g削皮、切片，麥麩25g加適量自來水煎煮30min，紗 布濾過，濾液加7. 5g的瓊脂，7. 5g的葡萄糖，0. 75g的MgS04,1. 5g的KH2PO4，補加自來水至 500mL，121°C 高壓滅菌 30min ;
[0040] (2)液體培養(yǎng)基配制：土豆100g削皮、切片，麥麩25g加適量自來水煎煮30min，紗 布濾過，濾液加7. 5g的葡萄糖，0. 75g的MgS04,1. 5g的KH2PO4，補加自來水至500mL，121°C 高壓滅菌30min ;
[0041] (3)發(fā)酵菌種的準備：樺褐孔菌接種到斜面培養(yǎng)基上，28°C培養(yǎng)5-7d，此時菌絲生 長密集，用接種針挑取Icm2的菌塊接種到裝有液體培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，放搖床中培養(yǎng)，搖床 轉(zhuǎn)速130r/min，28°C培養(yǎng)15d，使之產(chǎn)生大量大小均勻、如"珍珠狀"的菌球，得菌球液。
[0042] (4)發(fā)酵基質(zhì)的準備：將六味地黃丸組方藥材干燥處理后，粉碎至綠豆般顆粒，每 瓶裝200g于固體發(fā)酵瓶內(nèi)，加水制成含水量50% -65%的發(fā)酵基質(zhì)，蓋瓶塞，裝瓶并121°C 高壓滅菌Ih備用；
[0043] (5)雙向固體發(fā)酵：無菌操作，每個固體發(fā)酵瓶內(nèi)接種菌球液IOmL左右，將發(fā)酵瓶 置于26°C -28Γ發(fā)酵室培養(yǎng)，待菌絲長滿瓶后，繼續(xù)發(fā)酵30d，終止發(fā)酵，掏瓶，收集藥性菌 質(zhì)。
[0044] (6)藥性菌質(zhì)后處理：收集的藥性菌質(zhì)及時于50°C溫度下干燥。
[0045] 實施例4
[0046] (1)斜面培養(yǎng)基配制：土豆100g削皮、切片，麥麩25g加適量自來水煎煮30min，紗 布濾過，濾液加7. 5g的瓊脂，7. 5g的葡萄糖，0. 75g的MgS04,1. 5g的KH2PO4，補加自來水至 500mL，121°C 高壓滅菌 30min ;
[0047] (2)液體培養(yǎng)基配制：土豆100g削皮、切片，麥麩25g加適量自來水煎煮30min，紗 布濾過，濾液加7. 5g的葡萄糖，0. 75g的MgS04,1. 5g的KH2PO4，補加自來水至500mL，121°C 高壓滅菌30min ;
[0048] (3)發(fā)酵菌種的準備：樺褐孔菌接種到斜面培養(yǎng)基上，28°C培養(yǎng)5-7d，此時菌絲生 長密集，用接種針挑取Icm2的菌塊接種到裝有液體培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，放搖床中培養(yǎng)，搖床 轉(zhuǎn)速130r/min，28°C培養(yǎng)15d，使之產(chǎn)生大量大小均勻、如"珍珠狀"的菌球，得菌球液。
[0049] (4)發(fā)酵基質(zhì)的準備：將葛根藥渣干燥處理后，粉碎至綠豆般顆粒，每瓶裝200g于 固體發(fā)酵瓶內(nèi)，加水制成含水量50% -65%的發(fā)酵基質(zhì)，蓋瓶塞，裝瓶并121°C高壓滅菌Ih 備用；
[0050] (5)雙向固體發(fā)酵：無菌操作，每個固體發(fā)酵瓶內(nèi)接種菌球液IOmL左右，將發(fā)酵瓶 置于26°C -28Γ發(fā)酵室培養(yǎng)，待菌絲長滿瓶后，繼續(xù)發(fā)酵30d，終止發(fā)酵，掏瓶，收集藥性菌 質(zhì)。
[0051] (6)藥性菌質(zhì)后處理：收集的藥性菌質(zhì)及時于50°C溫度下干燥。
[0052] 實施例5
[0053] (1)斜面培養(yǎng)基配制：土豆100g削皮、切片，麥麩25g加適量自來水煎煮30min，紗 布濾過，濾液加7. 5g的瓊脂，7. 5g的葡萄糖，0. 75g的MgS04,1. 5g的KH2PO4，補加自來水至 500mL，121°C 高壓滅菌 30min ;
[0054] (2)液體培養(yǎng)基配制：土豆100g削皮、切片，麥麩25g加適量自來水煎煮30min，紗 布濾過，濾液加7. 5g的葡萄糖，0. 75g的MgS04,1. 5g的KH2PO4，補加自來水至500mL，121°C 高壓滅菌30min ;
[0055] (3)發(fā)酵菌種的準備：樺褐孔菌接種到斜面培養(yǎng)基上，28°C培養(yǎng)5-7d，此時菌絲生 長密集，用接種針挑取Icm2的菌塊接種到裝有液體培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，放搖床中培養(yǎng)，搖床 轉(zhuǎn)速130r/min，28°C培養(yǎng)15d，使之產(chǎn)生大量大小均勻、如"珍珠狀"的菌球，得菌球液。
[0056] (4)發(fā)酵基質(zhì)的準備：將葛根芩連湯藥渣干燥處理后，粉碎至綠豆般顆粒，每瓶裝 200g于固體發(fā)酵瓶內(nèi)，加水制成含水量50% -65%的發(fā)酵基質(zhì)，蓋瓶塞，裝瓶并121°C高壓 滅菌Ih備用；
[0057] (5)雙向固體發(fā)酵：無菌操作，每個固體發(fā)酵瓶內(nèi)接種菌球液IOmL左右，將發(fā)酵瓶 置于26°C _28°C發(fā)酵室培養(yǎng)，待菌絲長滿瓶后，繼續(xù)發(fā)酵30d，終止發(fā)酵，掏瓶，收集藥性菌 質(zhì)。
[0058] (6)藥性菌質(zhì)后處理：收集的藥性菌質(zhì)及時于50°C溫度下干燥。
[0059] 實施例6
[0060] (1)斜面培養(yǎng)基配制：土豆100g削皮、切片，麥麩25g加適量自來水煎煮30min，紗 布濾過，濾液加7. 5g的瓊脂，7. 5g的葡萄糖，0. 75g的MgS04,1. 5g的KH2PO4，補加自來水至 500mL，121°C 高壓滅菌 30min ;
[0061] (2)液體培養(yǎng)基配制：土豆100g削皮、切片，麥麩25g加適量自來水煎煮30min，紗 布濾過，濾液加7. 5g的葡萄糖，0. 75g的MgS04,1. 5g的KH2PO4，補加自來水至500mL，121°C 高壓滅菌30min ;
[0062] (3)發(fā)酵菌種的準備：樺褐孔菌接種到斜面培養(yǎng)基上，28°C培養(yǎng)5-7d，此時菌絲生 長密集，用接種針挑取Icm2的菌塊接種到裝有液體培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，放搖床中培養(yǎng)，搖床 轉(zhuǎn)速130r/min，28°C培養(yǎng)15d，使之產(chǎn)生大量大小均勻、如"珍珠狀"的菌球，得菌球液。
[0063] (4)發(fā)酵基質(zhì)的準備：將六味地黃丸藥渣干燥處理后，粉碎至綠豆般顆粒，每瓶裝 200g于固體發(fā)酵瓶內(nèi)，加水制成含水量50% -65%的發(fā)酵基質(zhì)，蓋瓶塞，裝瓶并121°C高壓 滅菌Ih備用；
[0064] (5)雙向固體發(fā)酵：無菌操作，每個固體發(fā)酵瓶內(nèi)接種菌球液IOmL左右，將發(fā)酵瓶 置于26°C -28Γ發(fā)酵室培養(yǎng)，待菌絲長滿瓶后，繼續(xù)發(fā)酵30d，終止發(fā)酵，掏瓶，收集藥性菌 質(zhì)。
[0065] (6)藥性菌質(zhì)后處理：收集的藥性菌質(zhì)及時于50°C溫度下干燥。
[0066] 藥理學實驗
[0067] -、藥性菌質(zhì)活性部位的提取和含量測定：
[0068](一）藥性菌質(zhì)活性部位的提取：
[0069] 醇提物的萃取分離：取藥性菌質(zhì)粗粉1kg，按1:12 (m/v)的比例，加入80%乙醇回 流提?。╨h/次，提取3次）。將提取后的藥渣晾干留用，提取液合并后減壓回收溶劑，得乙 醇浸膏132. lg。將乙醇浸膏混懸于水中，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，分別減壓回 收溶劑，真空干燥得石油醚提取物I. 2g，乙酸乙酯提取物21. 6g，正丁醇提取物39. 3g，水層 提取物53. 7g。
[0070] 水提醇沉提取粗多糖：醇提后的藥渣按1:10 (m/v)的比例加蒸餾水回流提取（lh/ 次，提取3次），合并提取液減壓回收溶劑至適量，加乙醇至最終濃度75 %，4°C靜置24h，棄 上清，將所得沉淀真空干燥，得粗多糖，苯酚-硫酸法測定多糖含量。
[0071] (二）藥性菌質(zhì)不同溶劑提取部位的總多酚含量測定：
[0072] 1、標準曲線制作：
[0073] 精密稱取沒食子酸標準品約lmg，溶解并定容至IOmL容量瓶得標準品溶液。精密 吸取0,0. 25,0. 5,0. 75,1. 00,1. 25,1. 50mL的標準品溶液于25mL試管中，分別加3mL的福 林酸，搖勾，靜置30s，各加12%的Na2CO3溶液6. OmL，蒸餾水定容至25mL，25°C避光靜置2h， 以O(shè)mL的樣品作空白760nm測OD值。以沒食子酸標準品含量（μ g)為橫坐標，吸光度為縱 坐標，繪制標準曲線并求出其回歸方程：y = 〇. 〇〇45x+0. 0202(r = 0. 9995)。
[0074] 2、含量測定：
[0075] 取樣品1.0 mL，采取以上制作標準曲線的方法，測定各組分中總多酚的含量，以沒 食子酸計。通過計算得到乙酸乙酯和正丁醇組分所含多酚含量分別為78. 84mg/g、53. 96mg/ g ;水層提取物和粗多糖多酚含量分別為5. 51mg/g、15. 29mg/g，明顯低于乙酸乙酯和正丁 醇部位。
[0076](三）藥性菌質(zhì)不同溶劑提取部位的總?cè)坪繙y定：
[0077] 1、標準曲線制作：
[0078] 精密稱取白樺脂醇對照品，用無水乙醇溶解，配成質(zhì)量濃度為160 μ g/mL的標準 溶液，精確吸取〇. l、〇. 2、0. 3、0. 4和0. 5mL分別置于5mL容量瓶中，在100°C水浴中蒸干，加 入0. 3mL新制的5%香草醛-冰乙酸溶液和0. 6mL高氯酸搖勾，70°C水浴保溫15min，再用 冰水冷卻并放至室溫，加入冰乙酸容至5mL，搖勾，以無水乙醇作空白對照，在550nm處測吸 光值以白樺脂醇質(zhì)量（μ g)為橫坐標，吸光值為縱坐標，繪制標準曲線并求出其回歸方程：