①對照品溶液的制備：分別精密稱取對照品木犀草素-7-ff-D-葡萄糖醛酸苷、芹菜 素-7-ff-D-葡萄糖醛酸苷、迷迭香酸、香葉木素-7-ff-D-葡萄糖醛酸苷、田薊苷和刺 槐素-7-0-0-D-葡萄糖醛酸苷適量，分別置25mL的量瓶中，分別加入體積百分比為70%乙 醇水溶液配制成木犀草素葡萄糖醛酸苷159. 2ug/mL、芹菜素葡萄 糖醛酸苷116. 5ug/mL、迷迭香酸218. 4ug/mL、香葉木素-7-(9-f-D-葡萄糖醛酸苷139. 2ug/ mL、田薊苷200. 4ug/mL和刺槐素-7-f々-D-葡萄糖醛酸苷234ug/mL的對照品溶液。
[0040] _供試品溶液：精密稱取本發(fā)明香青蘭提取物約3. 0g置100mL量瓶中，加體積百 分比為70%的乙醇水溶液適量，超聲處理（功率40W，頻率100kHz) 30min使其完全溶解，繼 續(xù)加入體積百分比為70%的乙醇水溶液定容至刻度，搖勻，經(jīng)0. 45μm微孔濾膜濾過，取續(xù) 濾液作為供試品溶液。
[0041]義色譜條件：色譜柱：Shim_pack0DS(5Mm，250X4.6mm)，流動相為乙睛（Α)-〇· 5% 甲水酸溶液（Β)梯度洗脫（0~30min，18%A;30~60min，18%~30%Α;60~70min， 30%A);流速為1.0mL.minS檢測波長324nm;柱溫：35°C。在上述色譜條件下，取混合對 照品溶液及供試品溶液各10μL分別注入液相色譜儀，測定，即得。
[0042] (2)香青蘭提取物中總黃酮的含量測定：采用紫外比色法，以田薊苷為對照品，測 定香青蘭提取物中總黃酮含量。
[0043] 對照品洛液的制備： 精密量取已配制好的200. 4μg/mL田薊苷對照品儲備液lmL，置于25mL量瓶中，用甲醇 定容至刻度，搖勻，備用。
[0044] 供試品溶液的制備： 稱本發(fā)明取香青蘭提取物1. 〇g，置于25mL量瓶中，甲醇超聲溶解30min，放涼，用甲醇 定容至刻度，搖勻，備用。
[0045] 將以上配制好的溶液以甲醇為空白溶液，采用紫外分光光度計分別于200nm至 700nm的波長范圍進(jìn)行掃描，確定測定最大吸收波長。結(jié)果表明，本發(fā)明香青蘭提取物的總 黃酮和田薊苷在324nm有最大吸收。
[0046] 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備： 精密吸取田薊苷對照品儲備液0. 30mL、0. 50mL、1.0mL、2. 0mL、3. 0mL置25mL量 瓶中，加甲醇至刻度，配制成濃度分別為2. 405μg/mL、4. 008μg/mL、8. 016μg/mL、16. 03 μg/mL和24. 05μg/mL的溶液，于最大吸收波長處測定吸收度，以吸收度㈧對濃度（C)作 線性回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程。標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=〇. 〇493x- 0. 0002 (r=0. 9999);田薊苷線 性范圍為 2. 405μg/mL至 24. 05μg/mL。
[0047] 實(shí)施例11，該香青蘭提取物作為制備治療冠心病、動脈硬化和心絞痛藥物的應(yīng)用。
[0048] 本發(fā)明上述實(shí)施例得到的香青蘭提取物的藥效學(xué)試驗(yàn)如下： 本發(fā)明香青蘭提取物對大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用 1試驗(yàn)材料 1. 1儀器與試劑HX-300動物呼吸機(jī)（成都泰盟科技有限公司）;powerwaveXS2酶 標(biāo)儀（美國BI0-RAD公司）;DEM-II型自動酶標(biāo)洗板機(jī)（北京楠化科技開發(fā)有限公司）； TDZS-WS多管架自動平衡離心機(jī)（湘儀離心機(jī)儀器有限公司數(shù)顯恒溫水浴鍋（國 華電器有限公司）。
[0049]乳酸脫氫酶（LDH)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST)、肌酸磷酸激酶同工酶（CK-MB)試劑盒 (均購自南京建成生物工程研究所）。
[0050] 本發(fā)明香青蘭提取物（由試驗(yàn)室自唇形科青蘭屬一年生草本植物香青蘭中提 取）。
[0051] 益心巴迪然吉布亞顆粒由新疆維吾爾藥業(yè)有限責(zé)任公司提供，lg相當(dāng)于lg生藥， 12g/袋，批號 140436。
[0052] 動物 清潔級健康雄性Wistar大鼠，體重（200±50)g，由新疆醫(yī)科大學(xué)試驗(yàn)動物中心提供。
[0053] 試驗(yàn)方法 取60只雄性Wistar大鼠，隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、本發(fā)明香青蘭提取物高劑量組、 本發(fā)明香青蘭提取物中劑量組、本發(fā)明香青蘭提取物低劑量組、益心巴迪然吉布亞顆粒組， 每組10只。受試藥物組分別給予本發(fā)明香青蘭提取物15mg/(kg·d)、30mg/(kg·d)和 60mgAkg·d)，陽性藥物組給予益心巴迪然吉布亞顆粒120mgAkg·d)，連續(xù)給藥7d。假 手術(shù)組和模型組同時給予0.5%CMC-Na灌胃，并于第8天給藥后lOmin后行手術(shù)。大鼠戊 巴比妥鈉麻醉，仰臥位固定。將銀針電極插入四肢皮下，連接BL-420E生物機(jī)能試驗(yàn)系統(tǒng)， 監(jiān)測II肢體導(dǎo)聯(lián)心電圖。行氣管插管，接小型動物呼吸機(jī)。左側(cè)第三肋間開胸，暴露心臟， 于左心耳下緣，冠狀動脈左前降支主干上1/3處，用無創(chuàng)縫針和00號絲線穿入血管（包括 靜脈）下淺層心肌，以備阻斷冠脈。待情況穩(wěn)定后，牽拉備用線，造成心肌缺血。除假手術(shù) 組不結(jié)扎外，其余組均結(jié)扎，缺血30min后松開阻斷線再灌注120min。以心電圖ST段抬高、 T波高聳作為心肌缺血的標(biāo)志，以抬高的ST段下降，T波逐漸恢復(fù)確定再灌注的成功。觀察 并記錄心肌缺血和再灌注時ST段的變化。試驗(yàn)結(jié)束后，腹主動脈取血，靜置30min后，離心 (0°C_4°C，3000r/min，10min)，測定血清學(xué)指標(biāo)。
[0054] 指標(biāo)檢測 3. 1心電圖ST段抬高情況 記錄肢體標(biāo)準(zhǔn)II導(dǎo)聯(lián)心電圖，觀察并記錄心肌缺血和再灌注時ST段的變化。結(jié)果見表 1〇
[0055] 血清心肌酶的檢測 檢測各組血清中LDH，CK-MB和AST的活性，試驗(yàn)操作方法嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行， 結(jié)果見表2。
[0056] 統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS10.0統(tǒng)計學(xué)軟件統(tǒng)計數(shù)據(jù)，所有試驗(yàn)數(shù)據(jù)均以》±s表示，組間比較用t檢 驗(yàn)，P〈0. 05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
[0057] 試驗(yàn)結(jié)果顯示： 由表1可知，大鼠冠脈前降支結(jié)扎后，與假手術(shù)組比較，其余各組缺血期的s-τ段明 顯抬高（P〈0. 01)，呈現(xiàn)明顯的缺血性損傷表現(xiàn)；與模型組比較，大鼠灌服本發(fā)明香青蘭 提取物高劑量組和中劑量組在心肌缺血-再灌注過程中s-τ段抬高均顯著低于模型組 (P〈0. 01)，本發(fā)明香青蘭提取物低劑量組、益心巴迪然吉布亞顆粒組相對效果較差。
[0058] 由表2可知，大鼠冠脈前降支結(jié)扎后，血清AST、LDH、CK-MB均顯著升高，與假手術(shù) 組比較，模型組血清心肌酶活性明顯升高（P〈〇. 01);本發(fā)明香青蘭提取物高劑量組和中劑 量組，均可使AST、LDH、CK-MB顯著降低，即本發(fā)明香青蘭提取物高劑量組和中劑量組，可顯 著抑制AST，LDH，CK-MB因心肌缺血導(dǎo)致的升高（P〈0. 01或P〈0. 05)。
[0059] 藥效學(xué)研究表明，對大鼠心肌缺血損傷，本發(fā)明香青蘭提取物可降低ST段電壓而 緩解心肌缺血，并能減少血清心肌酶的釋放。本發(fā)明香青蘭提取物高劑量組和中劑量組對 心肌缺血的療效較益心巴迪然吉布亞顆粒好，說明本發(fā)明香青蘭提取物對大鼠心肌缺血性 損傷產(chǎn)生一定的保護(hù)作用。本發(fā)明香青蘭提取物中劑量組和低劑量組的服用劑量僅為益心 巴迪然吉布亞顆粒服用劑量的25%和12. 5%，大大降低了本發(fā)明香青蘭提取物的服用量。
[0060] 現(xiàn)有香青蘭提取物中總黃酮的質(zhì)量百分含量小于50%，本發(fā)明香青蘭提取 物中總黃酮的質(zhì)量百分含量為50. 3%至58. 5%，且本發(fā)明香青蘭提取物中的木犀草 素-7-0-0-D-葡萄糖醛酸苷、芹菜素-7- -D-葡萄糖醛酸苷、迷迭香酸、香葉木 素-7-0-0-D-葡萄糖醛酸苷、田薊苷和刺槐素-7- -D-葡萄糖醛酸苷的質(zhì)量百分含量 總和為50%至65%。
[0061] 綜上所述，本發(fā)明香青蘭提取物中總黃酮含量較現(xiàn)有香青蘭提取物中總黃酮含量 有較大幅度提高；同時本發(fā)明香青蘭提取物高劑量組和中劑量組對心肌缺血的療效較益心 巴迪然吉布亞顆粒好，說明本發(fā)明香青蘭提取物對大鼠心肌缺血性損傷產(chǎn)生一定的保護(hù)作 用，本發(fā)明香青蘭提取物中劑量組和低劑量組的服用劑量僅為益心巴迪然吉布亞顆粒服用 劑量的25%和12. 5%，從而大大降低了服用量。
[0062] 以上技