一種缺血修飾白蛋白檢測試劑及其檢測方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)學檢驗技術領域，具體涉及一種缺血修飾白蛋白檢測試劑及其檢測 方法。
【背景技術】
[0002] 缺血修飾白蛋白（ischemiamodifiedalbumin，IMA)是人血清白蛋白在氧自由基 作用下，其氨基酸末端結構發(fā)生改變，導致其與某些外源性金屬鈷、銅、鎳結合能力減弱的 白蛋白。近年來，隨著對缺血修飾白蛋白的深入研究，許多研究顯示缺血修飾白蛋白是急性 心肌缺血的一種理想的生化標志物。與傳統(tǒng)的急性心肌缺血標志物相比，缺血修飾白蛋白 (IMA)在缺血發(fā)作的短時間內血液中濃度就會升高，但此時心肌細胞的不可逆性損傷還未 發(fā)生，因此IMA更具早期診斷價值，能夠輔助臨床醫(yī)生盡早明確心肌缺血的診斷，從而進 行早期干預和治療。
[0003] 目前，IMA的測定方法一般采用白蛋白鈷結合試驗方法。由于白蛋白鈷結合試驗 的檢測原理是依據(jù)IMA較正常白蛋白結合金屬鈷離子能力降低，在反應系統(tǒng)中加入一定量 的鈷離子，并通過測定游離鈷離子的濃度，推算出IMA的含量。由于該檢測結果存在檢測結 果不明顯，檢測結果不穩(wěn)定的缺點。隨著對白蛋白鈷結合試驗方法的深入研究，人們對白蛋 白鈷結合試驗方法進行了改造，在檢測的過程中加入顯色劑與游離鈷反應產(chǎn)生顏色，用分 光光度計測定吸光度值大小，從而間接表示血清中IMA含量，以提高檢測結果的明顯性和 準確性。
[0004] 中國專利申請201210331744. 2公開了缺血修飾白蛋白組合測定試劑、測定方法 及試劑盒，該缺血修飾白蛋白組合測定試劑以二硫蘇糖醇作為游離鈷離子的顯色劑，可以 提高檢測結果的清晰度。但是，二硫蘇糖醇容易受外源性金屬離子干擾，而且二硫蘇糖醇易 被空氣氧化，穩(wěn)定性差，難以保存，不利于該檢測試劑的推廣和應用。
[0005] 中國專利申請201310537922. 1公開了一種缺血修飾白蛋白檢測試劑及檢測方 法，該檢測試劑以噻二唑偶氮二甲氨基苯酚作為游離鈷離子的顯色劑，噻二唑偶氮二甲氨 基苯酚可以有效避免Pd、Ni、Zn和Cu等金屬離子的干擾，而且噻二唑偶氮二甲氨基苯酚具 有穩(wěn)定、低毒、易于保存的優(yōu)點，大大增強了試劑的穩(wěn)定性。但是，該檢測試劑的動力學曲線 不佳，線性范圍狹窄，影響了實驗的重現(xiàn)性和穩(wěn)定性。
[0006] 因此，研究發(fā)開出一種重復性好、檢測敏感度高和穩(wěn)定性好的缺血修飾白蛋白檢 測試劑是目前亟需解決的難題。

【發(fā)明內容】

[0007] 為了克服現(xiàn)有技術缺血修飾白蛋白檢測試劑存在測定結果重復性差、檢測敏感度 低和穩(wěn)定性差的缺點，本發(fā)明的目的是提供一種缺血修飾白蛋白檢測試劑及其檢測方法， 以解決上述的問題。
[0008] 本發(fā)明提供的缺血修飾白蛋白檢測試劑包括試劑R1和試劑R2,所述試劑R1包括 以下組分： 三羥甲基氨基甲烷緩沖液80-150mmol/L、氯化鈷40-80mmol/L、三乙醇胺0.l-5mol/L和防腐劑 〇. 05-0. 3mol/L; 所述試劑R2包括以下組分： MES緩沖液 80-150mmol/L、1-亞硝基-2-萘酚 10-50mmol/L、三乙醇胺 0?l-5mol/L、谷 胱甘肽 2-10mmol/L和防腐劑 0. 05-0. 3mol/L。
[0009] 優(yōu)選地，本發(fā)明提供的缺血修飾白蛋白檢測試劑包括試劑R1和試劑R2,所述試劑 R1包括以下組分： 三羥甲基氨基甲烷緩沖液100mm〇l/L、氯化鈷50mmol/L、三乙醇胺2mol/L和防腐劑 0.lmol/L； 所述試劑R2包括以下組分： MES緩沖液100mmol/L、l-亞硝基-2-萘酚35mmol/L、三乙醇胺2mol/L、谷胱甘肽 6mmol/L和防腐劑 0?lmol/L〇
[0010] 進一步地，所述三羥甲基氨基甲烷緩沖液的pH值為7. 0-8. 0,所述三羥甲基氨基 甲烷緩沖液的pH值優(yōu)選為7. 5。
[0011] 進一步地，所述MES緩沖液的pH值為7. 5-8. 5,所述的MES緩沖液的pH值優(yōu)選為 8. 0,在堿性的環(huán)境下可以提高的1-亞硝基-2-萘酚溶解度，增加試劑檢測的敏感性。
[0012] 進一步地，所述防腐劑為proclin300。proclin300具有廣譜抗菌性和作用速度快 的優(yōu)點，可以大大的延長檢測試劑的保質期。
[0013] 本發(fā)明提供的MES緩沖液是2-嗎啉乙磺酸（MES)緩沖液，2-嗎啉乙磺酸的分子式 為C6H13N04S，CAS號為 4432-31-9。
[0014] 本發(fā)明提供的缺血修飾白蛋白檢測試劑是以1-亞硝基-2-萘酚作為游離鈷離子 的顯色劑，1-亞硝基-2-萘酚對鈷離子的檢測敏感度高，可以檢測到較低濃度的鈷離子，可 以顯著的提高檢測試劑的準確性；同時，本發(fā)明的缺血修飾白蛋白檢測試劑加入了三乙醇 胺作為穩(wěn)定劑，可以加速鈷離子與正常白蛋白結合的效果，在一定時間內，完全與正常白蛋 白集合，進一步提高試劑檢測結果的準確性；而且該檢測試劑還添加有谷胱甘肽還原劑，可 以進一步提高1-亞硝基-2-萘酚的穩(wěn)定性，有利于該缺血修飾白蛋白檢測試劑的保存。
[0015] 經(jīng)試驗證明，本發(fā)明提供的缺血修飾白蛋白檢測試劑的具有鈷離子檢測敏感度 高、測定結果重復性好和穩(wěn)定性好的優(yōu)點，是一種理想的缺血修飾白蛋白的檢測試劑。
[0016] 另外，本發(fā)明還提供了缺血修飾白蛋白檢測試劑的檢測方法，包括以下步驟：采用 全自動生化分析儀以兩點終點法進行測定，將樣品與試劑混合，經(jīng)過5-10min，當反應達到 平衡點時，檢測反應后顏色對光的吸收強度，以此計算樣品的濃度。
[0017] 進一步地，所述試劑R1與試劑R2的體積比為6:1。
[0018] 進一步地，所述全自動生化分析儀的主波長為505nm，次波長為660nm〇
[0019] 本發(fā)明提供的缺血修飾白蛋白檢測試劑的檢測原理是：依據(jù)缺血修飾白蛋白結合 金屬鈷離子能力減弱的性質進行定量測定。正常對照的血清樣品中白蛋白以活性形式存 在，加入氯化鈷溶液后，鈷離子即可與白蛋白N末端結合，溶液中存在的游離鈷離子濃度較 低；而缺血個體的血清樣品中含有較多的缺血修飾白蛋白，加入同樣濃度的氯化鈷溶液，由 于缺血修飾白蛋白與鈷離子集合能力弱，溶液中存在較高濃度的游離鈷離子，利用試劑中 1-亞硝基-2-萘酚與游離鈷離子結合產(chǎn)生棕紅色的絡合物，缺血修飾白蛋白含量與顏色程 度呈正比，在505nm下檢測吸光度，可間接對缺血修飾白蛋白進行定量測定。
[0020] 總之，與現(xiàn)有技術相比具有如下優(yōu)勢，本發(fā)明提供的缺血修飾白蛋白檢測試劑鈷 離子檢測敏感度高，檢測結果重復性好，穩(wěn)定性好，而且價格便宜，易于保存，是一種理想的 缺血修飾白蛋白的檢測試劑，有利于該缺血修飾白蛋白檢測試劑的臨床應用。
【具體實施方式】
[0021] 以下通過具體實施例進一步描述本發(fā)明，本發(fā)明不僅僅限于以下實施例。在本發(fā) 明的范圍內或者在不脫離本發(fā)明的內容、精神和范圍內，對本發(fā)明進行的變更、組合或替 換，對于本領域的技術人員來說是顯而易見的，且包含在本發(fā)明的范圍之內。
[0022] 實施例1、缺血修飾白蛋白檢測試劑 缺血修飾白蛋白檢測試劑包括試劑R1和試劑R2,所述試劑R1包括以下組分：pH值為7. 0的三羥甲基氨基甲烷緩沖液80mmol/L、氯化鈷40mmol/L、三乙醇胺 0? lmol/L和proclin300 0? 05mol/L ; 所述試劑R2包括以下組分： pH值為7. 5的MES緩沖液80mmo