液相色譜的檢測條件為:采用C18液相色譜柱，流動相由A相和B相組成，進(jìn)行 梯度洗脫，使用PDA二極管陣列檢測器進(jìn)行檢測，其中所述A相為色譜乙臘，B相為含有體積 分?jǐn)?shù)0.05 %~0.5 %的憐酸水溶液，檢測波長為2 lOnm和24化m，柱溫為20~40°C，流速為 1.7mL/min，
[0027] 優(yōu)選的梯度洗脫條件為:0~33min，流動相A相的體積分?jǐn)?shù)保持為51%，A相的體積 分?jǐn)?shù)保持為49% ;33~45min，流動相A相的體積分?jǐn)?shù)由51 %升為54%，流動相B相的體積分 數(shù)由49 %降至46 % ; 45~5 Imin，流動相A相的體積分?jǐn)?shù)由54 %繼續(xù)升為100 %，流動相B相的 體積分?jǐn)?shù)由46 %降至0 % ; 51~55min，流動相A相的體積分?jǐn)?shù)保持100 %，流動相B相的體積 分?jǐn)?shù)保持0 % ; 55~55.5min，流動相A相的體積分?jǐn)?shù)由100 %降至51 %，流動相B相的體積分 數(shù)由0%升至54%;55.5~60min，流動相A相的體積分?jǐn)?shù)保持51 %，流動相財目的體積分?jǐn)?shù)保 持 54 %。
【附圖說明】
[002引圖1:波長210nm下化合物DTA與DPA的色譜圖；
[0029] 圖2:波長243nm下化合物PA、TA、PAC W及邸A的色譜圖。 實施例
[0030] 下面通過實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。應(yīng)該理解的是，本發(fā)明實施例所述方法 僅僅是用于說明本發(fā)明，而不是對本發(fā)明的限制，在本發(fā)明的構(gòu)思前提下對本發(fā)明制備方 法的簡單改進(jìn)都屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。如無特別說明，實施例中用到的所有原料和 溶齊。均貝勾自 Si邑m曰 Biochemical and Organic Compounds for Research 曰nd Diagnostic Clinical Reagents公司。
[0031 ] 實施例1:
[0032] 分別準(zhǔn)確稱取2mg PA、DPA、ΤΑ、DTA、PAC及抓A對照品，用甲醇溶解并定容于1 OmL， 即濃度為20化g/mL的對照品母液，再移取適量對照品母液稀釋成化g/mL、化g/mL、扣g/mL、 1 Oyg/mL、25yg/mL、50yg/mL、lOOyg/mL對照品溶液，將對照品溶液和對照品母液注入液相色 譜儀，進(jìn)樣量20化，W對照品