采用測定ARE的常規(guī)測定法。一般來說，所述測定包括從位于弗 吉尼亞州馬納薩斯（Manassas)的ATCC獲得的人肝細胞系!fepG2 (其用載體穩(wěn)定轉染）。 該載體含有在最小啟動子上游的4個重復的ARE DNA序列^ -GTGACTCAGCA-3^ )，使用 螢火蟲熒光素酶基因作為報道基因。然后在該實施例和下文其它說明的實施例中，用單獨 的成分姜黃、槲皮素和迷迭香，和TQR共混物以不同的濃度處理這些細胞48小時。溶解人 肝細胞，加入熒光素酶底物（購自加利福尼亞州，Hayward的Biotium)，并獲得所有樣品的 相對發(fā)光值。結果作為相比對照的％反應示出。對照物質為10 μΜ的萊菔硫烷。
[0044] 一般來說，結果表明合并的TQR共混物（共混物Α)處理誘導比各成分的預期的加 成活性（即使以不同的濃度）明顯更高的ARE活性。例如，如在圖1中所示，預期的加成反 應通過對各個成分當各自單獨測試時的％反應求和來計算。如果沒有出現(xiàn)協(xié)同作用，估計 實際共混物％反應將大致等于加成的％反應。然而，在共混物以兩種測試濃度（即15 yg/ ml和50 μ g/ml)處理時，觀察到是預期的3-5倍的反應。結果，得出結論為TQR共混物中 的三種成分，姜黃、槲皮素和迷迭香，協(xié)同地作用以激活ARE。
[0045] 如在圖2中所示，在ARE測定，三種成分姜黃、槲皮素和迷迭香的每一種單獨地進 行測試，以及TQR共混物的組合進行測試。50 μ g/ml濃度的實際TQR共混物％反應比50 μ g/ml濃度的預期的加成作用％反應（通過將姜黃、槲皮素和迷迭香％反應加成在一起進 行簡單的計算，考慮到它們的重量分數）顯著更高，幾乎為后者的2. 5倍。這再次證實TQR 共混物對ARE具有協(xié)同作用。
[0046] 實施例2 測試包含姜黃、槲皮素和迷迭香的共混物（即TQR共混物（共混物A))的制劑，以鑒定 和發(fā)現(xiàn)各成分的協(xié)同比例。特別是，按照實施例1的ARE測定法測試姜黃：槲皮素：迷迭 香的多個比例，以確定最增效的組合。所有共混物以濃度50 μ g/mL進行測試。如在圖3 中所示，發(fā)現(xiàn)在TQR共混物中測試出的最增效的比例包括比例1:3:5的姜黃、槲皮素和迷迭 香。這是出人意外的，因為先前似乎姜黃在該比例中的較高相對水平應改善整體協(xié)同作用， 但是因為某些原因，較低相對水平的姜黃增強協(xié)同作用，或許是由于姜黃在高于10-20 Pg/ ml的濃度時可能對在培養(yǎng)中的細胞具有毒性。
[0047] 實施例3 進一步測試包含姜黃、槲皮素和迷迭香的共混物（即TQR共混物（共混物A))的制劑， 以評價和驗證不同成分濃度的1:3:5的協(xié)同比例。特別是，如在圖4中所示，姜黃、槲皮素 和迷迭香的各個單獨成分的不同濃度（μ g/ml)以ARE測定法測試并與不同TQR濃度的具 有1:3:5比例成分的TQR共混物的相應濃度（μg/ml)比較。由于該測試，已觀察到當TQR 共混物具有濃度50 μ g/ml的1:3:5比例的姜黃、槲皮素和迷迭香時，TQR共混物在ARE測 定中具有的％反應是在指定濃度的姜黃、槲皮素和迷迭香的任何一個單獨的相應％反應的 至少1、2、3、4、5、6、7或8倍。例如，槲皮素顯示約50%反應，而TQR共混物顯示約375%反 應。
[0048] 也觀察到，當1:3:5比例的姜黃、槲皮素和迷迭香的TQR共混物具有濃度60 μ g/ ml時，TQR共混物在ARE測定法中具有的％反應是在指定濃度的姜黃、槲皮素和迷迭香的 任何一個單獨的相應％反應的至少1、2、3、4、5、6或7倍。例如，槲皮素顯示約75%反應，而 TQR共混物顯示約525%反應。
[0049] 另外觀察到，當1:3:5比例的姜黃、槲皮素和迷迭香的TQR共混物具有濃度70 μ g/ml時，TQR共混物在ARE測定法中具有的％反應是在指定濃度的姜黃、槲皮素和迷迭香 的任何一個單獨的相應％反應的至少1、2、3、4、5、6、7或7. 5倍。例如，槲皮素顯示約80% 反應，而TQR共混物顯示約600%反應。
[0050] 還觀察到，當1:3:5比例的姜黃、槲皮素和迷迭香的TQR共混物具有濃度80 μ g/ ml時，TQR共混物在ARE測定法中具有的％反應是在指定濃度的姜黃、槲皮素和迷迭香的 任何一個單獨的相應％反應的至少1、2、3、4、5、6或7倍。例如，槲皮素顯示約90%反應，而 TQR共混物顯示約525%反應。
[0051] 進一步的測試顯示TQR共混物以劑量依賴性方式激活ARE。這用圖5中的EC50值 圖表得到說明。
[0052] 實施例4 為進一步測試和驗證在以上實施例中所示的協(xié)同作用，以第二種測定法評價姜黃、槲 皮素和迷迭香各自對血紅素加氧酶-1的基因表達的作用，以及1:3:5比例的TQR共混物 (共混物A)對血紅素加氧酶-1的基因表達的作用。一般來說，在第二種測定法中，人乳腺 癌MCF-7用姜黃（1. 3 μ g/ml)、槲皮素（3. 9 μ g/ml)和迷迭香（6. 5 μ g/ml)各自獨立地 處理過夜，以及用TQR共混物（15 μ g/ml)處理過夜。第二天，從經處理的細胞分離mRNA 并進行2步驟的RT-qPCR。示于圖6中的結果證實各成分在這些細胞中誘導HM0X-1表達的 大于3倍的增加。如果所有這些加成在一起，則加成作用可能期望為約11. 9倍。然而，TQR 共混物的實際反應為50. 9倍的增加?；诖它c，估計TQR共混物的反應為姜黃、槲皮素或 迷迭香的加成作用的HMOX-I表達反應的至少2、3、4或5倍。
[0053] 實施例5 測試包含圣羅勒、山葵和嫩莖花椰菜籽的共混物（共混物B)的制劑，以評價其誘導 醌還原酶（QR)酶（II期）的能力。QR是其活性受上調ARE的相同信號上調的酶。特別 是，對這3種材料自身和以不同比例包括2:1:0. 1、2:1:0. 2、1:1:0. 1、3:3:0. 6、1:1:0. 6、 1:1:0. 5和1:2:0. 2的圣羅勒：山葵：嫩莖花椰菜籽提取物的共混物的組合進行測試。在 該測試中，采用確定QR活性的常規(guī)測定法。通常地，該測定法包括從位于弗吉尼亞州馬納 薩斯（Manassas)的ATCC獲得的小鼠肝細胞系H印alclc7。然后在該實施例中，用單獨的 材料圣羅勒、山葵和嫩莖花椰菜籽和不同比例的共混物處理這些細胞48小時。溶解小鼠肝 細胞，加入含有葡萄糖6磷酸、黃素腺嘌呤二核苷酸（"FAD")、煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸 ("NADP"）、葡萄糖6磷酸脫氫酶、MTT和甲萘醌的QR底物并于室溫下培養(yǎng)3-4分鐘，出現(xiàn) 紫色（QR活性的指示）。QR的活性與在610 nM處的吸收值成比例。共混物比例的結果作 為相比對照的％反應示于圖7中。對照物質是IM的萊菔硫烷。
[0054] 選擇比例1:1:0. 2的圣羅勒、山葵和嫩莖花椰菜用于在下文討論的臨床試驗。進 行以該比例激活醌還原酶的劑量依賴性研宄，結果示于圖8中。
[0055] 共混物B (圣羅勒、山葵和嫩莖花椰菜籽提取物）對抗氧化劑基因表達的作用 示于圖9。合并5 yg圣羅勒、5 yg山葵和I yg嫩莖花椰菜籽提取物的濃縮物。進行 RT-qPCR。各個樣品獨立地產生HMOX的約1. 5倍誘導，如通過與實施例4中描述的相同方 法所測定的，而在所有3種材料均存在的情況下所述反應為約2倍。
[0056] 臨床分析 制備兩種劑量（各自為300 mg和600 mg)的4種不同植物基共混物（共混物A、B、C 和D)。招募六十（60)名健康男性參加本研宄。將參與者隨機分成4組，以使十五（15)名 參與者針對4種共混物的每一種被分配。來自選擇攝入共混物A和B的參與者組的結果將 在本文進一步討論。來自選擇攝入共混物C和D的參與者組的結果與本發(fā)明無關，因為共 混物C和D含有不同于共混物A和B的材料共混物。
[0057] 鑒于老化被認為是一種氧化應激模型，選擇年齡45-65歲之間的參與者的相對年 長的亞群。不考慮個人的種族背景。然而，在位于加利福尼亞州布埃納公園的Southbay藥 物研宄所