，威靈仙4份， 桂枝5份，制川烏2份。
[0092] 分別按劑量組處方比例稱取藥材，加適量水煎煮1~3小時(shí)，過(guò)濾，收集濾液，減壓 濃縮至適當(dāng)體積備用。
[0093] 1. 3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
[0094] (1)家兔：體重2. 0~2. 7kg，雄性。
[0095] (2)KM 小鼠，體重 18. 5 ~22. 5g。
[0096] 1. 4實(shí)驗(yàn)儀器、試劑
[0097] (1)酶標(biāo)儀、電子天平等
[0098] (2)青霉素、鏈霉素、生理鹽水、消毒酒精等。
[0099] 1. 5陽(yáng)性藥
[0100] ⑴抗骨增生片；⑵嗎啡
[0101] 2?藥效研究
[0102] 2. 1藥物非臨床試驗(yàn)
[0103] 【對(duì)家兔實(shí)驗(yàn)性膝關(guān)節(jié)增生治療作用】
[0104] 取家兔40只，以戊巴比妥鈉30mg/kg耳緣靜脈注射麻醉，固定于手術(shù)臺(tái)上，選左膝 在無(wú)菌條件下施行手術(shù)，于股骨上段綁扎止血帶，切除內(nèi)側(cè)半月板并切斷內(nèi)側(cè)副韌帶后，逐 層縫合切口，放松止血帶。手術(shù)結(jié)束后，家兔分籠飼養(yǎng)，并連續(xù)3天肌注青霉素鈉40萬(wàn)U/ 只，防止傷口感染。同時(shí)將已造模的家兔按體重隨機(jī)分為7組，每組8只，分別作為：模型 組、陽(yáng)性組、藥物劑量①~⑤組。另取8只作為假手術(shù)組（只做假手術(shù)創(chuàng)傷）。藥物各劑量 組按27. 44g處方生藥/kg劑量灌胃給藥，陽(yáng)性組按0. 50g/kg劑量腹腔注射給予嗎啡生理 鹽水溶液，正常組和模型組灌胃給予純凈水，給藥體積均為250ml/kg，連續(xù)2周。
[0105] 檢測(cè)指標(biāo)：于末次給藥后2h，處死動(dòng)物，立即解剖膝關(guān)節(jié)，置10%甲醛溶液中固 定、石臘包埋、切片、染色，光鏡下觀察軟骨改變情況。將軟骨增生程度按表1評(píng)分標(biāo)準(zhǔn) 進(jìn)行打分，評(píng)價(jià)損傷程度。
[0106] 表1軟骨增生成都評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)
[0108] 【對(duì)醋酸致小鼠扭體反應(yīng)治療作用】
[0109] 取昆明種小鼠50只，雌雄各半，隨機(jī)等分為5組，每組10只，分別作為：按體重隨 機(jī)分為7組，每組10只，分別作為：對(duì)照組、陽(yáng)性組、藥物劑量①~⑤組。藥物各劑量組分別 按101. 92g處方生藥/kg灌胃給藥，陽(yáng)性組按2. 5mg/kg劑量腹腔注射給予嗎啡生理鹽水溶 液，對(duì)照組灌胃給予純凈水，體積均為20ml/kg，每日一次，連續(xù)7d。于末次給藥后lh，每只 小鼠腹腔注射〇. 6%冰醋酸0. lml/10g，記錄注射后5~15min內(nèi)出現(xiàn)的扭體反應(yīng)次數(shù)。
[0110] 【對(duì)小鼠熱刺激所致疼痛治療作用】
[0111] 選取昆明種雌性小鼠（痛閾值<5s或>30s者或易跳躍者剔除）70只，隨機(jī)等分為 7組，劑量及時(shí)間、體積同上。于末次給藥后2測(cè)定各實(shí)驗(yàn)組小鼠痛閾值，以動(dòng)物投入熱板至 出現(xiàn)舔后足的時(shí)間為該鼠的痛閾值，超過(guò)60s的以60s計(jì)。
[0112] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0113] 【對(duì)家兔實(shí)驗(yàn)性膝關(guān)節(jié)增生治療作用】
[0114] 由圖1可知，與假手術(shù)組比較，模型組家兔膝關(guān)節(jié)軟骨骨質(zhì)增生分?jǐn)?shù)極顯著增大 (P〈0. 05);與模型組比較，藥物各劑量組家兔膝關(guān)節(jié)軟骨增生分?jǐn)?shù)有顯著減小（P〈0. 05)， 其中劑量③組有極顯著減?。≒〈〇. 01);與陽(yáng)性組比較，劑量②、④組家兔膝關(guān)節(jié)軟骨增生 分?jǐn)?shù)有顯著減?。≒〈〇. 05)，劑量③組有極顯著減小（P〈0. 01)。結(jié)果表明，藥物對(duì)家兔骨質(zhì) 增生具有良好的抑制作用，其中劑量③組有最佳治療效果。
[0115] 【對(duì)醋酸致小鼠扭體反應(yīng)治療作用】
[0116] 由圖2可知，與對(duì)照組比較，藥物各劑量組小鼠扭體次數(shù)均有顯著減少（P〈0. 05)， 其中劑量③組有極顯著減?。╬〈0. 01);與陽(yáng)性組比較，劑量③組有顯著減少（p〈0. 05)。結(jié) 果表明，藥物對(duì)醋酸致小鼠扭體反應(yīng)具有良好的對(duì)抗作用。
[0117] 【對(duì)小鼠熱刺激所致疼痛治療作用】
[0118] 由圖3可知，與對(duì)照組比較，藥物各劑量組小鼠痛閾值均有顯著增大（P〈0. 05)，其 中劑量③~⑤組有極顯著增大（P〈〇. 01)。結(jié)果表明，藥物可顯著提高小鼠痛閾值。
[0119] 【非臨床實(shí)驗(yàn)結(jié)論】
[0120] 本發(fā)明藥物組合物具有良好的抗骨質(zhì)增生和鎮(zhèn)痛作用。
[0121] 2. 2藥物臨床試驗(yàn)
[0122] 2. 2. 1臨床試驗(yàn)一般資料
[0123] 選自2012年3月~2014年3月在本發(fā)明藥物試用醫(yī)院進(jìn)行治療的628例骨質(zhì)增 患者生。其中頸椎骨質(zhì)增生223例，腰椎骨質(zhì)增生（含椎間盤突出）197例，膝關(guān)節(jié)骨質(zhì)增 生162例，其他類骨質(zhì)增生46例，其中男性患者276人，女性患者352人。年齡在35~65 歲之間，平均年齡為41歲。
[0124] 2. 2. 2治療方法
[0125] 試驗(yàn)藥物：防風(fēng)15g，五靈脂IOg,當(dāng)歸12g，赤巧20g，獨(dú)活15g，防己IOg,桑寄生 15g，熟地黃20g，川彎12g，制草烏15g，牛膝15g，元胡15g，紅花IOg,威靈仙15g，桂枝IOg, 制川烏15g。
[0126] 將這628例患者隨機(jī)分為4組，每組157例。第一組為本發(fā)明組合物高劑量組；第 二組為本發(fā)明組合物中劑量組；第三組為本發(fā)明組合物低劑量組；第四組為西藥組。中藥 煎煮及服藥方法，按處方量藥材加適量水煎煮1. 5小時(shí)后于飯前半小時(shí)服用，按此方法煎 煮和服用，一日三次，每副藥連續(xù)服用2天，連續(xù)2周。西藥治療組的157例患者采用口服 布洛芬30mg/次，3次/d ;服用維生素B625mg/次，3次/d。臨床治療為2周。分析4組患 者的治療后的臨床療效。
[0127] 2. 2. 3療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)
[0128] 依照我國(guó)中醫(yī)病證診斷療效標(biāo)準(zhǔn)關(guān)于腰椎骨質(zhì)增生的療效標(biāo)準(zhǔn)。治愈：疼痛消失， 關(guān)節(jié)活動(dòng)正常。顯效：疼痛有所減輕，關(guān)節(jié)活動(dòng)基本正常。有效：疼痛略微有所減輕，關(guān)節(jié)活 動(dòng)稍有好轉(zhuǎn)。無(wú)效疼痛無(wú)變化，關(guān)節(jié)功能無(wú)改變。
[0129] 2. 2. 4治療結(jié)果
[0130] 結(jié)果見(jiàn)下表2:
[0131] 表2各實(shí)驗(yàn)組治療效果比較
[0133] 結(jié)果顯示，本發(fā)明復(fù)方對(duì)各種類型的骨質(zhì)增生具有良好的治療作用，總有效率為 100%，且在所有患者治療期間，未發(fā)現(xiàn)明顯不良反應(yīng)，表明本發(fā)明藥物安全有效。
[0134] 【臨床實(shí)驗(yàn)結(jié)論】
[0135] 本發(fā)明藥物對(duì)臨床常見(jiàn)骨質(zhì)增生，如頸椎骨質(zhì)增生、腰椎骨質(zhì)增生（含椎間盤突 出）、膝關(guān)節(jié)骨質(zhì)增生等具有良好的治療作用，且安全無(wú)毒副作用。
[0136] 試驗(yàn)例2本發(fā)明顆粒劑的活性研究
[0137] 1 ?材料與方法
[0138] I. 1藥物及其處方組成
[0139] 防風(fēng)4~60g，五靈脂2~45g，當(dāng)歸3~36g，赤巧4~60g，獨(dú)活2~60g，防己 3~50g，桑寄生3~50g，熟地黃5~60g，川彎3~48g，制草烏2~30g，牛膝3~60g，兀 胡2~45g，紅花2~40g，威靈仙4~50g，桂枝5~60g，制川烏2~30g。
[0140] 1. 2顆粒劑的制備方法
[0141] 1.2. 1中間體制備
[0142] 稱取防風(fēng)15g，五靈脂IOg,當(dāng)歸12g，赤巧20g，獨(dú)活15g，防己IOg,桑寄生15g，熟 地黃20g，川芎12g，制草烏15g，牛膝15g，元胡15g，紅花10g，威靈仙15g，桂枝10g，制川烏 15g，加處方藥材總量的6~20倍量水，加適量水煎煮1~4次，每次1~3小時(shí)，過(guò)濾，收集 濾液，減壓濃縮至適當(dāng)密度，得浸膏液，然后所得浸膏液低溫真空干燥，粉碎，得干浸膏粉。
[0143] 1.2. 2顆粒成型
[0144] 將1. 2. 1中所得浸膏粉按以下質(zhì)量配比濕法制粒：
[0145] 填充劑：浸膏粉=20 %~210%
[0146] 粘合劑：浸膏粉=1 %~12%
[0147] 潤(rùn)濕劑：浸膏粉=40 %~120%
[0148] 其中填充劑包括淀粉、乳糖、甘露醇、微晶纖維素等；粘合劑包括聚乙烯基吡咯烷 酮（PVP)、羥丙基甲基纖維素（HPMC)、羧甲纖維素鈉（CMC-Na)等；潤(rùn)濕劑包括蒸餾水、無(wú)水 乙醇、90%~95%濃度的乙醇等。分別稱取處方量浸膏粉和輔料，混合均勻，加入粘合劑的 乙醇溶液，攪拌制軟材，16目篩制粒，所得顆粒置于干燥箱中鼓風(fēng)干燥，16目篩整粒，過(guò)60 目篩，去掉細(xì)粉，得顆粒劑。
[0149] 2藥效試驗(yàn)
[0150] 2.1非臨床實(shí)驗(yàn)