至1小時(shí)，加熱煮30~40分鐘，過(guò) 濾，濾液備用；濾渣加水第二次加熱，煮沸20~30分鐘，過(guò)濾；將三次濾液合在一起，加熱 濃縮至糊狀，放入烘箱80°C烘干后粉碎和蜂蜜調(diào)和搓成丸劑。
[0079] 本發(fā)明外用乳膏劑的制備：
[0080] 先將桂枝1500g、乳香1500g、沒(méi)藥1500g、血竭1500g和千年健1500g用蒸餾法 汽化成結(jié)晶，粉碎備用；將其余原料藥藥雷公藤1500g，川芎1500g，馬錢(qián)子1500g，忍冬藤 1500g，全蝎1500g，土鱉蟲(chóng)1500g，續(xù)斷1500g，地龍1500g，紅花1500g，虎杖1500g，透骨草 1500g，舒筋草1500g加占其質(zhì)量5~8倍量乙醇加熱回流提取2次，所述每次1~2小時(shí)， 將2次提取液合并靜置；所述步驟c中，將上述乙醇提取過(guò)的藥渣加5~8倍量水加熱回流 提取2次，每次1~2小時(shí)，將2次提取液合并靜置；將上述乙醇提取過(guò)的藥渣加占其質(zhì)量 10倍量的水加熱1~2小時(shí)回流提取2次；提取時(shí)間為2小時(shí)、1小時(shí)；合并2次提取液， 提取液通過(guò)管式離心，得離心液，離心液過(guò)D 101大孔樹(shù)脂進(jìn)行吸附，先用水洗除雜，然后 用70 %的乙醇進(jìn)行洗脫，收集洗脫液，成浸膏靜置備用；所述步驟d中，將上述2種提取液 合并，減壓濃縮相對(duì)密度為80°C時(shí)I. 35的濾液，回收乙醇，將所得濾液調(diào)整比重到I. 50,減 壓得浸膏，加入制備好的結(jié)晶粉末，調(diào)和甘油攪拌均勻調(diào)成乳膏。
[0081] 本發(fā)明貼膏劑的制備：先將桂枝1500g、乳香1500g、沒(méi)藥1500g、血竭1500g和千 年健1500g用蒸餾法汽化成結(jié)晶，粉碎備用；將其余原料藥藥雷公藤1500g，川芎1500g，馬 錢(qián)子1500g，忍冬藤1500g，全蝎1500g，土鱉蟲(chóng)1500g，續(xù)斷1500g，地龍1500g，紅花1500g， 虎杖1500g，透骨草1500g，舒筋草1500g放入乙醇中加熱回流提取2次；每次1~2小時(shí)， 將提取液靜置。將乙醇提取過(guò)的原料藥藥材加水加熱回流提取1次，每次1~2小時(shí)；然后 將2種提取液合并靜置。將上述兩種提取液合并，將合并后2次的提取液抽入減壓濃縮罐 內(nèi)，減壓至0. 03-0. 08MPa，溫度保持在60-80°C，濃縮至相對(duì)密度為1. 20,溫度至60°C _70°C 的浸膏；將三次濾液合在一起，加熱濃縮至糊狀，調(diào)和制備的蒸餾結(jié)晶粉末，用酒、醋、蜂蜜 調(diào)和敷于腫痛關(guān)節(jié)處，貼藥之處，需洗凈，用保鮮膜、醫(yī)用膠帶固定。以患者能耐受為度， 一般5h后揭下，每日1次。
[0082] 本發(fā)明外用擦劑的制備：先將桂枝1200g、乳香1200g、沒(méi)藥1300g、血竭1300g和 千年健1300g用蒸餾法汽化成結(jié)晶，粉碎備用；將其余原料藥藥雷公藤1300g，川芎1300g， 馬錢(qián)子1200g，忍冬藤1200g，全蝎1100g，土鱉蟲(chóng)1200g，續(xù)斷1200g，地龍1200g，紅花 120(^，虎杖120(^，透骨草110(^，舒筋草120(^，投入粉碎機(jī)粉碎成細(xì)粉，細(xì)粉過(guò)篩后放入 耐酸堿浸漬鍋內(nèi)，在常溫常壓下，與乙醇共同浸漬10~15天，將浸漬好的液體及藥渣進(jìn)行 壓榨過(guò)濾，分離后取濾液，然后與前述濃縮液混和；將所述混和液加熱濃縮至糊狀，放入烘 箱80 °C烘干后冷卻，摻入蒸餾的粉末，混合凡士林制成擦劑。
[0083] 每天晚上患者洗干凈病患部位，貼一劑本發(fā)明乳貼于患處，24小時(shí)后揭掉即可。 本發(fā)明外用帖劑可7天為一療程使用，且不易污染衣物，使用方便，快捷。
[0084] 本發(fā)明所采用的熏蒸治療發(fā)是在藥物治療的基礎(chǔ)之上進(jìn)行的，兩種方法加起來(lái) 的效果顯著。熏蒸比一般的室溫都高很多，這樣蒸氣可以刺激皮膚，皮膚溫度升高以后毛 細(xì)血管就會(huì)隨著擴(kuò)張，像平時(shí)人運(yùn)動(dòng)出汗一樣，可以改善血液循環(huán)，加快新陳代謝的速 度，能夠使人體免疫力功能大大增強(qiáng)。皮膚是人體最大分布最廣的器官，它不僅可以低于 外部侵襲起到保護(hù)作用，還具有分泌、排泄等等眾多功能。熏蒸的主要原理就是利用皮膚 的功能，要不一定只從口入，皮膚也是藥物進(jìn)入身體的一種方式，而且對(duì)于某些癥狀見(jiàn)效 很好，熏蒸使得藥物通過(guò)皮膚來(lái)深入到人體內(nèi)部，這樣減輕了藥物對(duì)人體器官的破壞作 用，可謂治療類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的佳法。
[0085] 本中藥組合物益腎補(bǔ)虛，養(yǎng)陰清熱、化濕通絡(luò)，止痛通痹，活血養(yǎng)血，標(biāo)本兼治，提 高人體自身免疫力，調(diào)節(jié)神經(jīng)系統(tǒng)，活血化淤散結(jié)，對(duì)人體不產(chǎn)生任何副作用，安全有效； 外用藥物能針對(duì)病變部位直接用藥，直達(dá)病灶，靶向性強(qiáng)，活血散淤，減輕疼痛，無(wú)副作用， 使藥物能迅速滲入使皮膚吸收，而且見(jiàn)效快，治療效果好，成本低廉、制取工藝簡(jiǎn)便易行。
[0086] 毒理學(xué)試驗(yàn)：
[0087] 試驗(yàn)例1 :本發(fā)明急性毒性試驗(yàn)
[0088] -、試驗(yàn)材料：
[0089] 動(dòng)物：昆明種小鼠，體重21_24g，雌雄各半，山東大學(xué)生物試驗(yàn)室育種。藥物：本發(fā) 明片劑，含〇.〇365g生藥/片
[0090] 二、方法：
[0091] 1、LD50計(jì)算：采用改良寇氏法，將小鼠隨機(jī)分成5組，每組10只，雌雄各半，將片 劑加蒸餾水溶解，配成最大濃度，按小鼠最大允許容量給藥，所給劑量按生藥量依次為18， 14. 4,11. 5,9. 2, 7.4 (g.kg-Ι)，在動(dòng)物禁食（不禁水）18小時(shí)后，一日內(nèi)分兩次給藥（間隔 半小時(shí)），每次0. 5ml，觀察動(dòng)物死亡情況。
[0092] 2、最大耐受劑量測(cè)定（MTD值）：取小鼠20只，雌雄各10只。將片劑加蒸餾水溶解， 配成最高濃度，按動(dòng)物的最大耐受量，以注射灌喂器能抽動(dòng)為準(zhǔn)。在動(dòng)物禁食（不禁水）18 小時(shí)后，一日內(nèi)分兩次給藥（間隔半小時(shí)），每次〇. 5ml (每ml含生藥0. 36g)，總藥量為18g 生藥/kg. d，相當(dāng)臨床成人50Kg體重用量的300倍。給藥后連續(xù)觀察7天。
[0093] 三、試驗(yàn)結(jié)果：
[0094] 在LD50計(jì)算中當(dāng)用最大允許濃度和最大允許容量給予小鼠時(shí)（18g/Kg. d)，未見(jiàn) 小鼠死亡，即未測(cè)出LD50,只可求最大耐受劑量，在7天觀察期中，動(dòng)物其食欲、活動(dòng)、毛色、 精神狀態(tài)等皆正常，發(fā)育正常，未見(jiàn)有死亡。即選用相當(dāng)于臨床劑量的300倍藥量，并無(wú)不 良反應(yīng)發(fā)生，表明急性毒性極小，MTD > 18g/Kg. d。
[0095] 實(shí)驗(yàn)例2 :累計(jì)毒性實(shí)驗(yàn)：
[0096] 本發(fā)明中藥制劑內(nèi)服蜜煉丸劑劑對(duì)小鼠按7. 69、19. 18和43. 21g生藥/kg連續(xù)用 藥15周（l.Oml/lOOg體重，每天2次）及停藥3周后，結(jié)果表明：本發(fā)明中藥制劑對(duì)大鼠的 毛發(fā)、行為、大小便、體重、臟器重量、血象、肝腎功能、血糖、血脂等指標(biāo)均無(wú)明顯影響，臟器 肉眼沒(méi)有發(fā)現(xiàn)異樣變化和組織學(xué)檢查結(jié)果表明，用藥15周及停藥3周后，大鼠各臟器均無(wú) 明顯改變。說(shuō)明本發(fā)明中藥制劑內(nèi)服膠囊劑對(duì)大鼠長(zhǎng)期用藥后毒性小，停藥后也沒(méi)有異樣 反應(yīng)，應(yīng)用安全。
[0097] 實(shí)驗(yàn)例3 :急性經(jīng)皮毒性試驗(yàn)結(jié)果
[0098] 本發(fā)明藥物外用復(fù)方制劑，具有祛風(fēng)除濕，活血通絡(luò)之功效，用于治療風(fēng)濕、類(lèi)風(fēng) 濕性關(guān)節(jié)炎等癥。據(jù)此，首先進(jìn)行急性經(jīng)皮毒性試驗(yàn)，以觀察該藥對(duì)大鼠急性經(jīng)皮毒性是否 屬實(shí)際無(wú)毒級(jí)。
[0099] 受試物：本發(fā)明外用的制備用藥膏。秤取受試物50g加蒸餾水制成50%糊狀物備 用。
[0100] 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：由山東省中醫(yī)藥研宄院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供SD大白鼠20只，雌雄各 半，體重180-220g，一級(jí)動(dòng)物（醫(yī)動(dòng)字第08-25號(hào)），飼料來(lái)源同上。動(dòng)物室環(huán)境：溫度： 22-25°C，相對(duì)濕度：45-55%，動(dòng)物房合格證號(hào)：醫(yī)動(dòng)字第08-37號(hào)。試驗(yàn)方法：試驗(yàn)前24小 時(shí)，于動(dòng)物背部脊柱兩側(cè)去毛，去毛范圍約為體表面積10%。按5000mg/kg. bw的劑量（涂 敷量I. 0g/100g. bw)，對(duì)試鼠去毛部位進(jìn)行涂敷并固定，24小時(shí)后，溫水除去殘留受試物， 連續(xù)觀察7天。試驗(yàn)結(jié)果：觀察期內(nèi)未見(jiàn)試鼠全身異常變化，也未見(jiàn)死亡，涂受試物局部未 見(jiàn)紅腫、潰爛、炎癥、壞死等反應(yīng)。以上結(jié)果說(shuō)明該藥對(duì)大鼠急性經(jīng)皮毒性屬實(shí)際無(wú)毒級(jí)。
[0101] 實(shí)驗(yàn)例4:多次皮膚刺激試驗(yàn)結(jié)果
[0102] 按照DB61-267-1998《保健用品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序和檢驗(yàn)方法》的要求，對(duì)本 發(fā)明藥物進(jìn)行了多次皮膚刺激試驗(yàn)。
[0103] 受試物：本發(fā)明的擦劑。秤取受試物50g加蒸餾水制成50%糊狀物備用。
[0104] 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：由山東大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供日本大耳白家兔4只，雌雄各 半，體重2. 5-3. 0kg，一級(jí)動(dòng)物（醫(yī)動(dòng)字第08-018號(hào)），飼料來(lái)源同上。動(dòng)物室環(huán)境：溫度： 22-25°C，相對(duì)濕度：45-55%。動(dòng)物房合格證號(hào)：醫(yī)動(dòng)字第08-37號(hào)。試驗(yàn)方法：試驗(yàn)前24 小時(shí)，于每只兔背部脊柱兩側(cè)剪毛備皮，去毛范圍各3cmX6cm。取受試物0. 5g/只，配制后 涂在每兔一側(cè)皮膚上，每天涂抹一次，對(duì)側(cè)均作溶劑對(duì)照。連續(xù)涂抹14d。每天涂前剪毛，不 得損傷皮膚，保證受試物與皮膚充分接觸。每天觀察皮膚反應(yīng)及打分。試驗(yàn)結(jié)束，取涂抹部 位皮膚進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。
[0105] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：多次皮膚刺激試驗(yàn)表明本發(fā)明多次皮膚刺激最高刺激指數(shù)及病理組織 積分均為0,按照DB61-267-1998《保健用品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序和檢驗(yàn)方法》中皮膚刺 激強(qiáng)度分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，本發(fā)明多次皮膚刺激強(qiáng)度屬無(wú)刺激性。
[0106] 實(shí)驗(yàn)例5、皮膚過(guò)敏試驗(yàn)
[0107] 按照DB61-267-1998《保健用品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序和檢驗(yàn)方法》的要求，對(duì)本 發(fā)明藥物進(jìn)行了皮膚過(guò)敏試驗(yàn)。
[0108] 受試物：本發(fā)明擦劑。秤取受試物IOg加蒸餾水制成50%糊狀物備用。陽(yáng)性對(duì)照 物：2,4_二硝基氯代苯，北京市興津化工廠出品，批號(hào)20020522。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：由山東大學(xué)醫(yī) 學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供豚鼠30只，雌雄各半，體重250-300g，一級(jí)動(dòng)物，飼料來(lái)源同上。動(dòng) 物室環(huán)境：溫度：22-25°C，相對(duì)濕度：45-55%。動(dòng)物房合格證號(hào)：醫(yī)動(dòng)字第08-37號(hào)。試驗(yàn) 方法：將試驗(yàn)豚鼠隨機(jī)分成三組，每組10只，雌雄各半，分別為受試物組、陰性對(duì)照組和陽(yáng) 性對(duì)照組。
[0109] 致敏接觸：給受試物前24小時(shí)將豚鼠背部脊柱左側(cè)毛去掉，去毛范圍約 3cmX3cm。取受試物0.2g/只，配制后涂敷在動(dòng)物背部左側(cè)脫毛區(qū)，持續(xù)6小時(shí)。第七天和 第十四天，用同樣方法重復(fù)一次，陽(yáng)性對(duì)照組涂1 % DNCB，陰性對(duì)照組不作處理。激發(fā)接觸： 于末次給受試物后十四天，將受試物〇. 2g/只，配制后涂敷于豚鼠背部右側(cè)脫毛區(qū)，6小時(shí) 后去掉受試物，即刻觀察過(guò)敏反應(yīng)情況，然后于1、24、48、72小時(shí)再次觀察。陽(yáng)性對(duì)照組涂 1% DNCB，陰性對(duì)照組不作處理。觀察方法同受試物組。
[0110] 試驗(yàn)結(jié)果：皮膚過(guò)敏試驗(yàn)表明本發(fā)明貼劑，按照按照DB61-267-1998《保健用品安 全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序和檢驗(yàn)方法》中有關(guān)皮膚致敏強(qiáng)度評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，本發(fā)明屬無(wú)致敏性。
[0111] 實(shí)驗(yàn)例6、抗炎試驗(yàn)、鎮(zhèn)痛試驗(yàn)、微循環(huán)試驗(yàn)
[0112] 抗炎試驗(yàn)：受試組小鼠耳炎癥腫脹度小于空白對(duì)照組，且差異有顯著性 (P〈0. 05)，說(shuō)明本發(fā)明貼劑具有一定的抗炎作用。鎮(zhèn)痛試驗(yàn)：受試組小鼠扭體次數(shù)比空白對(duì) 照組減少，且差異有顯著性（P〈〇. 05)。說(shuō)明本發(fā)明貼劑具有一定的鎮(zhèn)痛作用。
[0113] 微循環(huán)試驗(yàn)：受試組小鼠耳廓微動(dòng)、靜脈口徑及毛細(xì)血管數(shù)均較空白對(duì)照組明顯 增加，且差異均有高度顯著性（p〈0.01)，說(shuō)明本發(fā)明貼劑具有改善小鼠耳廓微循環(huán)的作用。
[0114] 藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)：
[0115] 一、材料和方法
[0116] I. 1動(dòng)物：Wistar大鼠，昆明種小鼠由山東藥科大學(xué)動(dòng)物室提供。動(dòng)物隨機(jī)分組后 置于溫度24-25°C，相對(duì)濕度50-70