基于異常活化細(xì)胞檢測(cè)的惡性腫瘤的檢查方法及去除異?；罨?xì)胞血液循環(huán)回輸治療裝置的制造方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及基于異?；罨?xì)胞檢測(cè)的惡性腫瘤的檢查方法及去除異?；罨?xì)胞 血液循環(huán)回輸治療裝置。更詳細(xì)的，涉及通過(guò)去除異?；罨?xì)胞來(lái)抑制或治療白血病的發(fā) 病的去除異?；罨?xì)胞血液循環(huán)回輸治療裝置。
[0002] 本申請(qǐng)，要求通過(guò)參照而在此被引用的日本申請(qǐng)，特愿2013-130758號(hào)的優(yōu)先權(quán)。
【背景技術(shù)】
[0003] 近來(lái)，在日本，白血病的發(fā)生率有逐年增加的趨勢(shì)。因白血病死亡的人數(shù)，在2008 年約為11，156人，每10萬(wàn)人口中為8.8人(男性10.5人，女性7.1人）。
[0004] 特別是，已知成人T細(xì)胞白血病/淋巴瘤（adult τ-cell leukemia/lymphoma: ATLL)是難治性白血病/淋巴瘤。在其致病病毒的人T細(xì)胞白血病病毒I型（Human T-cell leukemia virus type I:HTLV-I)的攜帶者中，在日本一年約有700例發(fā)病。特別是，每1， 000個(gè)HTLV-I攜帶者的年ATLL發(fā)病率，男性為1.0-1.5人、女性為0.5-0.7人，進(jìn)一步的，30歲 以上的HTLV-I攜帶者的終生發(fā)病率，男性為4-7%，女性為2%左右?，F(xiàn)在，在日本約有108萬(wàn) 攜帶者，全世界約有2,000萬(wàn)攜帶者。
[0005] ATLL，被認(rèn)為是由于HTLV-I感染CD4陽(yáng)性T細(xì)胞，并在細(xì)胞與細(xì)胞之間感染，在較長(zhǎng) 的潛伏期中逃避免疫系統(tǒng)而進(jìn)行的克隆，積累基因異常、染色體異常、表觀遺傳異常等，使 細(xì)胞腫瘤化而發(fā)病。HTLV-I攜帶者中的3-5 %，在感染HTLV-I后40-60年內(nèi)ATLL發(fā)病。而且， 感染途徑主要有母乳感染、輸血、性交。
[0006] 1991年，提出從預(yù)后因子分析和臨床病情的特征出發(fā)，根據(jù)白血化、臟器浸潤(rùn)、高 LDH血癥、高Ca血癥的有無(wú)及程度，將ATLL分成急性型、淋巴瘤型、慢性型、冒煙型這四種病 型，根據(jù)最近的報(bào)告，其中位生存期為急性型11個(gè)月、淋巴瘤型20個(gè)月、慢性型24個(gè)月、冒煙 型3年以上。雖然最近的化學(xué)療法和同種造血干細(xì)胞移植(allo-HSCT)的治療成果有所改 善，但是和其他白血病相比依然預(yù)后不良。根據(jù)ATLL患者的不同臨床病型的生存曲線，急性 型及淋巴瘤型ATLL患者的生存率，從開始觀察起一年之內(nèi)降低到50%以下?；颊咧心行陨?多，日本的發(fā)病年齡的中位值為67歲，不足40歲發(fā)病的很少。
[0007] 這樣的難治性ATLL的以往的診斷方法，除了鑒定患者的外周血中的感染HTLV-I的 腫瘤細(xì)胞以外，以多有淋巴結(jié)腫大、肝脾腫大、高鈣血癥、皮膚病變，多并發(fā)有機(jī)會(huì)性感染癥 等的ATLL的特異性臨床癥狀為基準(zhǔn)。
[0008] 但是，這樣的方法，特別是急性型或淋巴瘤型ATLL，只有在發(fā)病且開始出現(xiàn)癥狀的 階段才能進(jìn)行診斷，由于無(wú)法在早期對(duì)它們進(jìn)行診斷，存在耽誤治療的可能性。而且，通過(guò) 抗癌劑的治療由于抗性而預(yù)后不良。
[0009] 專利文獻(xiàn)1公開了以下方法:在為了推定ATLL的預(yù)后而進(jìn)行的數(shù)據(jù)收集中，針對(duì)外 周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)的特定的基因群，測(cè)定這些基因的啟動(dòng)子區(qū)域中的CpG島的甲基化 狀態(tài)。該方法涉及制作用于ATLL預(yù)后推定的數(shù)據(jù)，通過(guò)在制作該基因的啟動(dòng)子區(qū)域中的CpG 島的甲基化圖譜的同時(shí)，算出CIMP(CpG island methylator phenotype，即CpG島甲基化表 型）作為預(yù)后因子，并表示出根據(jù)由甲基化基因、甲基化基因數(shù)及CIMP值算出的ATLL發(fā)病/ 發(fā)展的危險(xiǎn)度評(píng)分得出的危險(xiǎn)度分級(jí)和/或特定的基因的甲基化狀態(tài)，能夠預(yù)測(cè)HTLV-I攜 帶者的發(fā)病，或者惰性（indolent)型（緩慢進(jìn)行型）的冒煙型及慢性型ATLL向侵襲 (aggressive)型(高惡性型）的急性型及淋巴瘤型ATLL的發(fā)展。
[0010] 高惡性度的急性型或淋巴瘤型ATLL及具有預(yù)后不良因子的慢性型ATLL，適合化學(xué) 療法，但是由于對(duì)非霍奇金淋巴瘤的標(biāo)準(zhǔn)治療方法(CHOP療法）等有抗性，因此并用G-CSF (粒細(xì)胞集落刺激因子），在短治療間隔下反復(fù)進(jìn)行強(qiáng)力的化學(xué)療法。
[0011] 另一方面，對(duì)于低惡性度的冒煙型或不具有預(yù)后不良因子的慢性型ATLL，其原則 是對(duì)皮膚病變進(jìn)行局部處理，與慢性淋巴性白血病等疾病同樣地在急性轉(zhuǎn)化之前不進(jìn)行化 學(xué)療法而是持續(xù)觀察，但是其長(zhǎng)期預(yù)后并不好。近年來(lái)，雖然al lo-HSCT是通過(guò)宿主方抗ATL 效應(yīng)，可以期待長(zhǎng)期生存，應(yīng)該深入研究的治療方法，但是通常的allo-HSCT也存在難以治 療的宿主、疾病，也存在在高齡者等中由于胸腺萎縮，T細(xì)胞的產(chǎn)生能力低，容易引起免疫缺 陷或間質(zhì)性肺炎等的問(wèn)題。在接受了同種移植的情況下，還存在移植物抗宿主病(GVHD)的 危險(xiǎn)性的問(wèn)題，這是常見的并發(fā)癥，來(lái)自供體的淋巴細(xì)胞認(rèn)為患者的臟器不是自己的而進(jìn) 行攻擊，試圖將其排除。而且，今后抗體醫(yī)藥等新型治療方法的開發(fā)雖然值得期待，但是更 希望開發(fā)出預(yù)后效果良好的治療方法。
[0012] 據(jù)報(bào)道，通過(guò)作為光敏感性物質(zhì)的卟啉關(guān)聯(lián)化合物的生理前驅(qū)體的5-氨基酮戊酸 (5-aminolevulinic acid(5_ALA))的給藥，經(jīng)過(guò)血紅素代謝途徑，原卟啉IX(PpIX)在組織 細(xì)胞性淋巴瘤培養(yǎng)細(xì)胞中大量蓄積，產(chǎn)生強(qiáng)熒光。據(jù)報(bào)道，正在研究利用該性質(zhì)，將通過(guò)5-ALA的給藥而產(chǎn)生強(qiáng)ΡρΙΧ熒光的白血病細(xì)胞從健康正常細(xì)胞中識(shí)別出來(lái)，認(rèn)為在5-ALA依存 性光動(dòng)力學(xué)治療法(PDT:Photo-Dynamic Therapy)中，向蓄積在革E1向腫瘤細(xì)胞中的ΡρΙΧ進(jìn) 行光照射而生成的單重態(tài)氧等活性氧類(R0S)能夠特異性誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞死亡(非專 利文獻(xiàn)1)。
[0013] 另一方面，專利文獻(xiàn)2公開了對(duì)于雖然不是白血病，但是血液中的非水溶性的間接 (非結(jié)合型)膽紅素代謝缺陷的患者，通過(guò)在人工透析時(shí)向從人體取出的血液照射規(guī)定波長(zhǎng) 的光，使其轉(zhuǎn)換成水溶性的直接膽紅素，以降低非水溶性的間接膽紅素濃度的方法。在體內(nèi) 由血紅素形成的非水溶性的間接膽紅素，通常在肝臟中被轉(zhuǎn)換成水溶性的直接(結(jié)合型)膽 紅素，并通過(guò)腎臟排出，但是已知若出現(xiàn)肝功能不全等則不能進(jìn)行向水溶性的直接膽紅素 的轉(zhuǎn)換，血中的非水溶性的間接膽紅素濃度會(huì)升高。非水溶性的間接膽紅素，通過(guò)規(guī)定波長(zhǎng) 的光的照射能夠轉(zhuǎn)換成水溶性的直接膽紅素，對(duì)于由于肝功能不全等造成非水溶性的間接 膽紅素濃度升高的患者來(lái)說(shuō)，通過(guò)照射該光使其轉(zhuǎn)換成水溶性的直接膽紅素，能夠降低非 水溶性的間接膽紅素的濃度。
[0014] 對(duì)于ATLL發(fā)病危險(xiǎn)性高的HTLV-I攜帶者以及在慢性型ATLL或冒煙型ATLL這種低 惡性度ATLL中向高惡性度的急性型及淋巴瘤型ATLL急性轉(zhuǎn)化(發(fā)展）的可能性高的患者或 具有預(yù)后不良因子的慢性型ATLL患者來(lái)說(shuō)，希望開發(fā)出在早期檢測(cè)出發(fā)病/發(fā)展的危險(xiǎn)度 的方法，并且在發(fā)病后也能夠避免預(yù)后不良的有效的治療方法。該方法的開發(fā)，對(duì)于發(fā)病可 能性低的HTLV-I攜帶者及病情發(fā)展的可能性低的低惡性度ATLL患者來(lái)說(shuō)，將盡可能地消除 發(fā)病/發(fā)展的不安，也關(guān)系到生活質(zhì)量(Q0L)的改善。
[0015] 現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)
[0016] 專利文獻(xiàn)
[0017] 專利文獻(xiàn)1日本特開2009-254357號(hào)公報(bào)
[0018] 專利文獻(xiàn)2日本特開2004-358243號(hào)公報(bào)
[0019]非專利文獻(xiàn)
[0020] 非專利文獻(xiàn)1閃山學(xué)院大學(xué)/閃山短期大學(xué)紀(jì)要34，1-14,2011

【發(fā)明內(nèi)容】

[0021] 本發(fā)明要解決的問(wèn)題
[0022] 本發(fā)明的課題在于提供一種惡性腫瘤的檢查方法。而且，課題在于提供一種從血 液樣本中去除異?；罨?xì)胞的方法、去除異?；罨?xì)胞血液循環(huán)回輸治療裝置及使用去除 異?；罨?xì)胞血液循環(huán)回輸治療裝置的腫瘤的治療方法。
[0023] 在造血器官腫瘤中，成人T細(xì)胞白血病/淋巴瘤(ATLL)是極為預(yù)后不良的難治性白 血病/淋巴瘤。雖然一直在進(jìn)行同種造血干細(xì)胞移植(allo-HSCT)、新型抗體醫(yī)藥等的新型 治療方法的開發(fā)，但是對(duì)于具有在高齡者中發(fā)病頻率高這一特征的本疾病來(lái)說(shuō)，存在移植 干細(xì)胞的供給的問(wèn)題，將對(duì)患者負(fù)擔(dān)大的治療方法排除在應(yīng)用之外的情況也不少見，還存 在治療抵抗性患者多的問(wèn)題。
[0024] 本發(fā)明的課題在于提供一種能夠低侵襲性、對(duì)患者的負(fù)擔(dān)小，特異性高效率地去 除白血病細(xì)胞的去除異?；罨?xì)胞血液循環(huán)回輸治療裝置。
[0025]解決問(wèn)題的手段
[0026]為了解決上述問(wèn)題，本發(fā)明人著眼于通過(guò)使ΡρΙΧ蓄積在血液中的白血病細(xì)胞等異 常活化細(xì)胞中，從而能夠識(shí)別該異常活化細(xì)胞，經(jīng)過(guò)反復(fù)深入研究，結(jié)果完成了涉及特異性 去除血液中的白血病細(xì)胞等異?；罨?xì)胞的去除異?；罨?xì)胞血液循環(huán)回輸治療裝置的 發(fā)明。
[0027] 本發(fā)明的去除異常活化細(xì)胞血液循環(huán)回輸治療裝置，具備：
[0028] -端具備有采血用的穿刺針的采血用管線；
[0029] 從由該采血用管線供給的血液中分離白血球部分的離心分離器；
[0030] 從由該離心分離器分離的白血球部分中去除異常活化細(xì)胞的細(xì)胞分選儀；
[0031] 對(duì)由該細(xì)胞分選儀去除了異常活化細(xì)胞的正常血球部分，照射規(guī)定波長(zhǎng)的光的光 照射器；
[0032] 血液回輸由除離心分離器分離的白血球部分以外的血液成分所組成的血液循環(huán) 回輸液和用光照射器照射過(guò)光的血液循環(huán)回輸用的正常白血球部分的血液循環(huán)回輸用管 線。
[0033] 另外，本發(fā)明的去除異?；罨?xì)胞血液循環(huán)回輸治療裝置的特征在于，在通過(guò)采 血用管線采集的血液中，通過(guò)在2-48小時(shí)前，優(yōu)選在2-12小時(shí)前向患者給藥5-ALA，使Pp IX 在含有腫瘤細(xì)胞的異?；罨?xì)胞中蓄積，并用光照射器向含有異常活化細(xì)胞的血液照射波 長(zhǎng)為 350-490nm 或 600-700nm 的光。
[0034] 即，本發(fā)明由以下構(gòu)成：
[0035] 1.-種惡性腫瘤的檢查方法，其特征在于，對(duì)采集的血液樣本，分析其異?；罨?xì) 胞和腫瘤標(biāo)志物陽(yáng)性細(xì)胞的分布模式。
[0036] 2.根據(jù)前項(xiàng)1所述的惡性腫瘤的檢查方法，異?；罨?xì)胞為ΡρΙΧ陽(yáng)性細(xì)胞。
[0037] 3.根據(jù)前項(xiàng)1或2所述的惡性腫瘤的檢查方法，惡性腫瘤為造血器官腫瘤、癌瘤或 肉瘤，在為造血器官腫瘤的情況下，腫瘤標(biāo)志物是由TSLC1、CD3、CD13、CD19、CD20、CD10、 CD13、⑶7、⑶56及HLA-D組成的免疫學(xué)標(biāo)志物中的任意一種，在為癌瘤或肉瘤的情況下，月中 瘤標(biāo)志物是選自細(xì)胞角蛋白19-9(CA19-9)、CEA、NSE、PSA、TPA、AFP、SCC、PTH、TSH中的任意 一種。
[0038] 4.根據(jù)前項(xiàng)1-3中任一項(xiàng)所述的惡性腫瘤的檢查方法，造血器官腫瘤為ATLL。
[0039] 5.根據(jù)前項(xiàng)4所述的檢查方法，采集的血液樣本的供體為HTLV-I攜帶者或ATLL患 者，惡性腫瘤的檢查為用于ATLL發(fā)病危險(xiǎn)度預(yù)測(cè)和/或發(fā)展確認(rèn)的檢查。
[0040] 6.根據(jù)前項(xiàng)5所述的檢查方法，ATLL的發(fā)展確認(rèn)，是對(duì)ATLL的(A)冒煙型、（B)慢性 型或(C)急性型中的任意一種的發(fā)展確認(rèn)。
[0041] 7.-種從樣本中去除異常活化細(xì)胞的方法，對(duì)采集的血液樣本，以波長(zhǎng)為350-490nm和/或600-700nm的光進(jìn)行照射，檢測(cè)出樣本中存在的ΡρΙΧ陽(yáng)性細(xì)胞，通過(guò)對(duì)該ΡρΙΧ陽(yáng) 性細(xì)胞的上述光照射誘發(fā)細(xì)胞死亡，從而從樣本中去除異?；罨?xì)胞。
[0042] 8.根據(jù)前項(xiàng)7所述的去除異常活化細(xì)胞的方法，包含以下的工序：
[0043] 1)對(duì)采集的血液樣本，通過(guò)離心分離操作，分離紅血球部分和白血球部分的工序；
[0044] 2)對(duì)上述分離的白血球部分，以波長(zhǎng)為350-490nm和/或600-700nm的光進(jìn)行照射， 檢測(cè)出Pp IX陽(yáng)性細(xì)胞，