二氧化物。
[0027](2)硫辛酰替拉扎明的合成:先將硫辛酸0.412?412g溶解在二氯甲烷20?2000mL中，加入三乙胺0.6?600mL，攪拌過(guò)夜，然后加入1-乙基_(3_ 二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽0.460?460g，和N-羥基苯并三唑0.324?324g，室溫?cái)嚢?.5?5.0小時(shí)，然后加入替拉扎明0.356?356g，攪拌過(guò)夜；加水20?4000mL，分液，有機(jī)相濃縮后柱層析，得產(chǎn)物硫辛酰替拉扎明；
[0028](3) 11-巰基^^一酰替拉扎明的合成:先將ll-巰基^^一酸0.436?436g，溶解在二氯甲烷20?4000mL中，加入三乙胺0.6?600mL，攪拌過(guò)夜，然后加入1-乙基_ (3- 二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽0.46?460g和N-羥基苯并三唑0.324?324g，室溫?cái)嚢?.5?5.0小時(shí)，然后加入替拉扎明0.356?356g ;攪拌過(guò)夜；加水20?4000mL，分液，有機(jī)相濃縮后柱層析，得產(chǎn)物11-巰基十一酰替拉扎明。
[0029]所述的替拉扎明-金納米粒子復(fù)合物的制備方法，還包括有所述的第二步金納米粒子的制備。以下為10種金納米粒子的制備方法。
[0030](l)2nm N-(2_巰基丙?；?-甘氨酸包被的金納米粒子的制備:量取純甲醇0.6?600mL，純乙酸0.1?100mL，倒入5.0?5000mL的圓底瓶中攪拌，然后量取0.5?500mL, I %的氯金酸，滴加到反應(yīng)混合液中；稱(chēng)取0.0638?63.8g的N-(2-巰基丙酰基)-甘氨酸溶于0.3?300mL的超純水中，然后滴加到反應(yīng)液中，攪拌15_200min ;稱(chēng)取NaBH4,0.0l?10g溶于0.2?200mL的冰超純水，滴加到反應(yīng)液中；室溫下攪拌0.2?20h ;反應(yīng)完畢后，取下密封冷藏；用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器去除雜物，然后用鹽酸調(diào)PH為1.0?3.0，然后用透析袋透析4?96h，經(jīng)濃縮凍干可得2nm的N- (2-巰基丙?；?-甘氨酸包被的金納米粒子;
[0031](2)6nm N-(2_巰基丙?；?-甘氨酸包被的金納米粒子的制備:量取純甲醇0.6?600mL，純乙酸0.1?100mL，倒入5.0?5000mL的圓底瓶中攪拌，然后量取0.5?500mL, I %的氯金酸，滴加到反應(yīng)混合液中；稱(chēng)取6.95mg?69.5g的N-(2-巰基丙?；?-甘氨酸溶于0.3?300mL的超純水中，然后滴加到反應(yīng)液中，攪拌15_200min ;稱(chēng)取NaBH4,0.01?10g溶于0.2?200mL的冰超純水，滴加到反應(yīng)液中；室溫下攪拌0.2?20h ;反應(yīng)完畢后，取下密封冷藏。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器去除雜物，然后用鹽酸調(diào)PH到1.0?3.0，然后用透析袋透析4?96h，經(jīng)濃縮凍干可得6nm的N- (2-巰基丙?；?-甘氨酸包被的金納米粒子;
[0032](3) 15nm檸檬酸鈉包被的金納米粒子的制備:向三口燒瓶中分別添加1.0?100mL的超純水，同時(shí)添加0.1?1mL濃度I %的氯金酸溶液，加熱至煮沸；分別快速加入0.3?30mL I %的檸檬酸鈉溶液，煮沸10?300min，停止加熱，冷卻至室溫；8000-15000rpm離心2?lOOmin，用超純水洗滌3次，可得15nm的檸檬酸鈉包被的金納米粒子;
[0033](4)向三口燒瓶中分別添加1.0?100mL的超純水，同時(shí)添加0.1?1mL濃度
I%的氯金酸溶液，加熱至煮沸；分別快速加入0.1?30mL I %的檸檬酸鈉溶液，煮沸10?300min，停止加熱，冷卻至室溫。8000-15000rpm離心2?lOOmin，用超純水洗滌3次，可得30nm的檸檬酸鈉包被的金納米粒子；
[0034](5) 15nm N-(2_巰基丙?；?-甘氨酸包被的金納米粒子的制備:向三口燒瓶中分別添加1.0?100mL的超純水，同時(shí)添加0.1?10mL濃度I %的氯金酸溶液，加熱至煮沸；分別快速加入0.3?300mL I %的檸檬酸鈉溶液，煮沸30?300min，停止加熱，冷卻至室溫；然后滴加含0.005?5.0g的T1pronin的0.2?20mL超純水溶液，室溫?cái)嚢??96h ；8000-15000rpm離心2?lOOmin，用超純水洗滌3次，可得15nm T1pronin包被的金納米粒子；
[0035](6) 30nm N-(2_巰基丙?；?-甘氨酸包被的金納米粒子的制備:向三口燒瓶中分別添加1.0?100mL的超純水，同時(shí)添加0.1?10mL濃度I %的氯金酸溶液，加熱至煮沸；分別快速加入0.3?300mL I %的檸檬酸鈉溶液，煮沸30?300min，停止加熱，冷卻至室溫；然后滴加含0.005?5.0g的T1pronin的0.2?20mL超純水溶液，室溫?cái)嚢??96h ;8000_15000rpm離心2?lOOmin，用超純水洗滌3次，可得30nm N-(2-巰基丙?；?_甘氨酸包被的金納米粒子。
[0036](7) 15nm聚乙二醇包被的金納米粒子的制備:向三口燒瓶中分別添加10?100mL的超純水，同時(shí)添加1.0?1mL濃度I %的氯金酸溶液，加熱至煮沸；分別快速加入1.0?30mL I %的檸檬酸鈉溶液，煮沸30?300min，停止加熱，冷卻至室溫；然后滴加含1.0?10mg的巰基聚乙二醇的1.0?10mL超純水溶液，室溫?cái)嚢??96h ；8000-15000rpm離心2?lOOmin，用超純水洗滌3次，可得15nm聚乙二醇包被的金納米粒子；
[0037](8)30nm聚乙二醇包被的金納米粒子的制備:向三口燒瓶中分別添加1.0?100mL的超純水，同時(shí)添加1.0?1mL濃度I %的氯金酸溶液，加熱至煮沸；分別快速加入1.0?13mL I %的檸檬酸鈉溶液，煮沸30?300min，停止加熱，冷卻至室溫；然后滴加含1.0?10mg的巰基聚乙二醇的1.0?10mL超純水溶液，室溫?cái)嚢??96h;8000_15000rpm離心2?lOOmin，用超純水洗滌3次，可得30nm聚乙二醇包被的金納米粒子;
[0038](9) 50nm的梓檬酸包被的金納米粒子的制備:取0.5?50mL 15nm的金納米溶液，加0.5?60mL10mM的氯金酸，加3.0?300mL超純水，混合攪拌；加入2.5?250mL 0.1 %的冰抗壞血酸溶液，滴加速度控制在5.0?10min內(nèi)，顏色變化為:淺色一紫色一深色，攬拌3.0?300min ；8000-15000rpm離心2?10minmin,用超純水洗3次?？傻?0nm的檸檬酸包被的金納米粒子。
[0039](10) 50nm T1pronin包被的金納米粒子的制備:取0.5?50mL15nm的金納米溶液，加0.5?60mL10mM的氯金酸，加3.0?300mL超純水，混合攪拌；加入2.5?250mL0.1 %的冰抗壞血酸溶液，滴加速度控制在5.0?10min內(nèi)，顏色變化為；淺色一紫色一深色，攪拌3.0?300min:然后加入含有7.5?750mg的T1pronin的超純水溶液2?200毫升，常溫?cái)嚢?4?96h ;8000-15000rpm離心2?lOOmin，用超純水洗3次；可得50nmT1pronin包被的金納米粒子。
[0040]所述的替拉扎明-金納米粒子復(fù)合物的制備方法，還包括有所述的第三步金納米粒子配體交換法制備替拉扎明-金納米粒子復(fù)合物。以下為三種替拉扎明-金納米粒子復(fù)合物的制備方法。
[0041](I) 15nm的聚乙二醇包被的替拉扎明-金納米粒子復(fù)合物的制備:向錐形瓶中加入1.0?500mL的超純水和0.5?50mL 10?1000 μ g/mL的15nm的聚乙二醇包被的金納米粒子溶液；加入含1.4?140mg的硫辛酰替拉扎明的3.0?300mL甲醇溶液，加畢，室溫?cái)嚢鐸?30小時(shí)隨著硫辛酰替拉扎明的加入，每隔30分鐘取樣，8000-15000rpm離心20?200min，用超純水洗3次；再用超純水溶解后進(jìn)行紫外吸收光譜測(cè)量，加入硫辛酸替拉扎明后，金納米粒子的等離子特征吸收峰從522nm移動(dòng)到526nm，264nm處出現(xiàn)了硫辛酸的特征吸收峰；證實(shí)硫辛酰替拉扎明已經(jīng)連接到15nm聚乙二醇包被的金納米粒子表面；上述溶液室溫?cái)嚢?.5?60小時(shí)后，在3000-15000rpm離心20?60min，用超純水洗3次；離心后可得聚乙二醇包被的替拉扎明-金納米粒子復(fù)合物；
[0042](2) 15nm的檸檬酸鈉包被的替拉扎明-金納米粒子復(fù)合物的制備:向錐形瓶中加入1.5?150mL的超純水和0.1?1mL 10?10000 μ g/mL的15nm的檸檬酸鈉包被的金納米粒子溶液；加入含1.4?140mg的硫辛酰替拉扎明的3?300mL甲醇溶液，加畢，室溫?cái)嚢?.5?60h ;3000-15000rpm離心20?60min，用超純水洗3次；可得檸檬酸鈉包被的替拉扎明-金納米粒子復(fù)合物。
[0043](3)所述的替拉扎明-金納米粒子復(fù)合物的制備方法，還包括有所述的第三步替拉扎明-金納米粒子復(fù)合物的步驟為:向錐形瓶中加入10?300mL的超純水和0.5?20mL200?2000 μ g/mL的2?200nm的金納米粒子溶液；加入含1.0?40mg的替拉扎明-連接部分的2?200mL甲醇溶液，加畢，室溫?cái)嚢??72小時(shí)；3000-15000rpm離心
5-60min，用超純水洗I?5次；離心后可得包被的替拉扎明-金納米粒子復(fù)合物。
[0044]所述的替拉扎明-金納米粒子復(fù)合物的制備方法，還包括有所述的第一步:替拉扎明-連接部分合成中所使用的縮合劑為二氯亞砜、三氯氧磷、N, N- 二甲氨基吡啶/ 二環(huán)己基碳二亞胺、1-羥基苯并三唑/ (3- 二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽或N，N- 二甲氨基吡啶/(3- 二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽。
[0045]所述的替拉扎明-金納米粒子復(fù)合物，在增強(qiáng)光、X-射線(xiàn)、γ-射線(xiàn)、電子束、質(zhì)子束和重離子束輻照產(chǎn)生的自由基產(chǎn)額的應(yīng)用。
[0046]所述的替拉扎明-金納米粒子復(fù)合物，在增強(qiáng)光、X-射線(xiàn)、γ-射線(xiàn)、電子束、質(zhì)子束和重離子束輻照腫瘤細(xì)胞的損傷的應(yīng)用。
[0047]所述的替拉扎明-金納米粒子復(fù)合物，在光、X-射線(xiàn)、γ-射線(xiàn)、電子束、質(zhì)子束和重離子束放射治療腫瘤的應(yīng)用。
[0048]所述的替拉扎明-金納米粒子復(fù)合物，所述的放射治療包括紫外光照、紅外光照、X-射線(xiàn)治療、γ -射線(xiàn)治療、電子束治療、質(zhì)子束治療和重離子束治療放射治療。
[0049]所述的替拉扎明-金納米粒子復(fù)合物，所述的腫瘤包括實(shí)體瘤、肝癌、非小細(xì)胞肺癌、頭頸部癌癥、轉(zhuǎn)移黑色素瘤、子宮癌、卵巢癌、主腹膜癌。
[0050]本發(fā)明的有益效果:所述的替拉扎明-金納米粒子復(fù)合物能夠增強(qiáng)光、X-射線(xiàn)、γ -射線(xiàn)、電子束、質(zhì)子束和重離子束輻照產(chǎn)生的自由基產(chǎn)額，還可以增強(qiáng)上述粒子束輻照對(duì)腫瘤細(xì)胞所產(chǎn)生的損傷。替拉扎明-金納米粒子復(fù)合物有望應(yīng)用于腫瘤的光、X-射線(xiàn)、γ -射線(xiàn)、電子束、質(zhì)子束和重離子束放射治療中。
【附圖說(shuō)明】
:
[0051]圖1為本發(fā)明替拉扎明-金納米粒子的結(jié)構(gòu)通式(I)；
[0052]圖2為本發(fā)明所涉及到巰基化合物和二硫化合物的結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)式(2、3)；
[0053]圖3為本發(fā)明制備過(guò)程中替拉扎明-金納米粒子的紫外吸收光譜隨時(shí)間的變化圖；
[0054]圖4是替拉扎明-金納米粒子在不同劑量X-射線(xiàn)輻照下自由基的產(chǎn)額變化圖；
[0055]圖5 (a)是替拉扎明-金納米粒子的細(xì)胞毒性圖；
[0056]圖5 (b)是替拉扎明-金納米粒子的細(xì)胞毒性圖；
[0057]圖6是替拉扎明-金納米粒子對(duì)X-射線(xiàn)輻照HepG2細(xì)胞后的細(xì)胞克隆存活曲線(xiàn)圖。
【具體實(shí)施方式】
:
[0058]以下結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例進(jìn)行說(shuō)明，應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的優(yōu)選實(shí)施例僅用于說(shuō)明和解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
[0059]實(shí)施例1:一種替拉扎明-金納米粒子復(fù)合物，其主要特點(diǎn)在于由外層的替拉扎明通過(guò)連接部分與內(nèi)核金納米粒子相連接組成，其結(jié)構(gòu)可簡(jiǎn)化為式(I)，見(jiàn)圖1。
[0060]所述的金納米粒子為1.5-400nm，并具有磁性-金納米粒子核殼結(jié)構(gòu)；所述金納米粒子的表面包護(hù)有保護(hù)基團(tuán)(PG)，所述保護(hù)基團(tuán)包括有巰基聚乙二醇(PEG)、檸檬酸鈉、N-(2-巰基丙?；?-甘氨酸(t1pronin)、含巰基的氨基酸及其鹽、硫辛酸、含巰基的C3-C18酸及其鹽的某一種或多種混合組合；
[0061]所述的TPZ為替拉扎明；
[0062]連接部分選自于SH-(CH2)n-(CHR1)m-CO-, SH-(CH2)n-(CH2O)m-CH2-CO-, R13N+-(CH2) n-⑶-，R13N+- (CH2) n- (CH2O) ^-CH2-⑶-，R1S-S-CH (R2) - (CH2) n-⑶-，R1S-S-CH (R2) - (CH2)n-(OCH2)m-CO-,其中 η = 1-18, m = 1-18，R1 和 R 2為 C「C5的烷基，或 R 1和 R 2相連與 S-S 形成(取代的)五元、六元、七元、八元環(huán)結(jié)構(gòu)。
[0063]實(shí)施例2:所述的替拉扎明-金納米粒子復(fù)合物，所述的金納米粒子尺寸優(yōu)選為1-1OOnm金納米粒子或具有核殼結(jié)構(gòu)的四氧化三鐵磁性_金納米粒子；所述的連接部分優(yōu)選為(見(jiàn)圖2):
[0064]其中η = 1-18，m = 1-18, R1和R 2為C廠(chǎng)仏的烷基。
[0065]本發(fā)明的通式(I)的所有立體異構(gòu)體、幾何異構(gòu)體、互變異構(gòu)體，其中各原子包括所有同位素的情況。當(dāng)分子中存在一個(gè)或多個(gè)手性中心時(shí)，根據(jù)式(I)的復(fù)合物可以是藥學(xué)上可以接受的消旋體混合物形式或者單一立體異構(gòu)體形式。本發(fā)明的復(fù)合物還包括互變異構(gòu)體形式?；プ儺悩?gòu)體形式來(lái)源于一個(gè)單鍵與相鄰的雙鍵交換并一起伴隨一個(gè)質(zhì)子的迀移；本發(fā)明的復(fù)合物還包括所有同位素的原子，無(wú)論是在中間體或最后的化合物。同位素的原子包括具有相同的原子數(shù)，但不同質(zhì)量數(shù)。例如，氫的同位素包括氚和氘。
[0066]本發(fā)明的復(fù)合物還可以以藥學(xué)上可接受的鹽的形式存在。藥學(xué)上可接受的鹽是指把母體化合物中的基團(tuán)轉(zhuǎn)換成鹽的形式。藥學(xué)上可接受的鹽的形式，可以是無(wú)機(jī)酸形成的鹽(如鹽酸鹽、硫酸鹽、磺酸鹽等)，也可以是與胺形成的銨鹽(如三乙胺鹽、哌啶鹽或者堿性藥等)，也可以是與堿金屬或堿土金屬形成的金屬鹽(如鈉鹽、鉀鹽、鈣或鎂鹽等)。
[0067]實(shí)施例3:替拉扎明-金納米粒子復(fù)合物的制備方法，其步驟為:
[0068]第一步，替拉扎明-連接部分合成:將含巰基或二硫鍵的酸1.0g溶解在二氯甲烷50mL中，加入三乙胺5.0mL，攪拌過(guò)夜，然后加入1-乙基_(3_ 二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽1.0g,和N-羥基苯并三唑0.8g,室溫?cái)嚢?.0小時(shí)，然后加入替拉扎明2.0g,攪拌過(guò)夜；加水20mL，分液，有機(jī)相濃縮后柱層析，得產(chǎn)物替拉扎明-連接部分；
[0069]第二步，金納米粒子的制備:向三口燒瓶中分別添加100mL溶劑，同時(shí)添加10mL濃度10 %的氯金酸溶液，加熱至煮沸；快速加入10mL I