測(cè)定1次,同時(shí)以12. 5%葡萄糖 液持續(xù)靜脈滴注;為維持空腹血糖水平,適當(dāng)調(diào)整;其輸注速度。待血糖值穩(wěn)定后,用GC法 (最后35min內(nèi)葡萄糖輸注速度的平均值,M值)評(píng)價(jià)胰島素敏感性。
[0281] 7?數(shù)據(jù)分析
[0282] 所有數(shù)據(jù)以S±s表示;各組基本統(tǒng)計(jì)量及方差齊性檢驗(yàn)和兩組間比較均用SPSS 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析。
[0283] 二、結(jié)果
[0284] 1.各組體質(zhì)量及內(nèi)臟脂肪的比較見(jiàn)表7-1、表7-2。
[0285] 表7-1各組大鼠體質(zhì)量的變化([±5,g:>
[0290] 注:與正常對(duì)照組比較,*P〈0. 05。
[0291] 代謝綜合征組較正常對(duì)照組體質(zhì)量和內(nèi)臟脂肪增加明顯(P〈0. 05);表2可以看出 文迪雅和本發(fā)明藥物組較代謝綜合征組,體質(zhì)量和內(nèi)臟脂肪均有下降趨勢(shì),兩組之間無(wú)差 異。
[0292] 2?各組FBS、FINS、M值的比較
[0293] 見(jiàn)表7-3。代謝綜合征組較正常對(duì)照組M值明顯降低(P〈0. 01),F(xiàn)INS明顯升 高(P〈0. 01);本發(fā)明藥物組較代謝綜合征組M值明顯升高(P〈0. 05),F(xiàn)INS明顯降低 (P〈0. 05) 〇
[0294] 表7_3各組FBS、FINS及M值的比較(?趙)
[0295]
[0296] 注:與正常對(duì)照組比較,*P〈0. 05, #P〈0. 01 ;與代謝綜合征組比較,A P〈0. 05。
[0297] 3.各組血脂水平的比較
[0298] 見(jiàn)表7-4。代謝綜合征組較正常對(duì)照組TC、TG、LDL-C明顯增高,HDL-C無(wú)差異;本 發(fā)明藥物組較代謝綜合征組TC、TG、LDL-C明顯降低,對(duì)HDL-C改善不明顯。
[0299] 表 7-4 各組 TC、TG、LDL-C、HDL-C 之間的比較(?±s,mmol/L)
[0300]
[0301] 注:與正常對(duì)照組比較,*P〈0. 05, #P〈0. 01 ;與代謝綜合征組比較,A P〈0. 05。
[0302] 三、結(jié)論與討論
[0303] 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示,造模8周后,模型組較正常對(duì)照組胰島素敏感性指數(shù)(M值)明顯 降低,體質(zhì)量和內(nèi)臟脂肪明顯增加,血脂水平明顯升高,同時(shí)血清胰島素也有升高趨勢(shì);提 示以中心性肥胖和胰島素抵抗為中心,合并血壓增高、血脂紊亂、高胰島素血癥的代謝綜合 征模型成功建立。臨床研究及流行病調(diào)查發(fā)現(xiàn)肥胖、超重者常伴有胰島素抵抗和脂質(zhì)代謝 異常,脂肪組織在胰島素抵抗的發(fā)病機(jī)制中起重要作用。
[0304] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示本發(fā)明藥物可以明顯改善代謝綜合征組的胰島素敏感性有降低內(nèi) 臟脂肪和血清胰島素水平的趨勢(shì),明顯地改善了血清TC、TG、LDL-C水平。本發(fā)明藥物能夠 有效治療綜合治療代謝綜合征。
[0305] 實(shí)驗(yàn)八:本發(fā)明藥物治療乳腺增生的實(shí)驗(yàn)研究
[0306] 1材料與方法
[0307] I. 1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及飼料成年未孕的SD健康早大鼠70只,體重180~220g ;-級(jí)營(yíng)養(yǎng) 飼料80kg,均由南京中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。
[0308] 1. 2主要儀器及藥品
[0309] ACS :I80SE型化學(xué)發(fā)光免疫分析儀,美國(guó)CHIRON公司產(chǎn)品;XX3型血粘度電子自 動(dòng)計(jì)時(shí)儀,北京中勤世帝科學(xué)儀器有限公司提供;
[0310] 本發(fā)明藥物:參照本發(fā)明說(shuō)明書(shū)【具體實(shí)施方式】中的實(shí)施例1制備。
[0311] 對(duì)比藥物A :參照本發(fā)明說(shuō)明書(shū)【具體實(shí)施方式】中的實(shí)施例2制備。
[0312] 對(duì)比藥物B :參照本發(fā)明說(shuō)明書(shū)【具體實(shí)施方式】中的實(shí)施例3制備。
[0313] 對(duì)比藥物C :參照本發(fā)明說(shuō)明書(shū)【具體實(shí)施方式】中的實(shí)施例4制備。
[0314] 苯甲酸雌二醇(Estradiol,E2,以下簡(jiǎn)稱(chēng)E2)注射液,上海第九藥廠生產(chǎn),規(guī)格: 2mg ? mL1C3黃體酮(Pro-gesterone,Pt,以下簡(jiǎn)稱(chēng)Pt)注射液,上海第九藥廠生產(chǎn),規(guī)格: 20mg ? mL i。雌二醇及黃體酮測(cè)定試劑盒,為美國(guó)CHIRON公司配套產(chǎn)品;雌二醇(E2)、孕酮 (Pt)放射免疫分析測(cè)定盒,由天津德普生物技術(shù)和醫(yī)學(xué)產(chǎn)品有限公司提供Dako公司產(chǎn)品。
[0315]1. 3動(dòng)物分組及處理將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物購(gòu)回后正常飼養(yǎng)2w,按體重隨機(jī)分成6組(模型 組20只,其余每組10只):空白對(duì)照組(以下簡(jiǎn)稱(chēng)對(duì)照組),模型組,本發(fā)明藥物組、對(duì)比藥 物A組、對(duì)比藥物B組、對(duì)比藥物C組。模型組每只肌注E2(0. 5mg ? kg) ? d i,連續(xù)40d,繼 而改用肌注Pt(4mg *kg) \連續(xù)10d,觀察乳頭出現(xiàn)紅、腫和增大,并有部分乳暈出現(xiàn)時(shí), 處死5只,通過(guò)病理切片確認(rèn)乳腺增生模型復(fù)制成功。對(duì)照組每日肌注等容量生理鹽水, 至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。本發(fā)明藥物組、對(duì)比藥物A組、對(duì)比藥物B組、對(duì)比藥物C組于造模結(jié)束后按 400mg *kg 1分別灌服本發(fā)明藥物、對(duì)比藥物A、對(duì)比藥物B、對(duì)比藥物C,劑量為400mg *kg \ 至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。整個(gè)實(shí)驗(yàn)周期為80d。
[0316] 1. 4指標(biāo)檢測(cè)與觀察最后1次給藥24h后,動(dòng)物禁食12h,肉眼觀察各大鼠乳頭形 態(tài)變化。乙醚麻醉,主動(dòng)脈放血處死,按要求留取血液及雙側(cè)乳房,用XX3型血粘度電子自 動(dòng)計(jì)時(shí)儀檢測(cè)血液粘度,用壓積管法檢測(cè)紅細(xì)胞壓積;提取血漿,應(yīng)用美國(guó)CH-IRON公司 ACS :I80SE型化學(xué)發(fā)光免疫分析儀及其配套試劑檢測(cè)檢測(cè)血漿EjP Pt ;每只大鼠選擇最大 乳腺組織2個(gè),經(jīng)乳頭向基底部最大切面取材,常規(guī)石蠟切片,HE染色,低倍鏡計(jì)數(shù)每個(gè)小 葉腺泡數(shù),求其平均值,高倍鏡觀察導(dǎo)管上皮增生數(shù),小葉中腺泡數(shù);用免疫組化ABC法觀 察ER和PR的變化,ER,PR,工作濃度1 :200,并設(shè)陽(yáng)性和陰性對(duì)照。
[0317] 1. 5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)以均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差表示,各組顯著性檢驗(yàn)采用Dunnett' sT檢 驗(yàn)。
[0318] 2 結(jié)果
[0319] 2. 1病理形態(tài)學(xué)觀察對(duì)照組大鼠乳腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞排列規(guī)則,管腔無(wú)擴(kuò)張,小葉 較少,小葉中腺泡數(shù)3~4個(gè),核仁不明顯。肌注E 2、Pt造模后大鼠乳頭出現(xiàn)紅、腫和增大, 并有乳暈出現(xiàn),解剖可見(jiàn)后3對(duì)乳房乳腺組織連接成片,分界不清。病理切片可見(jiàn)各組大 鼠乳腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞增生明顯,局部呈乳頭狀或合體狀并層數(shù)增多,核仁明顯,管腔明顯擴(kuò) 張,內(nèi)有脫落上皮細(xì)胞及分泌物,小葉明顯增多,小葉中腺泡數(shù)增生明顯,間質(zhì)出血、水腫和 纖維組織增生,證明乳腺增生造模成功,增生類(lèi)型以囊性增生為主。與模型組比較,本發(fā)明 藥物混懸液組大體觀察的乳頭紅腫、乳腺增大和顯微觀察小葉、腺泡和導(dǎo)管的增生,均明顯 輕于造模組。各組乳腺導(dǎo)管上皮增生及小葉中腺泡數(shù)比較。(見(jiàn)表8-1)
[0320] 表8-1各組乳腺導(dǎo)管上皮增生及小葉中腺泡數(shù)比較(n = 10)
[0322] 注:與對(duì)照組相比 ##P〈0. 01,#P〈0. 05 ;與模型組相比 #P〈0. 01,*P〈0. 05。
[0323] 2. 2對(duì)大鼠血液流變學(xué)的影響(見(jiàn)表8-2)
[0324] 模型組全血粘度(比)、血漿粘度(比)、紅細(xì)胞壓積顯著高于對(duì)照組。本發(fā)明藥 物組血液流變學(xué)指標(biāo)有所改善,大部分指標(biāo)接近正常水平,優(yōu)于對(duì)比藥物A組、對(duì)比藥物B 組、對(duì)比藥物C組。
[0325] 表8-2本發(fā)明藥物對(duì)大鼠血液流變學(xué)的影響(n = 10)
[0326]
[0327] 注:與對(duì)照組相比,#P〈0. 01 ;與模型組相比,##P〈0. 01,#P〈0. 05。
[0328] 2. 3對(duì)大鼠血漿E2、Pt的影響(見(jiàn)表8-3)
[0329] 2. 4對(duì)大鼠乳腺組織ER、PR表達(dá)的影響陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)為乳腺導(dǎo)管和小葉上皮細(xì)胞 核和/或細(xì)胞漿著色時(shí)為陽(yáng)性。陽(yáng)性細(xì)胞率〈20%者為(_);陽(yáng)性細(xì)胞率不足20%,但局部 區(qū)域有少量較強(qiáng)著色的陽(yáng)性細(xì)胞者為(±);陽(yáng)性細(xì)胞率>20%者且陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)由少至多, 著色由淺至深為+,++,+++,++++,并分別計(jì)1、2、3、4、5、6分,積分愈高表明ER、PR含量愈 尚。(見(jiàn)表8-3)
[0330] 與對(duì)照組比較,模型組動(dòng)物血漿雌二醇(E2)含量顯著增加,孕酮(Pt)含量顯著降 低,ER、PR積分值有顯著差異,經(jīng)本發(fā)明藥物治療后,高劑量組雌二醇含量明顯降低、孕酮含 量明顯升高;ER、PR積分值與模型組相比也分別有顯著和極顯著性差異,且本發(fā)明藥物作 用效果優(yōu)于對(duì)比藥物A組、對(duì)比藥物B組、對(duì)比藥物C組。
[0331] 表8-3各組大鼠血漿E2、Pt和乳腺組織ER、PR積分比較(n = 10)
[0332]
[0333] 注:與對(duì)照組比較#P〈0. 01,*P〈0. 05 與模型組比較,##P〈0. 01,#P〈0. 05。
[0334] 3討論與結(jié)論
[0335] 乳腺增生具有明顯的性激素依賴(lài)性,模型組血漿E2水平顯著高于對(duì)照組,本發(fā)明 藥物組血漿EyK平顯著低于模型組,Pt水平顯著高于模型組,乳腺組織ER、PR含量明顯低 于模型組,表明本發(fā)明藥物的治療作用與改善機(jī)體內(nèi)分泌環(huán)境,同時(shí)降低大鼠乳腺組織ER、 PR含量,從而減弱£ 2對(duì)靶細(xì)胞的生物學(xué)效應(yīng)有關(guān)。
[0336] 實(shí)驗(yàn)九:本發(fā)明藥物抗抑郁作用實(shí)驗(yàn)研究
[0337] 1材料與方法
[0338] I. 1 藥物
[0339] 本發(fā)明藥物:參照本發(fā)明說(shuō)明書(shū)【具體實(shí)施方式】中的實(shí)施例1制備。
[0340] 對(duì)比藥物A :參照本發(fā)明說(shuō)明書(shū)【具體實(shí)施方式】中的實(shí)施例2制備。
[0341] 對(duì)比藥物B :參照本發(fā)明說(shuō)明書(shū)【具體實(shí)施方式】中的實(shí)施例3制備。
[0342] 對(duì)比藥物C :參照本發(fā)明說(shuō)明書(shū)【具體實(shí)施方式】中的實(shí)施例4制備。
[0343] 1. 2 動(dòng)物
[0344] 健康SD大鼠,雄性,體重180~200g,健康ICR小鼠,雌雄不限,體重18~22g,南 京中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。
[0345] 1. 3藥品及試劑
[0346] 鹽酸文拉法辛片(常州四藥制藥有限公司,國(guó)藥準(zhǔn)字H20110150),給藥劑量 6. 25mg/Kg,為人臨床用量L 25mg/Kg的5倍;利血平片(上海信誼藥廠有限公司,國(guó)藥準(zhǔn)字 H31021148)。
[0347] L 4 儀器
[0348] 有機(jī)玻璃游泳槽,高40cm,長(zhǎng)60cm,寬30cm,南京中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供; XZ-4小鼠自主活動(dòng)計(jì)數(shù)器,南京中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。
[0349] L 5 方法
[0350] 1. 5. 1大鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn):健康SD大鼠60只,雄性,按體重隨機(jī)分成6組,每組10 只,即模型對(duì)照組,陽(yáng)性對(duì)照鹽酸文拉法辛片6. 25mg/Kg劑量組及本發(fā)明藥物20. 00生藥/ Kg劑量組,對(duì)比藥物A 20. 00生藥/Kg劑量組,對(duì)比藥物B20. 00生藥/Kg劑量組,對(duì)比藥物 C 20. 00生藥/Kg劑量組,模型對(duì)照組給予同體積去離子水。大鼠灌胃給藥,給藥1次/天, 連續(xù)10天。第9天,于給藥后30min將大鼠單個(gè)放入有機(jī)玻璃游泳槽中,水深為15cm,水溫 25°C,強(qiáng)迫其游泳,15min后取出動(dòng)物,曬干,然后放回籠中。于末次給藥30min后,將大鼠放 入游泳槽中,記錄5min內(nèi)大鼠保持不動(dòng)狀態(tài)的時(shí)間,即大鼠微蜷軀體,但保持垂直姿勢(shì),鼻 孔露出水面的時(shí)間。
[0351] 1. 5. 2小鼠尾懸掛實(shí)驗(yàn):健康ICR小鼠60只,雌、雄各半,按體重隨機(jī)分成6組,每 組10只,即模型對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照鹽酸文拉法辛片6. 25mg/Kg劑量組及本發(fā)明藥物20. 00 生藥/Kg劑量組,對(duì)比藥物A20. 00生藥/Kg劑量組,對(duì)比藥物B 20. 00生藥/Kg劑量組,對(duì) 比藥物C 20. 00生藥/Kg劑量組,模型對(duì)照組給予同體積去離子水。小鼠灌胃給藥,每日1 次,連續(xù)10天。于末次給藥30min后,將小鼠尾(距尾尖Icm處)用膠布粘在高出桌面3cm 的木條上,記錄5min內(nèi)動(dòng)物的不動(dòng)時(shí)間。
[0352] 1. 5. 3利血平拮抗實(shí)驗(yàn):健康小鼠120只,雌、雄各半,按體重隨機(jī)分成6組,每組 20只,分組及劑量同上,于末次給藥30min后,小鼠尾靜脈注射利血平2mg/Kg,于注射Ih 后觀察小鼠眼瞼下垂的動(dòng)物數(shù)、身體僵直保持肌攣狀態(tài)不動(dòng)的動(dòng)物數(shù),并計(jì)算其發(fā)生率,觀 察并記錄注射利血平前后體溫變化。
[0353] 1. 5. 4自主活動(dòng)實(shí)驗(yàn):健康小鼠60只,雌雄各半,按體重隨機(jī)分成6組,每組10只, 即模型對(duì)照組、鹽酸文拉法辛片組及本發(fā)明藥物組,對(duì)比藥物A組,對(duì)比藥物B組,對(duì)比藥物 C組,給藥劑量同前。小鼠灌胃給藥,每日1次,連續(xù)10天。于末次給藥后30min,以XZ-4 小鼠自主活動(dòng)計(jì)數(shù)器記錄各組小鼠的自主活動(dòng)情況,記錄5min,測(cè)定2次,取其平均值。
[0354] 1. 6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
[0355] 應(yīng)用SPSS10. 0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,所有計(jì)量資料以均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)(S±s)差表 示,組間比較采用t檢驗(yàn),計(jì)數(shù)資料采用X 2檢驗(yàn)。
[0356] 2 結(jié)果
[0357] 2. 1大鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)
[0358] 強(qiáng)迫游泳模型中出現(xiàn)的不動(dòng)狀態(tài)也反映了動(dòng)物的絕望行為,可以模擬人類(lèi)的抑郁 狀態(tài)。與模型對(duì)照組比較,本發(fā)明藥物組可明顯對(duì)抗"失望",縮短游泳不動(dòng)時(shí)間(P〈〇. 05), 而對(duì)比藥物A組至對(duì)比藥物C組的作用效果則不明顯。見(jiàn)表9-1。
[0359] 表9-1本發(fā)明藥物對(duì)大鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)的影響(
[0360]
[0361] 注:與模型對(duì)照組比較,*P〈0. 05
[0362] 2. 2小鼠尾懸掛實(shí)驗(yàn)
[0363] 小鼠在懸尾模型中出現(xiàn)的不動(dòng)狀態(tài)反映了動(dòng)物的絕望行為。與模型對(duì)照組比較, 本發(fā)明藥物組可縮短小鼠懸尾的不動(dòng)時(shí)間(P〈〇. 05),而對(duì)比藥物A組至對(duì)比藥物組合物D 組的作用效果則不明顯。提示本發(fā)明藥物具有減輕小鼠絕望行為、抗抑郁作用。見(jiàn)表9-2。
[0364] 表9-2本發(fā)明藥物對(duì)小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)的作用(I±s)
[0365]
[0366] 注:與模型對(duì)照組比較,*P〈0. 05, **P〈0. 01
[0367] 2. 3利血平拮抗實(shí)驗(yàn)
[0368] 與模型對(duì)照組比較,本發(fā)明藥物組可明顯降低利血平引起小鼠眼瞼下垂及小鼠運(yùn) 動(dòng)不能發(fā)生率(P〈〇. 05),可減輕注射利血平后體溫降低的程度(P〈0. 05);而對(duì)比藥物A組 至對(duì)比藥物組合物D組的作用效果則不明顯。見(jiàn)表9-3~表9-5。
[0369] 表9-3本發(fā)明藥物對(duì)利血平引起小鼠眼瞼下垂作用的影響( 5±s)
[0370]
[0374] 注:與模型對(duì)照組比較,*P〈0. 05, #P〈0. 01
[0375] 表9-5本發(fā)明藥物對(duì)利血平引起小鼠體溫降低的影響G±S)
[0376]
[0377] 注:與模型對(duì)照組比較,*P〈0. 05
[0378] 2.4自主活動(dòng)實(shí)驗(yàn)
[0379] 未見(jiàn)本發(fā)明藥物各劑量組對(duì)小鼠自主活動(dòng)有顯著影響。見(jiàn)表9-6。
[0380] 表9-6本發(fā)明藥物對(duì)小鼠自主活動(dòng)的影響(I±S )
[0381]
[0382] 注:與模型對(duì)照組比較,#P〈0. 01
[0383] 3.結(jié)論
[0384] 從動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果看,本發(fā)明藥物可明顯對(duì)抗"失望",縮短游泳不動(dòng)時(shí)間;可縮短小 鼠懸尾的不動(dòng)時(shí)間;可降低利血平引起小鼠眼瞼下垂及小鼠僵直狀態(tài)發(fā)生率,減輕注射利 血平后體溫降低的程度;對(duì)正常小鼠自主活動(dòng)無(wú)影響。由此可見(jiàn),本發(fā)明藥物對(duì)行為應(yīng)激 模型和藥物誘發(fā)的抑郁模型有一定的抗抑郁作用,同時(shí)對(duì)正常小鼠的自主活動(dòng)沒(méi)有顯著影 響,此點(diǎn)與陽(yáng)性藥物比較具有一定的區(qū)別。
[0385] 綜上,本發(fā)明藥物具有明顯的抗抑郁作用,并且優(yōu)于對(duì)比藥物A、對(duì)比藥物B、對(duì)比 藥物C,說(shuō)明本發(fā)明藥物中各藥味之間的配伍精良,缺一不可,各藥味之間的組合產(chǎn)生了明 顯的協(xié)同增效作用,具有開(kāi)發(fā)成一個(gè)抗心肌缺血抗抑郁的中藥新藥的前景。
[0386] 實(shí)驗(yàn)十:本發(fā)明藥物抗衰老的實(shí)驗(yàn)研究
[0387] 1實(shí)驗(yàn)材料
[0388] I. 1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:純系昆明種小鼠84只,體重20±2g,由南京中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中 心提供。
[0389] L 2實(shí)驗(yàn)藥物
[0390] L 2. 1 藥物
[0391] 本發(fā)明藥物:參照本發(fā)明說(shuō)明書(shū)【具體實(shí)施方式】中的實(shí)施例1制備。
[0392] 對(duì)比藥物A :參照本發(fā)明說(shuō)明書(shū)【具體實(shí)施方式】中的實(shí)施例2制備。
[0393] 對(duì)比藥物B :參照本發(fā)明說(shuō)明書(shū)【具體實(shí)施方式】中的實(shí)施例3制備。
[0394] 對(duì)比藥物C :參照本發(fā)明說(shuō)明書(shū)【具體實(shí)施方式】中的實(shí)施例4制備。
[0395] 陽(yáng)性藥:六味地黃丸,北京同仁堂生產(chǎn)。
[0396] 1. 2. 2D-半乳糖(D-半乳糖上海試劑二廠):用去離子水配成濃度為5%的D-gal 溶液,放入密封瓶?jī)?nèi)高壓滅菌后,4°C冰箱保存,備用。
[0397] 1. 3主要試劑丙二醛(MDA)試劑盒、脂褐質(zhì)(LF)試劑盒、超氧化物歧化酶(SOD)試 劑盒、過(guò)氧化氫酶(CAT)試劑盒,均產(chǎn)于南京建成生物工程研究所。
[0398] 1. 4主要儀器冷凍離心機(jī)、恒溫水浴堝、