口服給藥、注射 給藥、瘤內(nèi)給藥、植入給藥、腔內(nèi)給藥、肛門給藥、透皮給藥、內(nèi)外敷；
[0134] 優(yōu)選的注射給藥包括：靜脈注射、肌肉注射、皮下注射、腔內(nèi)注射。
[0135] 本發(fā)明還提供了一種體外非治療性抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)的方法，所述方法包括使用如 本發(fā)明的組合物、活性成分組合、藥物組合物，抑制癌細(xì)胞的生長(zhǎng)的步驟，即在第一活性成 分和第二活性成分與細(xì)胞的存在下，培養(yǎng)癌細(xì)胞，從而抑制癌細(xì)胞的生長(zhǎng)。
[0136] 所述方法具體包括以下步驟：
[0137] (1)將癌細(xì)胞培養(yǎng)20-30小時(shí)；
[0138] (2)加入所述的第一活性成分和第二活性成分，組合后，繼續(xù)培養(yǎng)1-100小時(shí)；
[0139] 和（3)測(cè)定細(xì)胞存活率，計(jì)算聯(lián)合指數(shù)CI值。
[0140] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的組合物、活性成分組合、藥物組合物以及藥盒的主要優(yōu) 點(diǎn)在于：
[0141] (1)本發(fā)明運(yùn)用細(xì)胞生物學(xué)方法，證實(shí)異硫氰酸酯類化合物或其衍生物能有效抑 制癌細(xì)胞的生長(zhǎng)。
[0142] (2)本發(fā)明發(fā)現(xiàn)異硫氰酸酯類化合物或其衍生物與作用或影響DNA抗癌藥物聯(lián)合 使用可協(xié)同作用于癌細(xì)胞，增強(qiáng)了癌癥的治療效果。另外，有效地降低了達(dá)到同樣治療效果 的作用或影響DNA抗癌藥物的劑量，減輕了治療的毒副作用，提高了患者的生活質(zhì)量。從而 為癌癥的預(yù)防和治療提供了一類新型藥物。
[0143] (3)本發(fā)明可以有效地減緩和拖延癌癥的發(fā)生。延長(zhǎng)患者生命，降低死亡率。
[0144] 本發(fā)明提到的上述特征，或?qū)嵤├岬降奶卣骺梢匀我饨M合。本案說(shuō)明書所揭示 的所有特征可以任何組合形式并用，說(shuō)明書中所揭示的各個(gè)特征，可以任意地被提供相同、 均等或相似目的的替代性特征所取代。因此除有特別說(shuō)明，所揭示的特征僅為均等或相似 特征的一般性例子。
[0145] 下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明 而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條 件，或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說(shuō)明，否則百分比和份數(shù)按重量計(jì)算。
[0146] 除非另行定義，文中所使用的所有專業(yè)與科學(xué)用語(yǔ)與本領(lǐng)域熟練人員所熟悉的意 義相同。此外，任何與所記載內(nèi)容相似或均等的方法及材料皆可應(yīng)用于本發(fā)明方法中。文 中所述的較佳實(shí)施方法與材料僅作示范之用。
[0147] 通用實(shí)驗(yàn)材料與方法
[0148] 試劑：苯乙基異硫氰酸酯、環(huán)己基異硫氰酸酯、萊菔硫烷（Sulforaphane)、三苯甲 基異硫氰酸酯、苯乙基異硫氰酸酯-N-乙酰半胱氨酸加合物（PEITC-NAC)、4_苯丁基異硫 氰酸酯（PBITC)、6_苯己基異硫氰酸酯（PHITC)、3_苯丙基異硫氰酸酯（3-phenylpropyl ITC)、異硫氰酸4-氯節(jié)酯、L-苯基異硫氰酸乙酯（L-alpha-methylbenzyl)、苯甲基 異硫氰酸酯（BITC)、4-甲氧基芐基異硫氰酸酯；博來(lái)霉素（Bleomycin)、苯達(dá)莫司汀 (Bendamustine)、順鉬（Cisplatin)、環(huán)憐醜胺（Cyclophosphamide)、卡鉬（Carboplatin)、 阿霉素（Doxorubicin)、達(dá)卡巴嗪（Dacarbazine)、拓?fù)涮婵担═opotecan)、氟達(dá)拉濱 (Fludarabine)、吉西他濱（Gemcitabine)、洛莫司?。↙omustine)、奈拉濱（Nelarabine)、 柔紅霉素（Daunorubicin)、卡巴他賽、多西他賽、紫杉醇、硫酸長(zhǎng)春新堿、硫酸長(zhǎng)春堿、甲氨 蝶呤。
[0149] 細(xì)胞培養(yǎng)：HeLa細(xì)胞、Jurkat E6-1細(xì)胞、0VCAR-3細(xì)胞、Saos-2細(xì)胞、AGS細(xì)胞、 A549 細(xì)胞、PANC-I 細(xì)胞、U251 細(xì)胞、HL-60 細(xì)胞、SK-MEL-28 細(xì)胞、DU145 細(xì)胞、MDA-MB-231 細(xì)胞、PC-3細(xì)胞，上海美迪西生物醫(yī)藥有限公司提供，置于37°C，5 % CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中，分 別以10% FBS的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)（Saos-2細(xì)胞、U251細(xì)胞、HeLa細(xì)胞、A549細(xì)胞、PANC-I 細(xì)胞、SK-MEL-28細(xì)胞、MDA-MB-231細(xì)胞），以10% FBS的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)（A549細(xì)胞、 PANC-I細(xì)胞），以20% FBS的頂DM培養(yǎng)基培養(yǎng)（HL-60細(xì)胞），以20% FBS的RPMI1640培 養(yǎng)基培養(yǎng)（0VCAR-3細(xì)胞），以10% FBS的F12培養(yǎng)基培養(yǎng)（AGS、DU145細(xì)胞），以10% FBS 的F12k培養(yǎng)基培養(yǎng)（PC-3細(xì)胞），以10% FBS的RPMI1640培養(yǎng)基培養(yǎng)（Jurkat E6-1細(xì) 胞）。
[0150] 藥物作用細(xì)胞IC5。檢測(cè)：異硫氰酸酯類化合物或其衍生物與作用或影響DNA抗癌 藥物，分別單獨(dú)作用或合并作用于人癌細(xì)胞。接種細(xì)胞到384孔板，于CO 2培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng) 24小時(shí)后給藥，藥物溶解在DMSO中，先在96孔板內(nèi)進(jìn)行9個(gè)濃度梯度稀釋，再加入相應(yīng)細(xì) 胞的384孔板，DMSO在384孔板內(nèi)濃度小于1%。每個(gè)濃度設(shè)3個(gè)復(fù)孔。細(xì)胞給藥后在CO 2 培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)72h，后用eellTiter-Glo,試劑和發(fā)光檢測(cè)儀檢測(cè)細(xì)胞存活率。并計(jì)算出 各給藥組的IC5。值。
[0151] 藥物協(xié)同作用計(jì)算：
[0152] 兩個(gè)藥物之間的相互作用（協(xié)同，加和，拮抗）通過(guò)聯(lián)合指數(shù)CI值定義。
[0153] CI 值通過(guò)以下公式計(jì)算：CI = (Am) 5。/(As) 5。+(Bm) 5。/(Bs)50,
[0154] (Am) 5。代表藥物A在聯(lián)合作用時(shí)要達(dá)到50 %抑制率（ICJ所需的濃度；
[0155] (As)5。代表藥物A單獨(dú)作用時(shí)要達(dá)到50 %抑制率（ICJ所需的濃度；
[0156] (Bm)5。代表藥物B在聯(lián)合作用時(shí)要達(dá)到50 %抑制率（ICJ所需的濃度；
[0157] (Bs)50代表藥物B單獨(dú)作用時(shí)要達(dá)到50 %抑制率（IC50)所需的濃度。
[0158] CI值> 1表TK措抗作用，等于1表TK加和作用，< 1表TK協(xié)同作用。
[0159] (Am) 5。與（Bm) 5。計(jì)算方法：
[0160] 藥物A設(shè)置9個(gè)濃度梯度（AU A2、A3、A4、A5、A6、A7、A8、A9);藥物B設(shè)置9個(gè) 濃度梯度（Bl、B2、B3、B4、B5、B6、B7、B8、B9);從高濃度到低濃度一一對(duì)應(yīng)，A與B聯(lián)合給 藥至相應(yīng)細(xì)胞的384孔板，細(xì)胞孔1加藥（A1+B1)，細(xì)胞孔2加藥（A2+B2)，細(xì)胞孔3加藥 (A3+B3),……細(xì)胞孔9加藥（A9+B9)。每個(gè)聯(lián)合給藥細(xì)胞孔設(shè)3個(gè)復(fù)孔。
[0161] 給藥后在CO2培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)72h，后用Ceimter-Gloli試劑和發(fā)光檢測(cè)儀檢 測(cè)細(xì)胞存活率。根據(jù)藥物A濃度或濃度對(duì)數(shù)和相應(yīng)細(xì)胞孔細(xì)胞抑制率繪制曲線，計(jì)算得到 IC5。，即（Am)5。，根據(jù)藥物B濃度或濃度對(duì)數(shù)和相應(yīng)細(xì)胞孔細(xì)胞抑制率繪制曲線，計(jì)算得到 IC50，即（Bm) 50。
[0162] (As)5。計(jì)算方法：
[0163] 藥物A設(shè)置9個(gè)濃度梯度仏1、42、43、4435、4637、4839)，單獨(dú)給藥至相應(yīng)細(xì) 胞的384孔板，每個(gè)給藥濃度細(xì)胞孔設(shè)3個(gè)復(fù)孔。給藥后在CO 2培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)72h，后 用CdlTiter-Glc/試劑和發(fā)光檢測(cè)儀檢測(cè)細(xì)胞存活率。根據(jù)藥物A濃度或濃度對(duì)數(shù)和相應(yīng) 藥物濃度細(xì)胞孔細(xì)胞抑制率繪制曲線，計(jì)算得到IC5。，即（As)5。。
[0164] (Bs)5。計(jì)算方法：
[0165] 藥物B設(shè)置9個(gè)濃度梯度出1、82、83、84、85、86、87、88、89)，單獨(dú)給藥至相應(yīng)細(xì) 胞的384孔板，每個(gè)給藥濃度細(xì)胞孔設(shè)3個(gè)復(fù)孔。給藥后在CO 2培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)72h，后 用Ceimter-Gloli試劑和發(fā)光檢測(cè)儀檢測(cè)細(xì)胞存活率。根據(jù)藥物8濃度或濃度對(duì)數(shù)和相應(yīng) 藥物濃度細(xì)胞孔細(xì)胞抑制率繪制曲線，計(jì)算得到IC 5。，即（Bs)5。。
[0166] 實(shí)施例1 :作用或影響DNA抗癌藥物與異硫氰酸酯類化合物抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)具有 協(xié)同作用
[0167] 表1博來(lái)霉素與不同異硫氰酸酯作用于HeLa細(xì)胞
[0169] 從表1可知，博來(lái)霉素（Bleomycin)與苯乙基異硫氰酸酯、苯甲基異硫氰酸酯、或 環(huán)己基異硫氰酸酯聯(lián)合作用于HeLa細(xì)胞，具有協(xié)同作用。
[0170] 表2苯達(dá)莫司汀與不同異硫氰酸酯作用于Jurkat E6-1細(xì)胞
[0172] 從表2可知，苯達(dá)莫司?。˙endamustine)與苯乙基異硫氰酸酯或環(huán)己基異硫氰酸 酯聯(lián)合作用于JurkatE6-l細(xì)胞，具有協(xié)同作用。
[0173] 表3順鉬與不同異硫氰酸酯作用于HeLa細(xì)胞或0VCAR-3細(xì)胞
[0174]
[0175] 從表3可知，順鉬與苯乙基異硫氰酸酯、苯甲基異硫氰酸酯或環(huán)己基異硫氰酸酯 聯(lián)合作用于HeLa細(xì)胞或0VCAR-3細(xì)胞，具有協(xié)同作用。
[0176] 表4環(huán)磷酰胺與不同異硫氰酸酯作用于0VCAR-3細(xì)胞
[0178] 從表4可知，環(huán)磷酰胺與苯乙基異硫氰酸酯聯(lián)合作用于0VCAR-3細(xì)胞，具有協(xié)同作 用。
[0179] 表5卡鉬與不同異硫氰酸酯作用于0VCAR-3細(xì)胞
[0181] 從表5可知，卡鉬與苯乙基異硫氰酸酯、苯甲基異硫氰酸酯、異硫氰酸4-氯芐酯或 L-苯基異硫氰酸乙酯聯(lián)合作用0VCAR-3細(xì)胞，具有協(xié)同作用。
[0182] 表6阿霉素與不同異硫氰酸酯作用Saos-2細(xì)胞、AGS細(xì)胞或0VCAR-3細(xì)胞
[0183]
[0184] 從表6可知，阿霉素與苯乙基異硫氰酸酯、苯甲基異硫氰酸酯或環(huán)己基異硫氰酸 酯聯(lián)合作用于Saos-2細(xì)胞、AGS細(xì)胞或0VCAR-3細(xì)胞，具有協(xié)同作用。
[0185] 表7達(dá)卡巴嗪與不同異硫氰酸酯作用SK-MEL-28細(xì)胞
[0187] 從表7可知，達(dá)卡巴嗪（Dacarbazine)與苯乙基異硫氰酸酯聯(lián)合作用于SK-MEL-28 細(xì)胞，具有協(xié)同作用。
[0188] 表8拓?fù)涮婵蹬c不同異硫氰酸酯作用HeLa細(xì)胞或0VCAR-3細(xì)胞
[0190] 從表8可知，拓?fù)涮婵担═opotecan)與苯乙基異硫氰酸酯、苯甲基異硫氰酸酯或環(huán) 己基異硫氰酸酯聯(lián)合作用于HeLa細(xì)胞或0VCAR-3細(xì)胞，具有協(xié)同作用。
[0191] 表9氟達(dá)拉濱與不同異硫氰酸酯作用HL-60細(xì)胞
[0193] 從表9可知，氟達(dá)拉濱（Fludarabine)與苯乙基異硫氰酸酯聯(lián)合作用于HL-60細(xì) 胞，具有協(xié)同作用。
[0194] 表10吉西他濱與不同異硫氰酸酯作用A549細(xì)胞、0VCAR-3細(xì)胞或PANC-I細(xì)胞

[0197] 從表10可知，吉西他濱（Gemcitabine)與苯乙基異硫氰酸酯等異硫氰酸酯類化合 物聯(lián)合作用于A549細(xì)胞、0VCAR-3細(xì)胞或PANC-I細(xì)胞，具有協(xié)同作用。
[0198] 表11洛莫司汀與不同異硫氰酸酯作用U251細(xì)胞
[0200] 從表11可知，洛莫司汀（Lomustine)與苯乙基異硫氰酸酯或環(huán)己基異硫氰酸酯聯(lián) 合作用于U251細(xì)胞，具