作為抗新生劑的工程改造的靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物胱氨酸/半胱氨酸降解酶的制作方法
【專(zhuān)利說(shuō)明】作為抗新生劑的工程改造的靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物脯氨酸/半脯氨酸降 解酶
[0001] 發(fā)明背景
[0002] 本申請(qǐng)要求2013年8月29日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?1/871,727和2014年3月5日提 交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?1/948,106的優(yōu)先權(quán)權(quán)益，所述臨時(shí)申請(qǐng)的完整內(nèi)容W引用的方式并 入本文。
[0003] 本發(fā)明在政府支持下根據(jù)由美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院授權(quán)的授權(quán)號(hào)R01CA154754進(jìn) 行。政府對(duì)本發(fā)明享有某些權(quán)利。 1.發(fā)明領(lǐng)域
[0004] 本發(fā)明大體來(lái)說(shuō)設(shè)及醫(yī)學(xué)和生物學(xué)的領(lǐng)域。更具體說(shuō)來(lái)，其設(shè)及用使心脫氨酸和 心半脫氨酸缺乏的酶治療癌癥的組合物和方法。甚至更具體說(shuō)來(lái)，其設(shè)及具有適用于人類(lèi) 療法的高半脫氨酸/半脫氨酸降解活性和穩(wěn)定性的靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物酶的工程改造。
[000引2.相關(guān)技術(shù)的描述
[0006] 多種氨基酸的全身性缺乏已經(jīng)顯示有效殺死各種腫瘤類(lèi)型，而對(duì)非癌組織具有最 小毒性。運(yùn)種治療效應(yīng)可通過(guò)使用被引入循環(huán)中的藥理學(xué)優(yōu)化酶來(lái)實(shí)現(xiàn)，所述酶使腫瘤所 依賴(lài)的氨基酸降解。某些癌癥如前列腺、小細(xì)胞肺癌、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤和肝細(xì)胞癌已經(jīng)顯示高 度依賴(lài)于細(xì)胞外半脫氨酸/脫氨酸W便增生和存活。運(yùn)些腫瘤中的多種異常地過(guò)度表達(dá)XCT (-)脫氨酸/谷氨酸反向轉(zhuǎn)運(yùn)體W便維持蛋白和谷脫甘膚產(chǎn)生所需的充足半脫氨酸水平，表 明其已經(jīng)喪失或下調(diào)其原生半脫氨酸生物合成能力。支持運(yùn)一想法，xCT(-)脫氨酸/谷氨酸 反向轉(zhuǎn)運(yùn)體的小分子抑制劑（如柳氮橫胺化晚）的使用已經(jīng)顯示延遲前列腺和小細(xì)胞肺癌 腫瘤異種移植物的生長(zhǎng)(Doxsee等人，2007 ;Guan等人，2009)。盡管心脫氨酸的xCT(-)依賴(lài) 性轉(zhuǎn)運(yùn)的阻斷是有前景的，但其無(wú)法消除化+依賴(lài)性ASC轉(zhuǎn)運(yùn)體和/或化+獨(dú)立轉(zhuǎn)運(yùn)體對(duì)自由 心半脫氨酸的轉(zhuǎn)運(yùn)，并且在一些實(shí)施例中，通過(guò)骨髓源性基質(zhì)細(xì)胞向腫瘤細(xì)胞提供自由k 半脫氨酸(Zhang等人，2012)。使脫氨酸和半脫氨酸缺乏的治療劑因此可完全地剝奪運(yùn)種基 本代謝物的腫瘤。然而，并無(wú)已知的具有適合作為人類(lèi)治療劑應(yīng)用的特性或活性的不可逆 半脫氨酸/脫氨酸降解酶，并且一般來(lái)說(shuō)，可完成特異性氨基酸降解的酶經(jīng)常不存在，迫使 對(duì)現(xiàn)有酶進(jìn)行所需活性的工程改造。
[0007] 發(fā)明概述
[0008] 本發(fā)明設(shè)及靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物脫硫酸-丫 -裂解酶(C化）的工程改造，使得レ脫氨酸和心 半脫氨酸(本文中稱(chēng)為k(半)脫氨酸)可有效地從血清降解，并且設(shè)及在適用于人類(lèi)癌癥療 法的配制物中提供經(jīng)修飾C化酶。為了開(kāi)發(fā)如與原生酶相比呈現(xiàn)低Km和高催化活性kcat的 酶，本發(fā)明人通過(guò)修飾所選擇的氨基酸工程改造原生酶，所述修飾產(chǎn)生具有顯著改進(jìn)的酶 特性的酶。因而，如本文所述經(jīng)修飾的OiL酶通過(guò)提供新穎酶克服了所屬領(lǐng)域中的顯著缺 乏，所述新穎酶如與原生酶相比包含具有k(半)脫氨酸降解催化活性的人類(lèi)或靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物 多膚序列。因而，運(yùn)些經(jīng)修飾酶可適用于癌癥療法并且具有低免疫原性和改進(jìn)的血清穩(wěn)定 性。
[0009] 因此，在第一實(shí)施方案中，提供一種經(jīng)修飾多膚，尤其是具有源于與脫硫酸-丫-裂 解酶(CGU相關(guān)的靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物酶的心(半)脫氨酸降解活性的酶變體。例如，新穎的酶變體可 具有選自由SEQ ID N0:2-6組成的群組的氨基酸序列。例如，所述變體可源于人類(lèi)酶，如人 類(lèi)CGL。在某些方面，可存在包含能夠降解心(半)脫氨酸的經(jīng)修飾靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物C化的多膚。在 一些實(shí)施方案中，所述多膚可能夠在生理?xiàng)l件下降解心(半)脫氨酸。例如，所述多膚可具有 至少或約 10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、 2000、3000、4000、5000、6000、7000、8000、9000、104、105、1063-1]?-1或可在所述范圍中派生的 任何范圍的關(guān)于心(半)脫氨酸的催化效率化。at/KM)。
[0010] 未修飾多膚可為原生CGL，尤其人類(lèi)亞型或其他靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物亞型。例如，所述原生 人類(lèi)OiL可具有SEQ ID NO: 1的序列。其他原生靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物OiL的非限制性實(shí)例包括蘇口答 臘猩猩CGUGenbank ID:NP_001124635.1;SEQ ID N0:7)、食蟹猴CGUGenbank ID: AAW71993.1;沈Q ID N0:8)、黑猩猩CGL(Genbank ID:XI^_51：M86.2;SEQ ID N0:9)和倭黑猩 猩CGUGenbank ID:XI^_003830652.1;SEQ ID N0:10)。示例性原生多膚包括具有SEQ ID 側(cè):1或7-10或其片段的約、至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、 98 %、99 %或100 %同一性(或可在所述范圍中派生的任何范圍）的序列。例如，所述原生多 膚可包含沈Q ID N0:1或7-10的序列的至少或多達(dá)約10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、 150、200、250、300、350、400、405個(gè)殘基(或可在所述范圍中派生的任何范圍）。
[0011] 在一些實(shí)施方案中，所述原生OiL可通過(guò)一種或多種其他修飾，如化學(xué)修飾、取代、 插入、缺失和/或截短來(lái)修飾。在一個(gè)特定實(shí)施方案中，所述原生OiL可通過(guò)取代修飾。例如， 取代的數(shù)目可為1、2、3、4或更大。在其他實(shí)施方案中，所述原生CGL可在底物識(shí)別位點(diǎn)或可 影響底物特異性的任何位置中經(jīng)修飾。例如，經(jīng)修飾多膚可在對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO: 1或7-10的 氨基酸位置59和/或339的氨基酸位置處具有至少一種氨基酸取代。在運(yùn)些實(shí)施例中，各序 列的第一甲硫氨酸對(duì)應(yīng)于氨基酸位置1，并且各氨基酸依序從其編號(hào)。
[0012] 在某些實(shí)施方案中，在氨基酸位置59和/或339處的取代為蘇氨酸（T)或鄉(xiāng)氨酸 (V)。在特定實(shí)施方案中，所述修飾為選自由59T和339V組成的群組的一種或多種修飾。在另 一實(shí)施方案中，所述取代可包含59T取代。在另一實(shí)施方案中，所述取代可包含339V的額外 取代。
[0013] 在一些實(shí)施方案中，所述原生OiL可為人類(lèi)CGL。在一個(gè)特定實(shí)施方案中，所述取代 為人類(lèi)OiL的E59T和E339V的組合(例如，所述經(jīng)修飾多膚具有SEQ ID NO: 2的氨基酸序列、 其片段或同系物）。在其他實(shí)施方案中，所述經(jīng)修飾多膚可為蘇口答臘猩猩CGkTV突變體 (沈Q ID N0:3)、食蟹猴CGkTV突變體（SEQ ID N0:4)、黑猩猩CGkTV突變體（SEQ ID N0:5) 或倭黑猩猩CGkTV突變體(SEQ ID N0:6)。
[0014] 如上文所討論的經(jīng)修飾多膚可表征為如與未修飾多膚(例如，原生多膚)或本文所 公開(kāi)的任何多膚序列相比具有特定百分比的同一性。例如，所述未修飾多膚可包含原生靈 長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物CGL(即，人類(lèi)、蘇口答臘猩猩、食蟹猴、黑猩猩或倭黑猩猩CGL)的至少或多達(dá)約10、 20、30、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250、300、350、400、405個(gè)殘基(或可在所述范圍 中派生的任何范圍）。所述同一性百分比可在經(jīng)修飾多膚的未修飾部分（即，經(jīng)修飾多膚中 排除在氨基酸位置59和/或339處的任何取代的序列）與相應(yīng)原生多膚之間為約、至少60%、 65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或 100% (或可在所述范圍 中派生的任何范圍）。還涵蓋如與多膚的未修飾區(qū)相比，上文所討論的同一性百分比可與多 膚的特定修飾區(qū)有關(guān)。例如，多膚可含有OiL的經(jīng)修飾或突變型底物識(shí)別位點(diǎn)，所述位點(diǎn)可 基于OiL的經(jīng)修飾或突變型底物識(shí)別位點(diǎn)的氨基酸序列與來(lái)自相同物種或跨物種的未修飾 或突變型OiL的所述氨基酸序列的同一性來(lái)表征。表征為例如與未修飾OiL具有至少90%同 一性的經(jīng)修飾或突變型人類(lèi)多膚意指在所述經(jīng)修飾或突變型人類(lèi)多膚中的至少90%的氨 基酸與未修飾多膚中的氨基酸同一。
[001引在一些方面，本發(fā)明還預(yù)期包含連接于異源氨基酸序列的經(jīng)修飾C化的多膚。例 如，所述經(jīng)修飾OiL可連接于所述異源氨基酸序列作為融合蛋白。在一個(gè)特定實(shí)施方案中， 所述經(jīng)修飾C化可連接于氨基酸序列，如IgG Fc、白蛋白、白蛋白結(jié)合膚或XTEN多膚用于增 加體內(nèi)半衰期。
[0016] 為了增加血清穩(wěn)定性，所述經(jīng)修飾OiL可連接于一個(gè)或多個(gè)聚酸分子。在一個(gè)特定 實(shí)施方案中，所述聚酸可為聚乙二醇(PEG)。所述經(jīng)修飾多膚可經(jīng)由特異性氨基酸殘基，如 賴(lài)氨酸或半脫氨酸連接于PEG。關(guān)于治療性施用，所述包含所述經(jīng)修飾OiL的多膚可分散于 藥學(xué)上可接受的載體中。
[0017] 在一些方面，涵蓋編碼所述經(jīng)修飾OiL的核酸。一方面，所述核酸已經(jīng)針對(duì)細(xì)菌中 的表達(dá)進(jìn)行密碼子優(yōu)化。在特定實(shí)施方案中，所述細(xì)菌為大腸桿菌。在其他方面，所述核酸 已經(jīng)針對(duì)真菌(例如酵母）、昆蟲(chóng)細(xì)胞或哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的表達(dá)進(jìn)行密碼子優(yōu)化。本發(fā)明進(jìn) 一步涵蓋含有所述核酸的載體，如表達(dá)載體。在特定實(shí)施方案中，所述編碼所述經(jīng)修飾CGL 的核酸可操作地連接于啟動(dòng)子，包括但不限于異源啟動(dòng)子。在一個(gè)實(shí)施方案中，經(jīng)修飾CGL 可通過(guò)載體(例如基因療法載體)遞送至祀細(xì)胞。所述病毒可已經(jīng)通過(guò)重組DNA技術(shù)修飾W 使經(jīng)修飾CGL編碼核酸能夠在祀細(xì)胞中表達(dá)。運(yùn)些載體可來(lái)源于非病毒(例如質(zhì)粒)或病毒 (例如腺病毒、腺相關(guān)病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒、慢病毒、瘤疹病毒或牛痘病毒)起源的載體。非病毒 載體優(yōu)選地與試劑復(fù)合W促進(jìn)DNA跨細(xì)胞膜的進(jìn)入。所述非病毒載體復(fù)合物的實(shí)例包括與 聚陽(yáng)離子試劑的配制物，所述聚陽(yáng)離子試劑促進(jìn)DNA和基于脂質(zhì)的遞送系統(tǒng)的縮合?；谥?質(zhì)的遞送系統(tǒng)的實(shí)例將包括核酸的基于脂質(zhì)體的遞送。
[0018] 在其他方面，本發(fā)明進(jìn)一步涵蓋包含所述載體的宿主細(xì)胞。所述宿主細(xì)胞可為細(xì) 菌(例如大腸桿菌）、真菌細(xì)胞(例如酵母）、昆蟲(chóng)細(xì)胞或哺乳動(dòng)物細(xì)胞。
[0019] 在一些實(shí)施方案中，將所述載體引入至用于表達(dá)經(jīng)修飾OiL的宿主細(xì)胞中。所述蛋 白可W任何適合方式表達(dá)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述蛋白在宿主細(xì)胞中表達(dá)，使得所述蛋白 糖基化。在另一實(shí)施方案中，所述蛋白在宿主細(xì)胞中表達(dá)，使得所述蛋白非糖基化。
[0020] 在一些實(shí)施方案中，所述多膚或核酸在包含藥學(xué)上可接受的載體的藥物配制物 中。所述多膚可為原生靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物OiL多膚或經(jīng)修飾OiL多膚。所述核酸可編碼原生靈長(zhǎng)類(lèi) 動(dòng)物WL多膚或經(jīng)修飾WL多膚。
[0021] 本發(fā)明的某些方面還涵蓋通過(guò)施用原生靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物OiL膚、基因療法載體中編碼 所述原生靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物OiL膚的核酸、經(jīng)修飾OiL膚、基因療法載體中編碼經(jīng)修飾OiL的核酸或 本發(fā)明的配制物進(jìn)行治療的方法，并且具體說(shuō)來(lái)治療腫瘤細(xì)胞或具有癌癥的受試者的方 法。所述受試者可為任何動(dòng)物，如小鼠。例如，所述受試者可為哺乳動(dòng)物，具體說(shuō)來(lái)靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng) 物，并且更具體說(shuō)來(lái)人類(lèi)患者。在一些實(shí)施方案中，所述方法可包括選擇具有癌癥的患者。 在某些方面，所述受試者或患者可維持k(半)脫氨酸限制性飲食或正常飲食。
[0022] 在一些實(shí)施方案中，所述癌癥為對(duì)心(半)脫氨酸缺乏敏感的任何癌癥。在一個(gè)實(shí) 施方案中，本發(fā)明涵蓋一種治療腫瘤細(xì)胞或癌癥患者的方法，所述方法包括施用包含所述 多膚的配制物。在一些實(shí)施方案中，所述施用在一定條件下發(fā)生，使得所述癌癥的至少一部 分細(xì)胞被殺死。在另一實(shí)施方案中，所述配制物包含在生理?xiàng)l件下具有心(半)脫氨酸降解 活性并且進(jìn)一步包含所連接的聚乙二醇鏈的所述經(jīng)修飾CGL。在一些實(shí)施方案中，所述配制 物為包含上文所討論的OiL變體中的任一者和藥學(xué)上可接受的賦形劑的藥物配制物。所述 藥學(xué)上可接受的賦形劑是所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員眾所周知的。所有W上OiL變體均可預(yù)期適 用于人類(lèi)療法。
[0023] 在另一實(shí)施方案中，也可提供一種治療腫瘤細(xì)胞的方法，所述方法包括施用包含 具有k(半)脫氨酸降解活性的非細(xì)菌(哺乳動(dòng)物，例如靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物或小鼠）經(jīng)修飾C化或編 碼其的核酸的配制物。
[0024] 因?yàn)槟[瘤細(xì)胞依賴(lài)于其關(guān)于k(半)脫氨酸的營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基，所W所述施用或治療可 針對(duì)用于所述細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)源，并且不必要針對(duì)所述細(xì)胞本身。因此，在體內(nèi)應(yīng)用中，治療腫 瘤細(xì)胞包括使用于腫瘤細(xì)胞的群體的營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基與工程改造(即，經(jīng)修飾)的OiL接觸。在運(yùn) 個(gè)實(shí)施方案中，所述培養(yǎng)基可為血液、淋己液、脊髓液和其中需要k(半)脫氨酸缺乏的類(lèi)似 體液。
[0025] 根據(jù)本發(fā)明的某些方面，含有經(jīng)修飾的OiL的所述配制物可靜脈內(nèi)、皮內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、 腹膜內(nèi)、病灶內(nèi)、煩內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、前列腺內(nèi)、胸膜內(nèi)、滑膜內(nèi)、氣管內(nèi)、鼻內(nèi)、玻璃體內(nèi)、陰道內(nèi)、 直腸內(nèi)、腫瘤內(nèi)、肌肉內(nèi)、皮下、結(jié)膜下、囊內(nèi)、經(jīng)粘膜、屯、包內(nèi)、廝帶內(nèi)、眼內(nèi)、經(jīng)口、經(jīng)表面、 通過(guò)吸入、輸注、持續(xù)輸注、局部灌注、經(jīng)由導(dǎo)管、經(jīng)由灌洗在脂質(zhì)組合物(例如脂質(zhì)體）中或 通過(guò)如所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員將知道的其他方法或前述的任何組合施用。
[0026] 在另一實(shí)施方案中，所述方法也可包括向所述受試者施用至少一種第二抗癌療 法。所述第二抗癌療法可為手術(shù)療法、化學(xué)療法、放射療法、冷凍療法、激素療法、免疫療法 或細(xì)胞因子療法。
[0027] 在一個(gè)實(shí)施方案中，提供一種包含經(jīng)修飾的OiL或編碼經(jīng)修飾的OiL的核酸的組合 物，用于治療受試者中的腫瘤。在另一實(shí)施方案中，提供經(jīng)修飾的OiL或編碼經(jīng)修飾的OiL的 核酸的用途，其用于制造用于治療腫瘤的藥劑。所述經(jīng)修飾的OiL可為所述實(shí)施方案的任何 經(jīng)修飾的CGL。
[0028] 在本發(fā)明的方法和/或組合物的上下文中討論的實(shí)施方案可關(guān)于本文所述的任何 其他方法或組合物使用。因此，關(guān)于一種方法或組合物的實(shí)施方案也可應(yīng)用于本發(fā)明的其 他方法和組合物。
[0029] 如本文所用，關(guān)于核酸的術(shù)語(yǔ)"編碼(encode)"或"編碼(encoding)"用于使本發(fā)明 可容易地由熟練技術(shù)人員了解；然而，運(yùn)些術(shù)語(yǔ)可分別與"包含（comprise)"或"包含 (comprising)"互換使用。
[0030] 如本文說(shuō)明書(shū)中所用，"一(a)"或"一(an)"可意指一種或多種。如本文權(quán)利要求書(shū) 中所用，當(dāng)聯(lián)合措辭"包含(comprising)"使用時(shí)，措辭"一 (a)"或"一 (an)"可意指一種或超 過(guò)一種。
[0031] 除非明確指示為僅指代替代物或所述替代物互相排除，否則在權(quán)利要求書(shū)中術(shù)語(yǔ) "或"的使用是用于意指"和/或"，不過(guò)本公開(kāi)支持僅指代替代物和"和/或"的定義。如本文 所用，"另一"可意指至少第二種或更多種。
[0032] 在本申請(qǐng)中，術(shù)語(yǔ)"約"用于指示一個(gè)值包括針對(duì)用于確定所述值的器件、方法的 固有誤差變化，或在研究受試者之間存在的變化。
[0033] 本發(fā)明的其他目標(biāo)、特征W及優(yōu)點(diǎn)將根據(jù)W下詳細(xì)描述變得顯而易知。然而，應(yīng)了 解所述詳細(xì)描述和具體實(shí)施例雖然指示本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案，但僅W說(shuō)明的方式給出， 因?yàn)樵诒景l(fā)明的精神和范圍內(nèi)的各種改變和修改根據(jù)運(yùn)個(gè)詳細(xì)描述對(duì)于所屬領(lǐng)域技術(shù)人 員將變得顯而易知。
[0034] 附圖簡(jiǎn)述
[0035] W下圖式形成本說(shuō)明書(shū)的一部分并且包括在內(nèi)W進(jìn)一步證明本發(fā)明的某些方面。 本發(fā)明可通過(guò)與本文提供的具體實(shí)施方案的詳細(xì)描述組合參考運(yùn)些圖式中的一個(gè)或多個(gè) 來(lái)更好地理解。
[0036] 圖1-(半)脫氨酸酶催化的示意圖:hC化和工程改造的hC化變體將心脫氨酸轉(zhuǎn)化為 丙酬酸、氨和硫代半脫氨酸。硫代半脫氨酸非酶促降解為硫化氨和k半脫氨酸。心半脫氨酸 進(jìn)一步由hCGL和工程改造的hC化變體降解為丙酬酸、氨和硫化氨。
[0037] 圖2A-B- (A) k脫氨酸（空屯、圓）和(B化-半脫氨酸(實(shí)屯、圓）的hCGkTV催化的降解 的米-曼二氏動(dòng)力學(xué)。
[0038] 圖3-在37°C下在匯集的人類(lèi)血清中的hCGkTV(空屯、圓）隨時(shí)間而變的活性，其中 表觀Tq.5為228±化。
[0039] 圖4A-B-用變化濃度的hCGl^-TV治療的前列腺腫瘤系(A)DU145和(B)PC3,其中針對(duì) 每一細(xì)胞系的表觀ICso值為約60nM。
[0040] 圖5-hCGkTV的氨基酸序列（SEQ ID顯:11)。含有俯品化36標(biāo)簽并且來(lái)自具有突變 E59T-E339V的殘基2-405的hWL氨基酸序列W粗體加下劃線(xiàn)。
[0041 ] 圖SA-B-(A)消除脫氨酸水平超過(guò)96h和(B)降低脫氨酸水平超過(guò)4她的FVB小鼠 （n =5/組）中陽(yáng)G-hCGkTV的單一50mg/kg腹膜內(nèi)劑量。（***p<0.001，**p<0.01，*p<0.05，并且 NS =不顯著。
[004引圖7-隨時(shí)間追蹤FVB小鼠 （n = 5/組）中陽(yáng)G-hCGkTV的單一50mg/kg腹膜內(nèi)劑量的 藥物動(dòng)力學(xué)，產(chǎn)生約23h的吸收Ti/2和40±化的消除Ti/2。
[004引圖8-具有HMVP2前列腺癌同種異體移植物的FVB小鼠（每一組n = 8)用PEG-hCGkTV W50mg/kg體重（空屯、正方形）、用陽(yáng)G-hCGkTVWlOOmg/kg體重（實(shí)屯、S角形）、用PBS(空屯、 圓）或熱滅活陽(yáng)G-hCGkTV W1 OOmg/kg體重(實(shí)屯、菱開(kāi)多)每4天一次腹膜內(nèi)處理。
[0044]圖9-具有人類(lèi)（PC3)前列腺癌異種移植物的雄性裸小鼠（每一組n = 7)用？66-hCGkTV W 50mg/kg體重（實(shí)屯、S角形）、用陽(yáng)G-hCGkTV W1 OOmg/kg體重（實(shí)屯、圓）、用PBS(實(shí) 屯、菱形)或熱滅活陽(yáng)G-hCGkTVWlOOmg/kg體重(實(shí)屯、正方形)每4天一次腹膜內(nèi)處理。
[004引說(shuō)明性實(shí)施方案的描述
[0046]半脫氨酸被視為非必需氨基酸，因?yàn)槠淇捎稍从诒匦璋被嵝募琢虬彼岬母甙朊?氨酸經(jīng)由轉(zhuǎn)硫途徑合成，所述轉(zhuǎn)硫途徑包含酶脫硫酸-e-合酶(CBS)和脫硫酸-丫 -裂解酶 (CGL)。因此，預(yù)期半脫氨酸的缺乏對(duì)于具有完整轉(zhuǎn)硫途徑的正常組織相對(duì)無(wú)毒。某些癌癥 可具有轉(zhuǎn)硫途徑酶CBS和/或C化的異常低或不存在的表達(dá)，因此需要所述酶W從細(xì)胞外區(qū) 室輸入心半脫氨酸A-脫氨酸。在肝細(xì)胞癌中，CBS的下調(diào)進(jìn)一步導(dǎo)致不良預(yù)后化im等人， 2009)，并且也已經(jīng)觀察到胃腸癌具有CBS的頻繁表觀遺傳沉默(Zhao等人，2012)。在其他實(shí) 施例中，OiL表達(dá)的不存在已經(jīng)頻繁地在淋己母細(xì)胞性白血病細(xì)胞系中觀察到(Glode等人， 1981 ;Link等人，1983) XBS和CGLW及xCT(-)半脫氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體的表達(dá)水平構(gòu)成針對(duì)用半脫 氨酸/半脫氨酸缺乏方案治療的患者選擇的重要腫瘤生物標(biāo)記物。
[0047]本發(fā)明提供使k(半)脫氨酸降解的工程改造的治療性酶。還提供使用所述酶來(lái)治 療如癌癥、溶酶體膽積病（即，脫氨酸膽積癥）的疾病并且消除多種自身免疫病況中的不利 免疫效應(yīng)的方法。因此，可使運(yùn)些氨基酸缺乏的治療性酶可用作免疫調(diào)節(jié)劑。
[004引 I.定義
[0049] 如本文所用，術(shù)語(yǔ)"蛋白"和"多膚"是指包含經(jīng)由膚鍵接合的氨基酸的化合物并且 可互換使用。
[0050] 如本文所用，術(shù)語(yǔ)"融合蛋白"是指含有