11，所述的進口 11設(shè)置在PDMS本體1的中央，所述的PDMS本體1內(nèi)設(shè)有7條通道12，所述的7條通道12沿TOMS本體1的徑向呈發(fā)散狀分布，所述的通道12的一端與進口 11相連且另一端設(shè)有出口 14，所述的通道12內(nèi)設(shè)有多個柱狀的凸起15，所述的凸起15的上端部與通道12的頂部連接，所述的凸起15的下端部與通道12的底部連接，優(yōu)選地，所述的凸起15的橫截面為正六邊形。在圖3中，由于PDMS本體1為透明的，所以俯視時可以清楚的看到通道12，通道12是設(shè)置在PDMS本體1內(nèi)部的，其僅通過出口 14和進口 11與大氣連通。
[0031]在實際應(yīng)用中，7條通道12中選出一條作為控制通道122，另外的作為檢測通道121，控制通道122不固定抗體，檢測通道121內(nèi)固定第二抗體，具體固定方法見下文的表面處理的步驟。
[0032]在本實施例中，同一通道12中的每3個凸起15組成一個凸起組13，每個凸起組13中的凸起15的連線為直線，每個凸起組13中的凸起15的連線與通道12的長度方向垂直。當然在制備過程中，每個凸起組中的凸起的連線與通道的長度方向的夾角α可以選擇為70°、80°、85°，對此本實施例并不過多的限制。
[0033]本微流控芯片的制造方法如下:
[0034]芯片主體采用PDMS-PDMS結(jié)構(gòu)，以模塑法制作，具體步驟如下:
[0035]a)硅模具制作:模具的制作包括繪制版圖、制作掩模和光刻三個標準步驟。
[0036]b)PDMS基片的制作:將Sylgard 184硅橡膠彈性體和Sylgard 184固化劑以質(zhì)量比10:1的比例混合，攪拌均勻，在真空干燥箱中脫氣，傾倒在硅模具表面，在真空干燥箱中以80°C烘烤15分鐘，取出，冷卻，剝離。得到具有7條通道12的PDMS基片。
[0037]c)鍵合封裝:將含有通道12的PDMS打孔，確定通道12的進口 11和出口 14;然后將此PDMS基片和另一片平整的PDMS切成芯片單元。以氧氣等離子體方法鍵合。芯片制作完畢。
[0038]在應(yīng)用于食品中危害因子測試之前，需要將通過氧氣等離子體方法鍵合的芯片預(yù)先進行表面處理，表面處理的具體方法為:以4.0mL/min的速度進口 11通入5.0wt %的3-氨基丙基三乙氧基硅烷溶液(95wt %乙醇一5wt %雙蒸水混合溶液)10分鐘。停止流動，培育15分鐘，依次用乙醇沖洗15分鐘和通空氣吹洗，然后在80°C烘30分鐘。隨后，注入戊二醛溶液(1.0%的水溶液，Ph = 9.2) 10分鐘后靜止，在堿性條件下培育15分鐘，使表面氨基與交聯(lián)劑戊二醛反應(yīng)。用0.1M碳酸鈉緩沖液(pH = 9.2)沖洗通道，然后注入第二抗體溶液(0.2mg/mL抗體分散于pH 9.2的0.1M碳酸鈉緩沖液，含0.05 % Tween-20) 10分鐘。培育20min后，使用
0.5M Tr is緩沖液(pH 9.0)-0.05wt % Tween混合液封閉未反應(yīng)的戊二醛。為了減少非特異性蛋白質(zhì)的吸附，通入1.0wt %的牛血清白蛋白溶液(1 OmM roS，pH 7.4)，培育20分鐘，然后用10mM PBS沖洗干凈。
[0039]在測試食品中的多種危害因子時，按以下步驟操作:
[0040]步驟1:從微流控芯片的進口11加入待測樣品，使樣品進入微流控芯片的檢測通道和控制通道中；其中，微流控芯片內(nèi)的檢測通道121內(nèi)固定有能夠與待測抗原特異性結(jié)合的第二抗體;控制通道122內(nèi)部不固定任何抗體。比如如果食品中的危害因子為抗原A、抗原B、抗原C，則兩條檢測通道121內(nèi)固定第二抗體A，兩條檢測通道121內(nèi)固定第二抗體B，兩條檢測通道121內(nèi)固定第二抗體C。
[0041 ]步驟2:將緩沖液從進口 11加入檢測通道121中，沖洗數(shù)次；
[0042]步驟3:從進口11中加入的熒光納米探針，使熒光納米探針進入檢測通道中，熒光納米探針的表面修飾有第一抗體，第一抗體能夠與特定抗原結(jié)合;熒光納米探針分為三種，一種熒光納米探針的表面修飾與抗原A對應(yīng)的第一抗體A，一種熒光納米探針的表面修飾與抗原B對應(yīng)的第一抗體B，一種熒光納米探針的表面修飾與抗原C對應(yīng)的第一抗體C。這樣第二抗體A-抗原A-第一抗體A形成“三明治”結(jié)構(gòu)來實現(xiàn)對抗原A的檢測，其他抗原檢測同理。
[0043]步驟4:將緩沖液從進口11加入檢測通道中，沖洗數(shù)次；
[0044]步驟5:用熒光顯微鏡或時間分辨熒光儀檢測檢測通道中的熒光信號。
[0045]通過上述方法可以一次性有效的檢測食品中多種危害因子，實現(xiàn)了對食品中的危害因子同時檢測的目的。
[0046]以上所述的僅為本實用新型的較佳實施例，凡在本實用新型的精神和原則范圍內(nèi)所作的任何修改、等同替換和改進等，均應(yīng)包含在本實用新型的保護范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項】
1.一種用于食品中多種危害因子同步檢測的微流控芯片，包括roMS本體(1)，其特征在于:所述的PDMS本體(1)上設(shè)有進口( 11)，所述的PDMS本體(1)內(nèi)設(shè)有多條通道(12)，所述的通道(12)的一端與進口(11)相連且另一端設(shè)有出口(14)，所述的通道(12)內(nèi)設(shè)有多個柱狀的凸起(15)。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于食品中多種危害因子同步檢測的微流控芯片，其特征在于，所述的凸起(15)的上端部與通道(12)的頂部連接，所述的凸起(15)的下端部與通道(12)的底部連接。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用于食品中多種危害因子同步檢測的微流控芯片，其特征在于，所述的凸起(15)的橫截面為正六邊形。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用于食品中多種危害因子同步檢測的微流控芯片，其特征在于，同一通道(12)中的每3?9個凸起(15)組成一個凸起組(13)，每個凸起組(13)中的凸起(15)的連線為直線。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的用于食品中多種危害因子同步檢測的微流控芯片，其特征在于，每個凸起組(13)中的凸起(15)的連線與通道(12)的長度方向的夾角大于60°。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的用于食品中多種危害因子同步檢測的微流控芯片，其特征在于，每個凸起組(13)中的凸起(15)的連線與通道(12)的長度方向垂直。7.根據(jù)權(quán)利要求1至6任一所述的用于食品中多種危害因子同步檢測的微流控芯片，其特征在于，所述的通道(12)的數(shù)量為5?12條。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的用于食品中多種危害因子同步檢測的微流控芯片，其特征在于，所述的PDMS本體(1)為圓盤狀。9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的用于食品中多種危害因子同步檢測的微流控芯片，其特征在于，所述的進口( 11)設(shè)置在PDMS本體(1)的中央。10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的用于食品中多種危害因子同步檢測的微流控芯片，其特征在于，所述的多條通道(12)沿PDMS本體(1)的徑向呈發(fā)散狀分布。
【專利摘要】本實用新型公開了一種用于食品中多種危害因子同步檢測的微流控芯片，包括PDMS本體，所述的PDMS本體上設(shè)有進口，所述的PDMS本體內(nèi)設(shè)有多條通道，所述的通道的一端與進口相連且另一端設(shè)有出口，所述的通道內(nèi)設(shè)有多個柱狀的凸起。本實用新型的目的在于提供一種集成化、高靈敏、全檢測的用于食品中多種危害因子同步檢測的微流控芯片。
【IPC分類】G01N21/64
【公開號】CN205120593
【申請?zhí)枴緾N201520950608
【發(fā)明人】張恒, 易長青, 丁晶, 馬淑棉
【申請人】深圳出入境檢驗檢疫局食品檢驗檢疫技術(shù)中心, 中山大學(xué)
【公開日】2016年3月30日
【申請日】2015年11月25日