用于鼓膜或外耳道再生的試劑的制作方法
【專利說明】
[0001] 本申請是基于申請日為2009年6月26日、申請?zhí)枮?00980133310. 8、發(fā)明名稱為 "用于鼓膜或外耳道再生的試劑"的申請所提交的分案申請。
[0002]
技術(shù)領(lǐng)域
[0003] 本發(fā)明設(shè)及鼓膜或耳道再生試劑，其包括明膠海棉和被覆材料的組合，所述明膠 海棉載有堿性成纖維細胞生長因子化FGF)。
【背景技術(shù)】
[0004] 鼓膜穿孔是造成諸如鼓膜中破裂和穿孔的缺陷的癥狀；其存在多種原因，在鼓室 中肉眼可見干燥而無活動性炎癥的情況下，似乎可期望盡可能早地閉合穿孔。鼓膜閉合的 最大優(yōu)點是聽力的提高。只要內(nèi)耳沒有失調(diào)且中耳不存在特別的病變，則在所有情況下，在 鼓膜閉合之后通常都實現(xiàn)了聽力的改善，運顯著地有助于患者Q0L的提高。 陽〇化]鼓膜中存在穿孔時，不僅鼓膜不能夠捕捉足夠的聲音，而且聽覺（聽單詞）也會由 于消除效應(yīng)而被進一步干擾，其中直接進入鼓室的聲音會穿過圓窗進入耳蝸，并與經(jīng)由正 常路線進入耳蝸的聲音沖突。另外，中耳直接暴露于耳道側(cè)，結(jié)果運導(dǎo)致對感染耐受性減弱 并可能造成中耳炎。長期持續(xù)的感染狀態(tài)會由于內(nèi)耳機能減退而造成感覺神經(jīng)的聽覺損失 和受損的迷路功能。由于運些原因，優(yōu)選盡量閉合鼓膜。
[0006] 對于鼓膜閉合，多種治療根據(jù)穿孔的尺寸進行，目前可利用的大部分療法基本上 是基于外科手術(shù)的。通常，進行鼓膜成形術(shù)和鼓室成形術(shù)。在前者中，耳后部的皮膚切口與 自體組織的收集/移植是必要的；在后者中，除運些程序之外，耳道磨損也是必要的。當(dāng)鼓 膜的穿孔尺寸增加時，作為鼓膜替代品的自體組織（顛筋膜）的移植作為外科技術(shù)變得更 難進行。因此，甚至在進行了外科手術(shù)的情況下，聽力并不總是得到改善?？赡艹霈F(xiàn)許多后 遺癥，如術(shù)后鼓膜再穿孔、耳周部異感W及耳鳴。此外，在術(shù)后，鼓膜由于潛伏化作用、肥大 等而與完整鼓膜相距甚遠，并且聽力降低。運些手術(shù)通常伴隨住院護理約一天至幾個星期， 而造成缺點，如患者的屯、理、生理和經(jīng)濟負擔(dān)的增加。
[0007] 同樣地，對于伴隨骨露出的耳道軟組織缺陷，外科手術(shù)治療已經(jīng)成為唯一常規(guī)療 法；處置如耳后部外切開和自體組織采集已必不可少。
[000引近年來，提出了使用載有生長因子的生物相容性支架材料的再生醫(yī)學(xué)性鼓膜再生 方法（例如，參見專利文獻1)。特別地，已報道了一些治療案例，其中堿性成纖維細胞生長 因子化FG巧用作生長因子，片狀薄膜如膠原蛋白膜或幾下質(zhì)膜用作支架材料（非專利文獻 1-3)。此外，還記載了由含bFGF的膠原蛋白的圓柱狀元件制成的用于耳道重建的成型品 (專利文獻2)。
[0009] 作為另一個不依賴于外科手術(shù)的鼓膜再生方法，已報道了下述方法，其中鼓膜的 穿孔部分用羊膜被覆并與纖維蛋白膠粘合（非專利文獻2)。
[0010] 然而，常規(guī)再生醫(yī)學(xué)性療法的效力限于相對小的鼓膜穿孔與耳道缺陷；運些療法 不適于大于一定尺寸的鼓膜缺陷，w及耳小骨相關(guān)的缺陷，因為不能修復(fù)。
[0011] 同時，明膠海綿在耳病的治療中用作外科手術(shù)止血劑，并且還用作藥物的持續(xù)釋 放載體（專利文獻3)。 陽〇1引[現(xiàn)有技術(shù)文獻]
[專利文獻] 專利文獻1:國際專利公開No. 2006/007417的小冊子 專利文獻 2:JP-A-2007-125252 專利文獻3:美國專利申請公開No. 2007/0160648的說明書 [非專利文獻] 非專利文南犬 1:Hakubaetal. ,JournalofOtolaryngologyofJapan,Vol. 110,No. 4,p. 261, 2007 非專利文獻 2:Hakubaetal.,HeadandNeckSurgery,Vol. 16,No. 1,p. 9-13, 2006 非專利文南犬 3:Fut曰iet曰 1. ,JournalofOtolaryngologyofJapan,Vol. 110,No. 4，p. 299，2007。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0013] 發(fā)明所要解決的問題 對于基于再生醫(yī)療技術(shù)的鼓膜和耳道再生方法的開發(fā)存在強烈需求，其甚至能夠修復(fù) 傳統(tǒng)上不可避免地依賴于外科手術(shù)的大的鼓膜穿孔與耳道軟組織缺陷。因此，本發(fā)明的目 的是提供不管缺陷部分的尺寸與位置如何均能夠修復(fù)缺陷的新型鼓膜/耳道再生試劑。
[0014] 解決問題的手段 本發(fā)明人進行了廣泛的研究W完成上述的目的，并注意到下述事實，即全部傳統(tǒng)方法 都意圖通過允許周圍組織沿著結(jié)合至鼓膜穿孔或耳道軟組織缺陷的板狀支架材料的基底 延伸來修復(fù)缺陷部分。因為旨在本質(zhì)上再生膜組織，所W使用片狀材料作為支架的想法似 乎顯得合理。然而，只有鼓膜穿孔或耳道軟組織缺陷僅位于平坦的部分，修復(fù)才會是可能 的；然而，鼓膜在形狀上復(fù)雜并具有附著其上的小骨，因此隨著鼓膜缺陷尺寸的增加，將愈 加難于用平坦的片狀材料被覆整個表面。不能完全被覆缺陷部分將無法修復(fù)鼓膜，或者將 導(dǎo)致與周圍組織粘連，留下后遺癥。耳道軟組織的情況也如此。
[0015] 基于W上原因，本發(fā)明人改變了使用片狀材料的常規(guī)想法，隨著集中于使用能夠 立體地被覆整個缺陷部分的材料，而采用明膠海綿作為支架材料。具體地，W海綿被覆鼓膜 或耳道的缺陷部分的方式留置浸潰了bFGF溶液的明膠海綿。因為明膠海綿是通過分解膠 原蛋白獲得的材料，與膠原蛋白相比具有更大數(shù)目的間隙與更高的自由度，因此它的特征 在于，盡管作為細胞生長用支架發(fā)揮作用，但它不會妨礙細胞延伸的方向。因此，明膠海綿 旨在使再生組織進入明膠海綿并在其中延伸，而不是如常規(guī)那樣使再生組織沿片狀材料的 基底延伸。
[0016] 此外，在該操作中，纖維蛋白膠或海藻酸或它們的鹽被施加于海綿表面，且將該海 綿被覆并固定在缺陷部分上。盡管已知使用生物粘附材料將組織再生用基材固定于周圍組 織的技術(shù)，但是本發(fā)明人用被覆材料被覆海綿表面，不僅是作為粘合劑，還是為了使再生部 分與外部隔絕w形成適于體內(nèi)培養(yǎng)環(huán)境的目的。出于相同觀點，當(dāng)鼓膜穿孔與耳道軟組織 缺陷的邊緣老舊時，則使用手術(shù)刀或蛋白質(zhì)變性劑等使其新鮮化。
[0017] 其結(jié)果，即使是常規(guī)方法不適用的、缺陷設(shè)及大于膜的2/3的鼓膜穿孔和傷口直 徑超過2cm的耳道軟組織缺陷，在所有病例中也都觀察到缺陷的閉合與聽力的改善，而沒 有觀察到后遺癥。
[0018] 由上可知，本發(fā)明人證實通過組合使用載有bFGF的明膠海綿與被覆材料，即使是 對于常規(guī)不可避免地依賴于外科手術(shù)的、具有嚴重鼓膜穿孔或耳道軟組織缺陷的患者，也 可W廉價、便利且安全地再生鼓膜與耳道，從而開發(fā)了本發(fā)明。
[0019] 因此，本發(fā)明如下所述：
[1]鼓膜或耳道再生試劑，其包括明膠海棉和被覆材料的組合，其中所述明膠海棉載 有堿性成纖維細胞生長因子。
[0020] [2] [1]所述的試劑，其中所述被覆材料是纖維蛋白膠或者水溶性高分子多糖或 它們的衍生物。
[0021] [3] [2]所述的試劑，其中所述水溶性高分子多糖是幾下質(zhì)、殼聚糖或海藻酸或它 們的鹽。
[0022] [4] [1]-[3]中任一項所述的試劑，其中鼓膜穿孔和耳道軟組織缺陷的邊緣已被 新鮮化。
[0023][引鼓膜或耳道的再生方法，其包括將載有治療有效量的堿性成纖維細胞生長因 子的明膠海綿留置在患有鼓膜穿孔或耳道軟組織缺陷的患者的鼓膜穿孔或耳道軟組織缺 陷部分中，并用被覆材料被覆所述海綿。
[0024] [6][引所述的再生方法，其中所述被覆材料是纖維蛋白膠或者水溶性高分子多 糖或它們的衍生物。
[00巧][7] [6]所述的再生方法，其中所述水溶性高分子多糖是幾下質(zhì)、殼聚糖或海藻酸 或它們的鹽。
[0026] 閒[5]- [7]中任一項所述的再生方法，其中所述鼓膜穿孔和耳道軟組織缺陷的 邊緣被預(yù)先新鮮化。
[0027] [9]被覆材料和明膠海綿所載有的堿性成纖維細胞生長因子用于制備鼓膜或耳 道再生試劑的用途。
[0028] [10] [9]所述的用途，其中所述被覆材料是纖維蛋白膠或者水溶性高分子多糖或 它們的衍生物。
[0029] [11] [10]所述的用途，其中所述水溶性高分子多糖是幾下質(zhì)、殼聚糖或海藻酸或 它們的鹽。
[0030] [12]巧]-[11]中任一項所述的用途，其中鼓膜穿孔和耳道軟組織缺陷的邊緣已 被新鮮化。 陽0川發(fā)明效果 通過使用明膠海綿作為支架材料，可W立體地被覆鼓膜或耳道的整個缺陷部分W實現(xiàn) 缺陷部分的完全被覆。另外，鼓膜組織在明膠海綿中前進的同時再生其本身。因此，根據(jù)本 發(fā)明，鼓膜或耳道的修復(fù)即使在大的或者復(fù)雜缺陷的情況下也是可能的。
[0032]用被覆材料被覆明膠海綿表面防止干燥與感染，使得可W形成與外部隔離的良好 培養(yǎng)環(huán)境。
[0033] 此外，明膠海綿在1個月內(nèi)在體內(nèi)經(jīng)歷水解并消失，有利于鼓膜與耳道軟組織的 再生。
[0034] 附圖簡述
[圖1]顯示使用本發(fā)明鼓膜再生試劑的鼓膜再生治療的實例的圖。A.指出了設(shè)及鼓膜 的約2/3的大穿孔。B.使用鼓膜切開刀擦傷鼓膜穿孔的邊緣W在周圍形成新鮮傷口。C.將 載有bFGF的明膠海綿留置在穿孔部分中并用纖維蛋白膠固定?；谥委?