濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，求得各對照品線性回歸方程， 結(jié)果如下：
[0033] PA：Y=18732X+19461 r = 0.9999
[0034] DPA：Y = 7037.7X+33795 r = 0.9999
[0035] TA：Y=18901X+3257 r = 0.9999
[0036] DTA：Y = 7023.9X-1823.3 r = 0.9999
[0037] PAC：Y=15067X+3523.5 r = 0.9999
[0038] EDA：Y=19992X+3200.3 r = 0.9999
[0039] 高效液相色譜的檢測條件為：儀器為Waters冊LC 1525series，色譜柱為￥1(：-Pack Pro C18(4.6*250mm，5皿），柱溫為35°C，流速為 1.7mL/min，PDA設(shè)定波長為210nm& 243nm，流動相A為乙臘，流動相B為體積分數(shù)0.1%憐酸水溶液，梯度洗脫條件為:0~33min， 流動相A相的體積分數(shù)保持為51%，A相的體積分數(shù)保持為49% ;33~45min，流動相A相的體 積分數(shù)由51 %升為54%，流動相B相的體積分數(shù)由49 %降至46 % ; 45~5Imin，流動相A相的 體積分數(shù)由54%繼續(xù)升為100%，流動相B相的體積分數(shù)由46%降至0% ;51~55min，流動相 A相的體積分數(shù)保持100%，流動相B相的體積分數(shù)保持0% ; 55~55.5min，流動相A相的體積 分數(shù)由100%降至51 %，流動相B相的體積分數(shù)由0%升至54% ; 55.5~60min，流動相A相的 體積分數(shù)保持51 %，流動相B相的體積分數(shù)保持54%。
[0040] 實施例2:
[0041] 將普通商購巧等藥材粉碎后過60目篩，準確稱取約Ig藥粉，置于lOOmLS角瓶中， 使用甲醇超聲提取，提取2次，每次加入甲醇的量為30mL，每次超聲30min，冷卻后過濾，濾液 合并，蒸干，用乙酸乙醋萃取3次，每次20mL，合并有機層，減壓蒸干，所得固體再用甲醇稀釋 至5mL，搖勻，過0.22皿濾膜后，按實施例1所示色譜條件，進行HPLC分析。該巧等藥材中的 DPA為0.047wt% (保留時間為52.57min)，DTA為0.015wt% (保留時間為29.07min)，PA為 O.OOSwt% (保留時間為52. 17min)，TA為0.012wt% (保留時間為25.47min)，PAC為 0.013wt% (保留時間為41.98min)，EDA為O.OOSwt% (保留時間為47.70min)。
[0042] 實施例3:
[0043] 準確稱取含有巧等Ξ祗成分的蛋白粉(納補瑞多植優(yōu)高蛋白配方，杏輝藥品工業(yè) 股份有限公司）lg，置于lOOmLS角瓶中，使用甲醇超聲提取，提取2次，每次加入甲醇的量為 30血，每次超聲30min，冷卻后過濾，濾液合并，蒸干，用乙酸乙醋萃取3次，每次20mL，合并有 機層，減壓蒸干，所得固體再用甲醇稀釋至5mL，搖勻，過0.22μπι濾膜后，按實施例1所示色譜 條件，進行HPLC分析。該巧等藥材中的DPA為O.OOlwt% (保留時間為52.57min)，DTA為 0.002wt% (保留時間為29.07min)，PA為0.004wt% (保留時間為52.17min)，TA為0.004wt% (保留時間為25.47min)，PAC為0.002wt% (保留時間為41.98min)，EDA為0.005wt%(保留時 間為47.70min)。
[0044] 實施例4:
[0045] 將含有巧等Ξ祗成分的膠囊(美樂家寶巧等膠囊，杏輝天力(杭州)藥業(yè)有限公司） 剝除膠囊殼，準確稱取約Ig藥粉，置于lOOmLS角瓶中，使用甲醇超聲提取，提取2次，每次加 入甲醇的量為30mL，每次超聲30min，冷卻后過濾，濾液合并，蒸干，用乙酸乙醋萃取3次，每 次20mL，合并有機層，減壓蒸干，所得固體再用甲醇稀釋至5mL，搖勻，過0.22μπι濾膜后，按實 施例1所示色譜條件，進行Η Ρ L C分析。該巧等藥材中的D Ρ A為0.0 2 3 W t % (保留時間為 52.57min)，DTA為0.163wt% (保留時間為29.07min)，PA為0.031wt% (保留時間為 52. 17min)，TA為O.OSlwt% (保留時間為25.47min)，PAC為0.051wt% (保留時間為 41.98min)，EDA為0.044wt% (保留時間為47.70min)。
[0046] 實施例5:
[0047] 選用普通商購巧等藥材進行精密度試驗，按本發(fā)明方法處理后，按實施例1所示色 譜條件，進行HPLC分析，進樣6次，測定精密度，結(jié)果見表1。
[0048] 表1精密度試驗結(jié)果
[0049]
[0050]
[0051] 從測定結(jié)果可W看出，巧等Ξ祗中的6種祗類化合物的分析值得RSD%均小于2,說 明精密度良好，方法可行。
[0052] 實施例6:
[0053] 取一種未添加巧等Ξ祗的顆粒沖劑（氯化鐘顆粒，杏輝天力（杭州）藥業(yè)有限公 司），分別向其中添加巧等Ξ祗原料，制成巧等Ξ祗中DPA、DTA、PA、TA、PAC W及EDA的含量均 為20mg/100g的顆粒產(chǎn)品，按本發(fā)明方法處理樣品，結(jié)果如表2。
[0054] 表2回收率試驗結(jié)果
[0055]
[0056] 由表2可知，本申請對于測定運六種巧等Ξ祗類化合物的回收率均在90% W上，說 明此方法準確度高;方法的RSD%均小于2,體現(xiàn)了方法良好的重現(xiàn)性和精密度。
【主權(quán)項】
1. 一種茯苓三萜類化合物的檢測方法，其特征在于所述方法包括以下步驟： (1) 超聲提取； (2) 利用有機溶劑對步驟(1)的產(chǎn)物進行萃取，并用醇溶解； (3) 對步驟(2)醇溶液進行高效液相色譜檢測。2. 根據(jù)權(quán)利要求1的檢測方法，其特征在于所述方法的步驟（1)包括下述步驟:稱取待 測樣品，粉碎后配制成樣品醇溶液，密塞超聲提取，過濾，再將濾液蒸干;其中，所述粉碎后 過的篩網(wǎng)為60目以上;所述超聲提取次數(shù)為2~3次，每次20~40min;所述每次使用醇提取 的量為樣品質(zhì)量的25~35倍。3. 根據(jù)權(quán)利要求1的檢測方法，其特征在于所述方法的步驟(2)包括下述步驟：用有機 溶劑對步驟（1)得到的蒸干物質(zhì)進行萃取數(shù)次，合并有機層，蒸干后，再使用醇溶解;其中， 所述使用有機溶劑萃取次數(shù)為3次以上，每次有機溶劑的用量為樣品質(zhì)量的15~25倍;所述 蒸干后溶解所需醇的量為4~6mL。4. 根據(jù)權(quán)利要求1的檢測方法，其特征在于所述方法的步驟(3)包括下述步驟:取步驟 (2)醇溶液進行高效液相色譜檢測；其中，高效液相色譜的檢測條件為:采用C18液相色譜 柱，流動相由A相和B相組成，進行梯度洗脫，使用PDA二極管陣列檢測器進行檢測，其中所述 A相為色譜乙腈，B相為含有體積分數(shù)0.05 %~0.5 %的磷酸水溶液，檢測波長為210nm和 243nm，柱溫為20~40°C，流速為1.7mL/min，所述梯度洗脫的條件為:0~33min，流動相A相 的體積分數(shù)保持為51 %，B相的體積分數(shù)保持為49% ; 33~45min，流動相A相的體積分數(shù)由 51 %升為54%，流動相B相的體積分數(shù)由49%降至46% ;45~51min，流動相A相的體積分數(shù) 由54%繼續(xù)升為100%，流動相B相的體積分數(shù)由46%降至0% ; 51~55min，流動相A相的體 積分數(shù)保持100 %，流動相B相的體積分數(shù)保持0 % ; 55~55.5min，流動相A相的體積分數(shù)由 100%降至51 %，流動相B相的體積分數(shù)由0%升至54% ; 55.5~60min，流動相A相的體積分 數(shù)保持51 %，流動相B相的體積分數(shù)保持54%。5. 根據(jù)權(quán)利要求1的檢測方法，其特征在于所述方法包括下述步驟： (1) 稱取待測樣品，粉碎后配制成樣品醇溶液，密塞超聲提取，過濾，再將濾液蒸干;其 中，所述粉碎后過的篩網(wǎng)為60目以上;所述超聲提取次數(shù)為2~3次，每次20~40min;所述每 次使用醇提取的量為樣品質(zhì)量的25~35倍； (2) 用有機溶劑對步驟（1)得到的蒸干物質(zhì)進行萃取數(shù)次，合并有機層，蒸干后，再使用 醇溶解;其中，所述使用有機溶劑萃取次數(shù)為3次以上，每次有機溶劑的用量為樣品質(zhì)量的 15~25倍;所述蒸干后溶解所需醇的量為4~6mL。 (3) 取步驟(2)醇溶液進行高效液相色譜檢測;其中，高效液相色譜的檢測條件為:采用 C18液相色譜柱，流動相由A相和B相組成，進行梯度洗脫，使用PDA二極管陣列檢測器進行檢 測，其中所述A相為色譜乙腈，B相為含有體積分數(shù)0.05%~0.5%的磷酸水溶液，檢測波長 為210nm和243nm，柱溫為20~40°C，流速為1.7mL/min，所述梯度洗脫的條件為：0~33min， 流動相A相的體積分數(shù)保持為51%，B相的體積分數(shù)保持為49% ;33~45min，流動相A相的體 積分數(shù)由51 %升為54%，流動相B相的體積分數(shù)由49 %降至46 % ; 45~5lmin，流動相A相的 體積分數(shù)由54 %繼續(xù)升為100 %，流動相B相的體積分數(shù)由46 %降至0 %;51~55miη，流動相 Α相的體積分數(shù)保持100%，流動相Β相的體積分數(shù)保持0%;55~55.5min，流動相Α相的體積 分數(shù)由100%降至51 %，流動相B相的體積分數(shù)由0%升至54% ; 55.5~60min，流動相A相的 體積分數(shù)保持51 %，流動相B相的體積分數(shù)保持54%。6. 根據(jù)權(quán)利要求1-5任一所述的檢測方法，其特征在于所述茯苓三萜類化合物為茯苓 酸、去氫茯苓酸、土莫酸、去氫土莫酸、豬苓酸C以及3-表-去氫土莫酸。7. 根據(jù)權(quán)利要求1-5任一所述的檢測方法，其特征在于所述樣品是食品、藥品、藥材、藥 材提取物或者它們的混合物。8. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的檢測方法，其特征在于所述醇選自甲醇、乙醇、異丙醇或正丁 醇中的一種或幾種。9. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的檢測方法，其特征在于所述有機溶劑選自乙酸乙酯、乙酸丁 酯、氯仿或二氯甲烷中的一種或幾種。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種茯苓三萜類化合物的檢測方法，該方法包括以下步驟：(1)超聲提取；(2)用有機溶劑對步驟(1)得到的蒸干物質(zhì)進行萃取數(shù)次，合并有機層，蒸干后，再用醇溶解，使用0.22μm有機膜濾過，取續(xù)濾液注入高效液相色譜儀進行檢測。本發(fā)明所述方法具有較高的靈敏度、精密度和準確性。
【IPC分類】G01N30/08, G01N30/74
【公開號】CN105486786
【申請?zhí)枴緾N201610059814
【發(fā)明人】王昭日, 楊勝杰, 劉明川, 張小琴, 劉敏, 凌赟, 林漢欽
【申請人】杏輝天力（杭州）藥業(yè)有限公司
【公開日】2016年4月13日
【申請日】2016年1月28日