，上架，去上清，重復(fù)操作3次;將 步驟4獲得的抗體溶液加入到磁珠中，混勻后室溫反應(yīng)4小時，保持混勻狀態(tài)；
[0108] (7)加入0.3ml lmol/L的Tris溶液37°C15分鐘，其中Tris的加樣量為lmg抗體加 0.15mlTris；
[0109] (8)每次加入1.5ml PH 7.20. lmol/L PB清洗已經(jīng)標記的磁珠，混勻30秒，上架，去 上清，重復(fù)操作3次；
[0110] (9)用100ml磁珠保存液將磁珠轉(zhuǎn)入125ml玻璃瓶，即為0.05%的TG磁分離試劑；
[0111] (10)將步驟9獲得的磁分離試劑用磁珠緩沖液按照1:1的比例混勻，即得本發(fā)明試 劑盒中磁分離試劑。
[0112]第二步:試劑Ri的制備過程
[0113] -、試劑Ri稀釋液配制操作規(guī)程:配方見表2，以配制1L為例：
[0114] (1)取Tris 6.06g、NaCl 13.0g、Zncl2 0.05g、Proclin-300 0.2ml和MgCh 0.05g 于燒瓶中；然后在燒瓶中加入800ml純化水，充分攪拌，使試劑完全溶解；
[0115] (2)用4M HC1 或4M NaOH調(diào)PH，測量使PH在7.35-7.45范圍內(nèi)；
[0116] (3)稱取BSA V 3g倒入上述燒瓶中；
[0117] (4)最后定容至1000ml，測PH值，范圍在7.35-7.45之間即符合要求，用0.2um濾器 過濾;過濾完后，貼好標簽于2-8°C冷庫貯存；
[0118] 試劑Ri稀釋液(表2)
[0119]
[0120]二、試劑R!的配制(堿性磷酸酶(ALP)標記的小鼠抗人TG單克隆抗體）
[0121 ] (1)取lOmgALP加入5ml生理鹽水中，加入到Centricon-ΙΟ濃縮管中，3000rpm離心 大約20分鐘，濃縮至1毫升。
[0122] (2)于上液中加入0.2ml新配的0.1M NaI〇4溶液，室溫下避光攪拌20分鐘。
[0123] (3)將上述溶液裝入透析袋中，用ImM PH4.4的醋酸鈉緩沖液透析，4°C過夜。
[0124] (4)加2(^10.21^!19.5碳酸鹽緩沖液，使以上醛化41^的?!1升高到9.0~9.5，然后 立即加入2.5mg IgG抗體，在lml 0.01M碳酸鹽緩沖液中，室溫避光輕輕攪拌2小時。
[0125] (5)加0.1ml新配的4mg/ml NaBH4液，混勻，再置4°C2小時。
[0126] (6)將上述液裝入透析袋中，對0.15M PH7.4PBS透析，4°C過夜。
[0127 ] (7)在攪拌下逐滴加入等體積飽和硫酸銨，置4°C 1小時。
[0128] (8)3000rpm離心半小時，棄上清。沉淀物用半飽和硫酸銨洗二次，最后沉淀物溶于 少量0.15M PH7.4的PBS 中。
[0129] (9)將上述溶液裝入透析袋中，對0.15M PH7.4的PB緩沖鹽水透析約5個小時，去除 銨離子后，lOOOOrpm離心30分鐘去除沉淀，上清液即為酶結(jié)合物，加入體積1/100的1M Mgcl2溶液4°C保存。收集到的堿性磷酸酶(ALP)與TG單克隆抗體的偶聯(lián)物用上述酶反應(yīng)物 稀釋液以1:2000的體積比混合均勻，即得本發(fā)明試劑盒中試劑Ru [0130]第三步:試劑R2的制備
[0131 ]試劑R2配制操作規(guī)程:配方見(表3)，以配制1L為例：
[0132] (1)稱取Tr i s (三羥甲基氨基甲烷，分子式：（H0CH2) 3CNH2) 1 · 56g和NaCl 4 · 23g于 1L燒杯中；用移液器將Proclin-300量取0.2ml于少量純化水的燒杯中完全溶解后，倒入上 述1L容器中；
[0133] (2)用量筒量取800ml純化水于燒杯中，充分攪拌，直至完全溶解；用4M HCL或4M NaOH調(diào)PH，測量其范圍在7.35-7.45之間；
[0134] (3)稱取牛γ球蛋白（IgG) 1 ·8g于800ml純化水的燒杯中；
[0135] (4)最后定容1000ml，完全溶解后，測PH值，范圍在7.35-7.45之間即符合要求，用 0.2um濾器過濾;過濾完后，貼好標簽于2-8°C冷庫貯存；
[0136] 試劑R2的配制(表3)
[0137]
[0138] 第四步:標準品、質(zhì)控品和fe準品的配制：
[0139] (1)最高點：最高濃度點為X，目標點濃度為A，B，C，D，E，F(xiàn)，配制V體積的溶液時，需 加入原料的體積為分別為：（表4)
[0140]
[0141]
[0142] (2)甲狀腺球蛋白（TG)定量測定試劑盒TG標準品原料配制成濃度點為0，2，10， 100，250，500ng/ml;質(zhì)控品配制的濃度點為6，250ng/ml，校準品的濃度點為10，250ng/ml;
[0143] (3)充分混勻后，貼好標簽于2_8°C冷庫貯存；
[0144] 第五步:清洗濃縮液配制操作規(guī)程:配方見(表5)，以配制1L為例：
[0145] (1)稱取Tris 12.54g和NaCl 325.6g于 1L容器中；
[0146] (2)稱取5g Tween-20于100ml容器中加20ml水使其完全溶解后，倒入上述容器中；
[0147] (3)用移液器將Procl in-300量取0.2ml于盛有10ml純化水的燒杯中完全溶解后， 倒入上述1L容器中；
[0148] (4)用量筒量取800ml純化水于上述1L容器中，充分攪拌，直至完全溶解；
[0149] (5)用4]\1!1(^或4]\1恥0!1調(diào)？!1，測量其范圍在7.35 - 7.45之間；
[0150] (6)最后定容1000ml，測PH值，范圍在7.35-7.45之間即符合要求，完全溶解后用 0.2um濾器過濾即得;過濾完后，貼好標簽于2-8°C冷庫貯存；
[0151]清洗濃縮液的配制(表5)
[0152]
[0153] 第六步:稀釋液配方見(表6)，以配制1L為例：
[0154] (1)稱取900g小牛血清于1L的容器中；
[0155] (2)用移液器將Proclin-300量取lml倒入上述1L的容器中；
[0156] (3)最后用小牛血清定容到1000g，完全溶解后，用0.2um濾器過濾，貼好標簽于2-8 °C冷庫貯存；
[0157]稀釋液的配制(表6)
[0158]
[0159] 第七步:發(fā)光底物配制操作規(guī)程:配方見(表7)，以配制1L為例：
[0160] (1)稱取Tris 2.35g、NaCl 6.41g、Na2S03 0.002g和Proclin-300 0.2ml于 1L燒杯 中；
[0161] (2)用量筒量取800ml純化水于燒杯中，充分攪拌，直至完全溶解；用4M HC1或4M NaOH調(diào)PH，測量其范圍在7.95-8.05之間；
[0162] (3)最后定容至1000ml，測PH值，范圍在7 · 95-8 · 05之間即符合要求，用0 · 2um濾器 過濾;過濾完后，加入250ml IUMIPH0S530，混勻后，貼好標簽于2-8°C冷庫貯存；
[0163]發(fā)光底物的配制(表7)
[0164]
[0165]本發(fā)明一種甲狀腺球蛋白（TG)的測試方法（以100μΙ為例），包括下列步驟：
[0166] (1)使用前，需使用試劑盒內(nèi)4μ1校準品（選)進行曲線校正，并用ΧμL質(zhì)控品進行質(zhì) 量控制。測試結(jié)果在質(zhì)控范圍內(nèi)方可進行樣本的檢測。
[0167] (2)加4μ1 TG標準品、（Ι-Χ)μL質(zhì)控品、待測標本至對應(yīng)試管底部；
[0168] (3)加試劑6μ1辦至每一試管中；
[0169] (4)加試劑6μ1 R2至每一試管中；
[0170] (5)加4μ1磁分離試劑至每一試管中；
[0171] (6)用塑料薄膜覆蓋試管，多管混勻器輕輕振蕩試管架30秒后，置37°C水浴30分 鐘；
[0172] (7)試管連架放至磁分離器上，確保每支試管都與分離器表面接觸，沉淀2分鐘。緩 慢的倒轉(zhuǎn)分離器倒出上清液，把倒轉(zhuǎn)的試管連同分離器一起放在濾紙上，用力拍擊分離器 底部以除去粘在管壁上的所有液滴；
[0173] (8)將15μ1清洗濃縮液用純化水稀釋7倍后，加200μ1稀釋后的清洗液至每一試管 中，置多管混勻器上輕輕振蕩混勻30s。加樣時應(yīng)避免加樣力度過大而導(dǎo)致磁珠濺出?；靹?要徹底；
[0174] (9)重復(fù)步驟 6、7、6-遍；
[0175] (10)加35μ1發(fā)光底物溶液至試管中混勻3秒，迅速用準備好的發(fā)光檢測儀進行檢 測。
[0176] (11)如遇到高值HOOK樣本，建議臨床醫(yī)師根據(jù)其余測試指標選擇合適的稀釋倍數(shù) 用25μ1稀釋液對樣品進行稀釋。
[0177] 實施例2:
[0178] -種甲狀腺球蛋白測試試劑盒，該試劑盒由磁分離試劑，試劑心，試劑R2，標準品， 質(zhì)控品，校準品，清洗濃縮液，稀釋液及發(fā)光底物組成，其中：磁分離試劑:標記有小鼠抗人 TG的單克隆抗體的納米磁性微球，所述標記有小鼠抗人TG的單克隆抗體的納米磁性微球濃 度為167μg/ml;試劑心:含有堿性磷酸酶標記的TG抗體，所述堿性磷酸酶標記的TG抗體的濃 度為0.3μg/ml;試劑R2:含有牛y球蛋白質(zhì)組分的緩沖液;標準品，質(zhì)控品和fe準品：含有一 定量TG抗原的小牛血清溶液，所述標準品的濃度為0 (SO)、2 (S1)、10 (S2)、100