抗A稀釋液洗滌三次，再用抗A單克隆抗體工作液與洗滌后的葡聚糖凝膠顆粒按照體積比1:2進(jìn)行混合均勻，得到抗A凝膠；
第二份用等量的抗^稀釋液洗滌三次，再用抗^單克隆抗體工作液與洗滌后的葡聚糖凝膠顆粒按照體積比I: 2比例混合均勻，得到抗^凝膠；
第三份用等量的抗AB稀釋液洗滌三次，再用抗AB單克隆抗體工作液與洗滌后的葡聚糖凝膠顆粒按照體積比I: 2比例混合均勻，得到抗AB凝膠；
第四份用等量抗B稀釋液洗滌三次，再用抗B單克隆抗體工作液與洗滌后的葡聚糖凝膠顆粒按照體積比I: 2比例混合均勻，得到抗B凝膠；
第五份用等量抗H稀釋液洗滌三次，再用抗H單克隆抗體工作液與洗滌后的葡聚糖凝膠顆粒按照體積比I: 2比例混合均勻，得到抗H凝膠；
余下三份每份均用等量空白凝膠洗滌緩沖液洗滌三次，再用空白凝膠洗滌緩沖液與洗滌后的葡聚糖凝膠顆粒按照體積比I: 2比例混合均勻，得到空白凝膠；
(5)分裝:
按照每管32微升的量，將步驟四中配制的各凝膠分別依次加入到空白檢測(cè)卡中的八個(gè)微柱中，其中第一個(gè)微柱加抗A凝膠，第二個(gè)微柱加抗^凝膠，第三個(gè)微柱加抗AB凝膠，第四個(gè)微柱加抗B凝膠，第五個(gè)微柱加抗H凝膠，余下三個(gè)微孔加空白凝膠，形成ABO亞型血型檢測(cè)卡。
[0019]
實(shí)施例二: 一種ABO亞型血型檢測(cè)卡包括含有八個(gè)微柱的檢測(cè)卡，五個(gè)微柱中分別裝有等量的將抗A凝膠、抗^凝膠、抗AB凝膠、抗B凝膠、抗H凝膠;另外三個(gè)微柱中均裝有等量的空白凝膠；其通過以下方法制備而成:
(1)葡聚糖凝膠的溶脹:
選用交聯(lián)葡聚糖凝膠G-75和交聯(lián)葡聚糖凝膠G-100按照質(zhì)量比1:1進(jìn)行混合得葡聚糖凝膠混合物，然后按照葡聚糖凝膠混合物和純化水的質(zhì)量體積比為1:2加入純化水，進(jìn)行懸浮溶脹48小時(shí)后;再用純化水對(duì)其洗滌三次，去除破碎顆粒，得到大小均勻、呈完整球形的凝葡聚糖膠顆粒；
(2)抗體稀釋液的配制:
抗A稀釋液:以生理鹽水為基液，其中含有乙二胺四乙酸二鉀鹽(EDTA二鉀鹽)15g/L、牛血清白蛋白22g/L、蔗糖18g/L，稀釋液的pH值為6.6-6.8;
抗八!稀釋液:以生理鹽水為基液，其中含有乙二胺四乙酸二鉀鹽(EDTA二鉀鹽)llg/L、牛血清白蛋白15g/L、蔗糖22g/L，稀釋液的pH值為6.6-6.8;
抗AB稀釋液:以生理鹽水為基液，其中含有乙二胺四乙酸二鉀鹽(EDTA二鉀鹽)19g/L、牛血清白蛋白15g/L、蔗糖25g/L，稀釋液的pH值為6.6-6.8;
抗B稀釋液:以生理鹽水為基液，其中含有乙二胺四乙酸二鉀鹽(EDTA二鉀鹽)18g/L、牛血清白蛋白20g/L、蔗糖25g/L，稀釋液的pH值為6.6-6.8;
抗H稀釋液:以生理鹽水為基液，其中含有乙二胺四乙酸二鉀鹽(EDTA二鉀鹽)10g/L、牛血清白蛋白8g/L，稀釋液的pH值為6.6-6.8;
空白凝膠洗滌緩沖液:以純化水為溶劑，緩沖液中含有氯化鈉I.8g/L、磷酸氫二鈉
0.2g/L、磷酸二氫鈉0.22g/L、甘氨酸20g/L;并調(diào)節(jié)pH值為6.6-6.8;
(3)抗體稀釋:
取抗A單克隆抗體濃縮液，與步驟二中抗A稀釋液混合，使得到的抗A單克隆抗體工作液效價(jià)2 128;
取抗Ai單克隆抗體濃縮液，與步驟二中抗Ai稀釋液混合，使得到的抗Ai單克隆抗體工作液效價(jià)2 8;
取抗AB單克隆抗體濃縮液，與步驟二中抗AB稀釋液混合，使得到的抗AB單克隆抗體工作液效價(jià)2 128;
取抗B單克隆抗體濃縮液，與步驟二中抗B稀釋液混合，使得到的抗B單克隆抗體工作液效價(jià)2 128;
取抗H單克隆抗體濃縮液，與步驟二中抗H稀釋液混合，使得到的抗H單克隆抗體工作液效價(jià)2 8;
(4)凝膠洗滌:
將步驟(I)中溶脹的葡聚糖凝膠顆粒均分為八等份，其中一份用等量的抗A稀釋液洗滌三次，再用抗A單克隆抗體工作液與洗滌后的葡聚糖凝膠顆粒按照體積比1:3進(jìn)行混合均勻，得到抗A凝膠；
第二份用等量的抗^稀釋液洗滌三次，再用抗^單克隆抗體工作液與洗滌后的葡聚糖凝膠顆粒按照體積比I: 3比例混合均勻，得到抗^凝膠；
第三份用等量的抗AB稀釋液洗滌三次，再用抗AB單克隆抗體工作液與洗滌后的葡聚糖凝膠顆粒按照體積比I: 3比例混合均勻，得到抗AB凝膠；
第四份用等量抗B稀釋液洗滌三次，再用抗B單克隆抗體工作液與洗滌后的葡聚糖凝膠顆粒按照體積比I: 3比例混合均勻，得到抗B凝膠；
第五份用等量抗H稀釋液洗滌三次，再用抗H單克隆抗體工作液與洗滌后的葡聚糖凝膠顆粒按照體積比I: 3比例混合均勻，得到抗H凝膠；
余下三份每份均用等量空白凝膠洗滌緩沖液洗滌三次，再用空白凝膠洗滌緩沖液與洗滌后的葡聚糖凝膠顆粒按照體積比I: 3比例混合均勻，得到空白凝膠；
(5)分裝:
按照每管24微升的量，將步驟四中配制的各凝膠分別依次加入到空白檢測(cè)卡中的八個(gè)微柱中，其中第一個(gè)微柱加抗A凝膠，第二個(gè)微柱加抗^凝膠，第三個(gè)微柱加抗AB凝膠，第四個(gè)微柱加抗B凝膠，第五個(gè)微柱加抗H凝膠，余下三個(gè)微孔加空白凝膠，形成ABO亞型血型檢測(cè)卡。
[0020]以上所述的僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明創(chuàng)造構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)，這些都屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種ABO亞型血型檢測(cè)卡，其特征在于:包括含有八個(gè)微柱的檢測(cè)卡，所述五個(gè)微柱中分別裝有等量的抗A凝膠、抗^凝膠、抗AB凝膠、抗B凝膠、抗H凝膠，其余三個(gè)微柱裝有等量的空白凝膠;其通過以下方法制備而成: (1)葡聚糖凝膠的溶脹:選用至少兩種交聯(lián)葡聚糖凝膠進(jìn)行混合，然后加入純化水中進(jìn)行充分懸浮溶脹，再用純化水洗滌去除破碎顆粒，得到大小均勻、呈完整球形的葡聚糖凝膠顆粒； (2)制備各抗體稀釋液: 抗A稀釋液:以生理鹽水為基液，其中含有乙二胺四乙酸二鉀鹽(EDTA二鉀鹽)10-15g/L、牛血清白蛋白20-25g/L、蔗糖15-20g/L，其pH值為6.6-6.8; 抗八!稀釋液:以生理鹽水為基液，其中含有乙二胺四乙酸二鉀鹽(EDTA二鉀鹽)10-15g/L、牛血清白蛋白15-18g/L、蔗糖20-22g/L，其pH值為6.6-6.8; 抗AB稀釋液:以生理鹽水為基液，其中含有乙二胺四乙酸二鉀鹽(EDTA二鉀鹽)15-20g/L、牛血清白蛋白10-15g/L、蔗糖18-26g/L，其pH值為6.6-6.8; 抗B稀釋液:以生理鹽水為基液，其中含有乙二胺四乙酸二鉀鹽(EDTA二鉀鹽)15-20g/L、牛血清白蛋白15-20g/L、蔗糖25-30g/L，其pH值為6.6-6.8; 抗H稀釋液:以生理鹽水為基液，其中含有乙二胺四乙酸二鉀鹽(EDTA二鉀鹽)5-10g/L、牛血清白蛋白5-8g/L，其pH值為6.6-6.8; 空白凝膠洗滌緩沖液:以純化水為溶劑，緩沖液中含有氯化鈉I.75g-2.07g/L、磷酸氫二鈉0.185-0.2198/1、磷酸二氫鈉0.203-0.248/1、甘氨酸18-218/1;并調(diào)節(jié) pH值為6.6-6.8； (3)制備各抗體工作液: 取抗A單克隆抗體濃縮液與抗A稀釋液進(jìn)行混合，使得到的抗A單克隆抗體工作液的效價(jià) M28; 取抗Ai單克隆抗體濃縮液與抗Aj#釋液進(jìn)行混合，使得到的抗A1單克隆抗體工作液的效價(jià)2 8; 取抗AB單克隆抗體濃縮液與抗AB稀釋液進(jìn)行混合，使得到的抗AB單克隆抗體工作液的效價(jià)2 128; 取抗B單克隆抗體濃縮液與抗B稀釋液混合，使得到的抗B單克隆抗體工作液的效價(jià)之128； 取抗財(cái)允體與抗H稀釋液混合，使得到的抗!1抗體工作液的效價(jià)2 8； (4)制備凝膠: 取八份等量的葡聚糖凝膠顆粒，取五份葡聚糖凝膠顆粒分別用等量的抗A稀釋液、抗A1稀釋液、抗AB稀釋液、抗B稀釋液、抗H稀釋液進(jìn)行洗滌至少三次，再分別加入相對(duì)應(yīng)的抗A單克隆抗體工作液、抗六:單克隆抗體工作液、抗AB單克隆抗體工作液、抗B單克隆抗體工作液、抗H單克隆抗體工作液進(jìn)行混合，得到抗A凝膠、抗^凝膠、抗AB凝膠、抗D凝膠、抗H凝膠； 另外三份葡聚糖凝膠顆粒分別用等量的空白凝膠洗滌緩沖液進(jìn)行洗滌至少三次，再分別加入空白凝膠洗滌緩沖液進(jìn)行混合，得到抗三份空白凝膠； (5)分裝: 按照每管24-32微升的量，將抗A凝膠、抗A1凝膠、抗AB凝膠、抗B凝膠、抗H凝膠和三份空白凝膠分別灌注到八個(gè)微柱中，形成ABO亞型血型檢測(cè)卡。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種ABO亞型血型檢測(cè)卡，其特征在于:所述步驟(I)中交聯(lián)葡聚糖凝膠為交聯(lián)葡聚糖凝膠G-25、交聯(lián)葡聚糖凝膠G-50、交聯(lián)葡聚糖凝膠G-75或交聯(lián)葡聚糖凝膠G-100。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種ABO亞型血型檢測(cè)卡，其特征在于:所述步驟(I)中在交聯(lián)葡聚糖凝膠混合物中加入純化水中進(jìn)行充分懸浮溶脹，其中交聯(lián)葡聚糖凝膠混合物和純化水的質(zhì)量體積比為1:2-1: 3。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種ABO亞型血型檢測(cè)卡，其特征在于:所述步驟(I)中懸浮溶脹的時(shí)間為48-72小時(shí)。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種ABO亞型血型檢測(cè)卡，其特征在于:所述步驟(4)中抗A單克隆抗體工作液、抗六:單克隆抗體工作液、抗AB單克隆抗體工作液、抗B單克隆抗體工作液、抗H單克隆抗體工作液、空白凝膠洗滌緩沖液分別與洗滌后葡聚糖凝膠顆粒按體積比為1:2-1:3進(jìn)行混合。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種ABO亞型血型檢測(cè)卡，包括含有八個(gè)微柱的檢測(cè)卡，所述五個(gè)微柱中分別裝有等量的抗A凝膠、抗A1凝膠、抗AB凝膠、抗B凝膠、抗H凝膠，其余三個(gè)微柱裝有等量的空白凝膠；其通過葡聚糖凝膠的溶脹；制備各抗體稀釋液；制備各抗體工作液；制備凝膠；分裝形成ABO亞型血型檢測(cè)卡。本發(fā)明采用不同大小、不同篩分范圍的交聯(lián)葡聚糖凝膠進(jìn)行混合，并用純化水進(jìn)行溶脹，有效地保證特異性的同時(shí)還擁有很高的靈敏度，并有效保證了體系的離子強(qiáng)度。從而實(shí)現(xiàn)對(duì)于ABO亞型血型進(jìn)行診斷、預(yù)防和治療具有重要的臨床意義。
【IPC分類】G01N33/80
【公開號(hào)】CN105628940
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201511010700
【發(fā)明人】何流, 張艷, 徐寅生, 路金泉, 余濤, 李亞, 尹培培
【申請(qǐng)人】合肥天一生物技術(shù)研究所
【公開日】2016年6月1日
【申請(qǐng)日】2015年12月30日