一種abo亞型血型檢測(cè)卡的制作方法
【專利說明】一種ABO亞型血型檢測(cè)卡
[0001]
技術(shù)領(lǐng)域
[0002]本發(fā)明涉及輸血醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，尤其涉及一種ABO亞型血型檢測(cè)卡及其制備。
[0003]
【背景技術(shù)】
[0004]ABO血型鑒定作為現(xiàn)代輸血前檢測(cè)最關(guān)鍵的步驟之一，其準(zhǔn)確的檢測(cè)結(jié)果是確保輸血安全的先決條件。在臨床上因ABO血型或亞型不合引起的輸血反應(yīng)是最嚴(yán)重的，引發(fā)的病死率高。已引起臨床醫(yī)生及輸血工作者的高度重視，ABO亞型在血型檢測(cè)中往往因?yàn)檎炊ㄐ筒环话l(fā)現(xiàn)。
[0005]ABO血型抗原的變異體較多，這些變異體是由ABO位點(diǎn)上的稀有基因作用而產(chǎn)生，它們可因紅細(xì)胞膜上的抗原分布不同而表現(xiàn)出不同的亞型。ABO亞型的血清學(xué)共同特點(diǎn)是與抗AJAB反應(yīng)很弱，甚至無反應(yīng)，血清中有時(shí)含有不規(guī)則的抗^或抗B1，如為分泌型，唾液中一般都含有A、B物質(zhì)和H物質(zhì)。目前對(duì)于ABO亞型的確認(rèn)采用血清學(xué)方法進(jìn)行區(qū)分，在A類表現(xiàn)型亞型可有A1、A2、A3、Ax、Am、AencUAe 1、Ay等，而B亞型的分型一般參照A亞型。
[0006]微柱凝膠免疫檢測(cè)技術(shù)是20世紀(jì)90年代產(chǎn)生的一種免疫檢測(cè)技術(shù)，其基本原理是利用分子篩技術(shù)，離心技術(shù)和特異性免疫反應(yīng)技術(shù)原理，把血型血清學(xué)技術(shù)與凝膠分子篩技術(shù)有機(jī)結(jié)合起來，可靈敏地檢測(cè)出可能存在的微弱血型抗原抗體反應(yīng)，被認(rèn)為是血型血清學(xué)檢驗(yàn)的里程碑。
[0007]目前國內(nèi)外已有一些廠家生產(chǎn)ABO亞型血型檢測(cè)卡，但是存在以下一些不足:一是采用單一型號(hào)的葡聚糖凝膠或聚丙烯葡聚糖凝膠，使得靈敏度與特異性無法兼顧;二是采用生理鹽水或抗體緩沖液溶脹凝膠，使得凝膠無法充分完全溶脹，以及破壞反應(yīng)體系的離子強(qiáng)度;三是對(duì)添加不同抗體的凝膠，凝膠洗滌緩沖液完全一致，無法有效保護(hù)抗體穩(wěn)定性；四是將必須的項(xiàng)目分散到幾張檢測(cè)卡中，實(shí)驗(yàn)工作量大、結(jié)果判斷不便。
[0008]

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009]本發(fā)明就是要克服以上不足，提供一種靈敏度高、特異型好，穩(wěn)定性強(qiáng)、保質(zhì)期長的ABO亞型血型檢測(cè)卡及其制備方法。
[0010]為達(dá)到上述目的，本發(fā)明通過以下技術(shù)方案進(jìn)行解決，包括以下步驟:
一種ABO亞型血型檢測(cè)卡，包括含有八個(gè)微柱的檢測(cè)卡，所述五個(gè)微柱中分別裝有等量的抗A凝膠、抗^凝膠、抗AB凝膠、抗B凝膠、抗H凝膠，其余三個(gè)微柱裝有等量的空白凝膠;其通過以下方法制備而成:
(I)葡聚糖凝膠的溶脹:選用至少兩種交聯(lián)葡聚糖凝膠進(jìn)行混合，然后加入純化水中進(jìn)行充分懸浮溶脹，再用純化水洗滌去除破碎顆粒，得到大小均勻、呈完整球形的葡聚糖凝膠顆粒； (2)制備各抗體稀釋液:
抗A稀釋液:以生理鹽水為基液，其中含有乙二胺四乙酸二鉀鹽(EDTA二鉀鹽)10-15g/L、牛血清白蛋白20-25g/L、蔗糖15-20g/L，其pH值為6.6-6.8;
抗^稀釋液:以生理鹽水為基液，其中含有乙二胺四乙酸二鉀鹽(EDTA二鉀鹽)10-15g/L、牛血清白蛋白15-18g/L、蔗糖20-22g/L，其pH值為6.6-6.8;
抗AB稀釋液:以生理鹽水為基液，其中含有乙二胺四乙酸二鉀鹽(EDTA二鉀鹽)15-20g/L、牛血清白蛋白10-15g/L、蔗糖18-26g/L，其pH值為6.6-6.8;
抗B稀釋液:以生理鹽水為基液，其中含有乙二胺四乙酸二鉀鹽(EDTA二鉀鹽)15-20g/L、牛血清白蛋白15-20g/L、蔗糖25-30g/L，其pH值為6.6-6.8;
抗H稀釋液:以生理鹽水為基液，其中含有乙二胺四乙酸二鉀鹽(EDTA二鉀鹽)5-10g/L、牛血清白蛋白5-8g/L，其pH值為6.6-6.8;
空白凝膠洗滌緩沖液:以純化水為溶劑，緩沖液中含有氯化鈉I.75g-2.07g/L、磷酸氫二鈉0.185-0.2198/1、磷酸二氫鈉0.203-0.248/1、甘氨酸18-218/1;并調(diào)節(jié) pH值為6.6-6.8；
(3)制備各抗體工作液:
取抗A單克隆抗體濃縮液與抗A稀釋液進(jìn)行混合，使得到的抗A單克隆抗體工作液的效價(jià) M28;
取抗Ai單克隆抗體濃縮液與抗Aj#釋液進(jìn)行混合，使得到的抗A1單克隆抗體工作液的效價(jià)2 8;
取抗AB單克隆抗體濃縮液與抗AB稀釋液進(jìn)行混合，使得到的抗AB單克隆抗體工作液的效價(jià)2 128;
取抗B單克隆抗體濃縮液與抗B稀釋液混合，使得到的抗B單克隆抗體工作液的效價(jià)之
128；
取抗財(cái)允體與抗H稀釋液混合，使得到的抗11抗體工作液的效價(jià)2 8 ；
(4)制備凝膠:
取八份等量的葡聚糖凝膠顆粒，取五份葡聚糖凝膠顆粒分別用等量的抗A稀釋液、抗A1稀釋液、抗AB稀釋液、抗B稀釋液、抗H稀釋液進(jìn)行洗滌至少三次，再分別加入相對(duì)應(yīng)的抗A單克隆抗體工作液、抗六:單克隆抗體工作液、抗AB單克隆抗體工作液、抗B單克隆抗體工作液、抗H單克隆抗體工作液進(jìn)行混合，得到抗A凝膠、抗^凝膠、抗AB凝膠、抗D凝膠、抗H凝膠；
另外三份葡聚糖凝膠顆粒分別用等量的空白凝膠洗滌緩沖液進(jìn)行洗滌至少三次，再分別加入空白凝膠洗滌緩沖液進(jìn)行混合，得到抗三份空白凝膠；
(5)分裝:
按照每管24-32微升的量，將抗A凝膠、抗^凝膠、抗AB凝膠、抗B凝膠、抗H凝膠和三份空白凝膠分別灌注到八個(gè)微柱中，形成ABO亞型血型檢測(cè)卡。
[0011]進(jìn)一步方案，所述步驟(I)中交聯(lián)葡聚糖凝膠為交聯(lián)葡聚糖凝膠G-25、交聯(lián)葡聚糖凝膠6-50、交聯(lián)葡聚糖凝膠6-75或交聯(lián)葡聚糖凝膠6-100。
[0012]進(jìn)一步方案，所述步驟(I)中在交聯(lián)葡聚糖凝膠混合物中加入純化水中進(jìn)行充分懸浮溶脹，其中交聯(lián)葡聚糖凝膠混合物和純化水的質(zhì)量體積比為1:2-1: 3。
[0013]進(jìn)一步方案，所述步驟(I)中懸浮溶脹的時(shí)間為48-72小時(shí)。[OOM]進(jìn)一步方案，所述步驟(4)中抗A單克隆抗體工作液、抗Ai單克隆抗體工作液、抗AB單克隆抗體工作液、抗B單克隆抗體工作液、抗H單克隆抗體工作液、空白凝膠洗滌緩沖液分別與洗滌后葡聚糖凝膠顆粒按體積比為I: 2-1:3進(jìn)行混合。
[0015]本發(fā)明選擇八等份由至少兩種交聯(lián)葡聚糖凝膠用純化水中進(jìn)行溶脹所得的葡聚糖凝膠顆粒，再分別用抗A稀釋液、抗々:稀釋液、抗AB稀釋液、抗B稀釋液、抗H稀釋液和三份空白凝膠洗滌緩沖液分別對(duì)其進(jìn)行洗滌至少三次，再加入相對(duì)應(yīng)的抗A單克隆抗體工作液、抗八:單克隆抗體工作液、抗AB單克隆抗體工作液、抗B單克隆抗體工作液、抗H單克隆抗體工作液和空白凝膠洗滌緩沖液進(jìn)行混合，得到抗A凝膠、抗々:凝膠、抗AB凝膠、抗D凝膠、抗H凝膠和三份空白凝膠。再將它們依次裝入檢測(cè)卡中的八個(gè)微柱中，形成ABO亞型血型檢測(cè)卡。該檢測(cè)卡用來檢測(cè)新生兒的血型鑒定，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)ABO血型或亞型進(jìn)行診斷、預(yù)防和治療具有重要的臨床意義。
[0016]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是:
1、本發(fā)明采用不同大小、不同篩分范圍的交聯(lián)葡聚糖凝膠進(jìn)行混合，有效避免了單一交聯(lián)葡聚糖凝膠的特異性與靈敏度不能兼顧的特點(diǎn)，可實(shí)現(xiàn)在保證特異性的同時(shí)，仍擁有很高的靈敏度；
2、本發(fā)明采用純化水作為交聯(lián)葡聚糖凝膠的溶脹溶液，可以使凝膠顆粒完全充分溶脹；
3、本發(fā)明用各抗體稀釋液洗滌葡聚糖凝膠顆粒，從而不會(huì)破壞抗體的保護(hù)液成分，能更有效的保證抗體的穩(wěn)定性;并保證了緩沖液體系的純粹性，不受其他離子的影響，有效保證了體系的離子強(qiáng)度。
[0017]4、本發(fā)明將ABO亞型檢測(cè)的所有項(xiàng)目集中于一張卡上，實(shí)驗(yàn)操作簡(jiǎn)單，結(jié)果觀察判斷便利，減輕了醫(yī)護(hù)工作人員的工作負(fù)擔(dān)。
[0018]
具體實(shí)施辦法實(shí)施例一:
一種ABO亞型血型檢測(cè)卡包括含有八個(gè)微柱的檢測(cè)卡，五個(gè)微柱中分別裝有等量的將抗A凝膠、抗^凝膠、抗AB凝膠、抗B凝膠、抗H凝膠，另三個(gè)微柱中均裝有等量的空白凝膠;其通過以下方法制備而成:
(1)葡聚糖凝膠的溶脹:
選用交聯(lián)葡聚糖凝膠G-25、交聯(lián)葡聚糖凝膠G-50和交聯(lián)葡聚糖凝膠G-75按照質(zhì)量比1:2:1進(jìn)行混合得葡聚糖凝膠混合物，然后按照葡聚糖凝膠混合物和純化水的質(zhì)量體積比為1:3加入純化水，進(jìn)行懸浮溶脹48小時(shí)后;再用純化水對(duì)其洗滌三次，去除破碎顆粒，得到大小均勻、呈完整球形的凝葡聚糖膠顆粒；
(2)抗體稀釋液的配制:
抗A稀釋液:以生理鹽水為基液，其中含有乙二胺四乙酸二鉀鹽(EDTA二鉀鹽)10g/L、牛血清白蛋白20g/L、蔗糖20g/L，稀釋液的pH值為6.6-6.8;
抗八!稀釋液:以生理鹽水為基液，其中含有乙二胺四乙酸二鉀鹽(EDTA二鉀鹽)15g/L、牛血清白蛋白16g/L、蔗糖20g/L，稀釋液的pH值為6.6-6.8;
抗AB稀釋液:以生理鹽水為基液，其中含有乙二胺四乙酸二鉀鹽(EDTA二鉀鹽)16g/L、牛血清白蛋白12g/L、蔗糖20g/L，稀釋液的pH值為6.6-6.8;
抗B稀釋液:以生理鹽水為基液，其中含有乙二胺四乙酸二鉀鹽(EDTA二鉀鹽)15g/L、牛血清白蛋白15g/L、蔗糖30g/L，稀釋液的pH值為6.6-6.8;
抗H稀釋液:以生理鹽水為基液，其中含有乙二胺四乙酸二鉀鹽(EDTA二鉀鹽)5g/L、牛血清白蛋白5g/L，稀釋液的pH值為6.6-6.8;
空白凝膠洗滌緩沖液:以純化水為溶劑，緩沖液中含有氯化鈉1.75gg/L、磷酸氫二鈉
0.185g/L、磷酸二氫鈉0.203g/L、甘氨酸18g/L;并調(diào)節(jié)pH值為6.6-6.8；
(3)抗體稀釋:
取抗A單克隆抗體濃縮液，與步驟二中抗A稀釋液混合，使得到的抗A單克隆抗體工作液效價(jià)2 128;
取抗Ai單克隆抗體濃縮液，與步驟二中抗Ai稀釋液混合，使得到的抗Ai單克隆抗體工作液效價(jià)2 8;
取抗AB單克隆抗體濃縮液，與步驟二中抗AB稀釋液混合，使得到的抗AB單克隆抗體工作液效價(jià)2 128;
取抗B單克隆抗體濃縮液，與步驟二中抗B稀釋液混合，使得到的抗B單克隆抗體工作液效價(jià)2 128;
取抗H單克隆抗體濃縮液，與步驟二中抗H稀釋液混合，使得到的抗H單克隆抗體工作液效價(jià)2 8;
(4)凝膠洗滌:
將步驟(I)中溶脹的葡聚糖凝膠顆粒均分為八等份，其中一份用等量的