離子配位沉淀法純化蘋果多酚的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種Mn+離子配位沉淀法純化蘋果多酚的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 蘋果多酸（Apple Polyphenols，AP)是一種天然活性多酸，也是一種天然抗氧化 劑，屬于植物多酚的一種，AP存在于蘋果的各個(gè)部位中，它不是一種單一的物質(zhì)，而是蘋果 內(nèi)所含有的所有酚類物質(zhì)的總稱。天然活性多酚的純化方法主要有：溶劑萃取法、樹脂吸 附法、柱層析法、膜分離技術(shù)、高速逆流色譜法等。蘋果多酚作為一種天然活性多酚，它的純 化方法也離不開上述幾種。研究表明實(shí)驗(yàn)室針對(duì)于蘋果多酚的純化，大多都先采用不同的 方法進(jìn)行初步提取，然后在得到的蘋果多酚粗提液的基礎(chǔ)上進(jìn)行進(jìn)一步純化，例如首先通 過(guò)超聲波提取法初步提取國(guó)光蘋果中的蘋果多酚，然后通過(guò)研究AB-8大孔樹脂對(duì)蘋果多 酚的吸附特性，找出適合于蘋果多酚分離純化的條件（金瑩，2006)。通過(guò)四元二次通用旋 轉(zhuǎn)設(shè)計(jì)輔助微波法確定了蘋果渣中多酚的最佳提取工藝；針對(duì)蘋果多酚粗提物，利用大孔 吸附樹脂S印hadex LH-20脂對(duì)蘋果多酚進(jìn)行純化（郭娟，2006)。應(yīng)用超聲波輔助乙醇初 提蘋果皮渣多酚然后通過(guò)選取NKA-9大孔樹脂法繼續(xù)純化得到純度為72%蘋果皮渣多酚 粉末（李珍，2014)。同樣通過(guò)對(duì)大孔樹脂靜態(tài)吸附和解析綜合研究，在16種樹脂中選擇 NKA-9大孔樹脂來(lái)純化蘋果多酚粗提液，近年來(lái)脂吸附純化法慢慢開始走出實(shí)驗(yàn)室朝著工 業(yè)化進(jìn)行發(fā)展（王育紅，2007)。此外在其他技術(shù)的應(yīng)用上，利用膜分離技術(shù)研究了煙臺(tái)紅 富士蘋果多酚氧化酶的分離純化條件（劉芳，2015)。研究了固相萃取法，從四種固相萃取 小柱中篩選出分離效果較好的Waters Oasis HLB固相萃取小柱對(duì)蘋果多酚進(jìn)行純化（賀 金娜，2014)。樹脂吸附法及柱層析吸附分離法因材料價(jià)格高，材料再生存在一定問(wèn)題，因此 鮮少應(yīng)用于工業(yè)化生產(chǎn)；膜分離技術(shù)和高速逆流色譜法等新方法近年仍處于實(shí)驗(yàn)室研究階 段，實(shí)現(xiàn)工業(yè)化尚有一定困難。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明要解決現(xiàn)有純化蘋果多酚的方法存在成本高、蘋果多酚提取率低的問(wèn)題， 而提供了一種M n+離子配位沉淀法純化蘋果多酚的方法。
[0004] 本發(fā)明一種Mn+離子配位沉淀法純化蘋果多酚的方法是通過(guò)以下步驟進(jìn)行的：
[0005] -、原料預(yù)處理：將新鮮的蘋果切成Im3~3m3的小塊，在溫度為70°C~80°C的水 中漂燙8s~IOs后破碎得到勻漿；
[0006] 二、微波輔助粗提?。簩⒉襟E一得到的勻漿加入到質(zhì)量濃度為50%的乙醇中，然 后在微波功率為640W的條件下進(jìn)行粗提取，粗提取的時(shí)間為70s，得到蘋果多酚粗提取液； 所述步驟一得到的勾衆(zhòng)的質(zhì)量與質(zhì)量濃度為50%的乙醇的體積比為lg: 14mL ;所述蘋果多 酚粗提取液中蘋果多酚的含量為8. 93mg/g~9. 92mg/g ;
[0007] 三、將步驟二得到的蘋果多酚粗提取液采用質(zhì)量濃度為1%~5%的氨水將pH值 從3. 8~4. 5調(diào)整至5~9,得到調(diào)節(jié)后的蘋果多酚粗提取液；向調(diào)節(jié)后的蘋果多酚粗提取 液中投加Mn+離子，然后在離心轉(zhuǎn)速為500rpm~4000rpm、離心時(shí)間為IOmin~70min和pH 值為5~9的條件下進(jìn)行離心，靜置lOmin，得到純化后的蘋果多酚沉淀物；所述Mn+離子 由Mn+金屬鹽提供的；所述M n+金屬鹽的質(zhì)量與步驟二得到的蘋果多酚粗提取液的體積比為 Ig:(35 ~500)mL ;
[0008] 四、沉淀物轉(zhuǎn)溶提?。簩⒉襟E三得到的純化后的蘋果多酚沉淀物加入到濃度為 lmol/L的鹽酸中至沉淀物完全溶解，得到轉(zhuǎn)溶后的蘋果多酚樣液，然后再向轉(zhuǎn)溶后的蘋果 多酚樣液中加入乙酸乙酯萃取，冷凍干燥得到棕紅色粉末狀蘋果多酚；所述轉(zhuǎn)溶后的蘋果 多酚樣液與乙酸乙酯的體積比為1:1。
[0009] 本發(fā)明的有益效果在于：
[0010] 本發(fā)明采用金屬離子純化粗提液中的蘋果多酚，首先環(huán)保節(jié)能，降低成本；其次， 方法安全快捷可操控；更重要的是，該方法得到的蘋果多酚沉淀率高，純化后所得到的蘋果 多酚色澤棕紅，略帶果香。蘋果多酚沉淀率可達(dá)93. 98%。
【附圖說(shuō)明】
[0011] 圖1為不同ZnCl3添加量與蘋果多酚沉淀率的關(guān)系曲線；
[0012] 圖2為不同pH值與蘋果多酚沉淀率的關(guān)系曲線；
[0013] 圖3為不同離心轉(zhuǎn)速與蘋果多酚沉淀率的關(guān)系曲線；
[0014] 圖4不同離心時(shí)間與蘋果多酚沉淀率的關(guān)系曲線。
【具體實(shí)施方式】
【具體實(shí)施方式】 [0015] 一：本實(shí)施方式一種Mn+離子配位沉淀法純化蘋果多酚的方法是通 過(guò)以下步驟進(jìn)行的：
[0016] -、原料預(yù)處理：將新鮮的蘋果切成Im3~3m3的小塊，在溫度為70°C~80°C的水 中漂燙8s~IOs后破碎得到勻漿；
[0017] 二、微波輔助粗提?。簩⒉襟E一得到的勻漿加入到質(zhì)量濃度為50%的乙醇中，然 后在微波功率為640W的條件下進(jìn)行粗提取，粗提取的時(shí)間為70s，得到蘋果多酚粗提取液； 所述步驟一得到的勾衆(zhòng)的質(zhì)量與質(zhì)量濃度為50%的乙醇的體積比為lg: 14mL ;所述蘋果多 酚粗提取液中蘋果多酚的含量為8. 93mg/g~9. 92mg/g ;
[0018] 三、將步驟二得到的蘋果多酚粗提取液采用質(zhì)量濃度為1%~5%的氨水將pH值 從3. 8~4. 5調(diào)整至5~9,得到調(diào)節(jié)后的蘋果多酚粗提取液；向調(diào)節(jié)后的蘋果多酚粗提取 液中投加Mn+離子，然后在離心轉(zhuǎn)速為500rpm~4000rpm、離心時(shí)間為IOmin~70min和pH 值為5~9的條件下進(jìn)行離心，靜置lOmin，得到純化后的蘋果多酚沉淀物；所述M n+離子 由Mn+金屬鹽提供的；所述Mn+金屬鹽的質(zhì)量與步驟二得到的蘋果多酚粗提取液的體積比為 Ig:(35 ~500)mL ;
[0019] 四、沉淀物轉(zhuǎn)溶提?。簩⒉襟E三得到的純化后的蘋果多酚沉淀物加入到濃度為 lmol/L的鹽酸中至沉淀物完全溶解，得到轉(zhuǎn)溶后的蘋果多酚樣液，然后再向轉(zhuǎn)溶后的蘋果 多酚樣液中加入乙酸乙酯萃取，冷凍干燥得到棕紅色粉末狀蘋果多酚；所述轉(zhuǎn)溶后的蘋果 多酚樣液與乙酸乙酯的體積比為1:1。
[0020] 本實(shí)施方式步驟一中所述新鮮的蘋果為市售的紅富士，因?yàn)樘O果多酚存在于蘋果 中的各個(gè)部位，紅富士蘋果體積大，果肉多，果皮厚，其蘋果多酚含量高于其他常見蘋果種 類。
[0021] 本實(shí)施方式步驟二中所述蘋果多酚粗提取液中蘋果多酚的含量是通過(guò)福林酚 法進(jìn)行測(cè)量的；其方法如下：首先以沒(méi)食子酸（C 7H6O5)標(biāo)準(zhǔn)品為對(duì)照品，稱取IOmg C7H6O5 用蒸餾水定容至IOmL容量瓶；其次分別吸取0mL、0. lmL、0. 2mL、0. 3mL、0. 4mL、0. 5mL和 0. 6mLC7H605溶液定容到IOmL容量瓶，所得溶液的質(zhì)量濃度分別為10mg/L、20mg/L、30mg/L、 40mg/L、50mg/L和60mg/L ;然后取37. 5g無(wú)水Na2CO3用250mL溫蒸餾水溶解于500mL燒杯 中，用玻璃棒不停攪拌，冷卻后定容至500mL容量瓶；
[0022] 線性回歸方程：再次分別吸取ImL不同質(zhì)量濃度的(：71160 5溶液至IOmL容量瓶?jī)?nèi)， 依次加入5mL蒸餾水和ImL福林-式劑，4min后加入3mL 150g/L的Na2CO3溶液，顯色2h， 并用紫外分光光度計(jì)測(cè)定A765nni的值。最后進(jìn)行3組平行試驗(yàn)。以沒(méi)食子酸含量為橫坐標(biāo)， 吸光度為縱坐標(biāo)，得回歸方程為Y = 0. 0126X-0. 0236, r2= 0. 9952,由此可知橫縱坐標(biāo)在一 定范圍內(nèi)線性相關(guān)且相關(guān)性顯著。所述蘋果多酚粗提取液中蘋果多酚的含量為T，其計(jì)算公
式中：C為沒(méi)食子酸的含量，單位為y g/mL ;V為濃度為50%的 乙醇，單位為mL ;M為步驟一得到的勻漿質(zhì)量，單位為g ;N為稀釋倍數(shù)，是稀釋前溶液濃度， 除以稀釋后的溶液濃度所得的商。
[0023] 本實(shí)施方式步驟四中所述棕紅色粉末狀蘋果多酚的沉淀率的計(jì)算公式為：
;式中
1為沉淀前AP浸提液體積（mL)，V 2為調(diào)PH之后，沉淀浸提 液的體積（mL) ;A#沉淀前AP浸提液測(cè)得的吸光度；A AAP沉淀后上清液測(cè)得的吸光度。
[0024] 本實(shí)施方式步驟三中調(diào)節(jié)pH時(shí)所用的試劑是氨水，氨水濃度不可太高，因?yàn)椴襟E 二得到的蘋果多酚粗提取液本身PH值3. 8~4. 5,過(guò)高濃度氨水不易調(diào)節(jié)步驟二得到的蘋 果多酚粗提取液PH值，所以氨水濃度控制在1 %~5%之間便于調(diào)節(jié)步驟二得到的蘋果多 酚粗提取液PH值。
【具體實(shí)施方式】 [0025] 二：本實(shí)施方式與一不同的是：步驟三中所述Mn+離子 為Ca 2+離子、Mg 2+離子、Ba 2+離子、Zn 3+離子或Fe 3+離子。