>[0062] 本發(fā)明的進(jìn)一步特征在于下列事實(shí)：將留置于缺陷中的載有bFGF的明膠海綿的 表面用被覆材料被覆。作為本發(fā)明中使用的被覆材料，可W使用任何生物相容性材料，只 要其具有足W將載有bFGF的明膠海綿保持固定在鼓膜或者耳道的缺陷部分上的粘性， 并且能夠通過與外部環(huán)境隔離而為該海綿的表面和內(nèi)部提供適于再生組織的細(xì)胞的培 養(yǎng)環(huán)境；實(shí)例包括纖維蛋白膠（血液纖維蛋白原和凝血酶提取物；可作為Bo化eal(注 冊商標(biāo)）（AstellasPharma)、TISS邸L(注冊商標(biāo)）度axter)或者Beriplast(注冊商標(biāo)） (CSLBe虹ing)而商業(yè)地獲得)、海藻酸或其鹽（例如海藻酸巧、海藻酸鋼）和水溶性高分子 多糖如幾下質(zhì)和殼聚糖。
[0063] 作為制備海藻酸鹽（海藻酸巧)并將其形成為膜狀的方法，例如，將3. 3ml的2%海 藻酸鋼水溶液均勻地誘鑄，W使10ml容量的皮氏培養(yǎng)皿的整個底面與該水溶液接觸。之 后，將5ml的3%氯化巧水溶液均勻地鋪展在同一皮式培養(yǎng)皿W使海藻酸鋼的水溶液和氯化 巧的水溶液彼此充分接觸，之后等待數(shù)分鐘。在除去剩余的液體后，用蒸饋水清洗培養(yǎng)皿并 使之自然干燥，由此制備出海藻酸巧膜。干燥后將膜剝離，形成適當(dāng)尺寸，并用E0氣體滅 菌，由此海藻酸鹽可被制備為被覆材料。
[0064] 當(dāng)被覆材料是液體時，可W通過將數(shù)滴被覆材料滴在留置于缺陷部分中的載有 bFGF的明膠海綿的表面上，或者通過利用本來已知的噴霧器噴霧被覆材料來進(jìn)行給予。當(dāng) 被覆材料是片狀物質(zhì)時，可W將其W被覆留置于缺陷部分中的載有bFGF的明膠海綿的表 面的方式放置。 W65] W下，借助下述實(shí)施例更具體地說明本發(fā)明，但并不W任何方式限制本發(fā)明。 實(shí)施例
[0066] 實(shí)施例1鼓膜的再生 1)患者選擇 研究對象包括各種被證實(shí)患有鼓膜穿孔且在中耳/外耳中沒有活動性感染或炎癥的 患者，包括慢性中耳炎癥例（n=9)，鼓膜閉合外科手術(shù)或鼓室成形術(shù)后再穿孔癥例（n=7)， 陳舊外傷性鼓膜穿孔癥例（n=5)，滲出性中耳炎的鼓膜切開或鼓膜管留置后殘留穿孔癥例 (n=10)等。鼓膜穿孔尺寸不重要。
[0067] 根據(jù)鼓膜穿孔的尺寸將患者分成Ξ組。具體地，設(shè)及整個鼓膜的小于1/3、1/3-2/3 W及大于2/3的鼓膜穿孔患者分別分類為I級、II級和III級。
[0068] 2)治療方法和跟進(jìn)檢查 在證實(shí)存在鼓膜穿孔和沒有活動性感染和炎癥之后，將浸有4%鹽酸利多卡因的棉花 插入耳道中，W使之與鼓膜的穿孔部分接觸。大約15分鐘后，在顯微鏡下，使用鼓膜切開 刀等磨傷鼓膜穿孔邊緣，并除去周圍穿孔邊緣的上皮（圖1B)。隨后，將大于鼓膜穿孔的明 膠海綿（Spongel(注冊商標(biāo)）：Astellas)塊浸潰bFGF(Fiblast(注冊商標(biāo)）：Kaken 化armaceutical)，并將載有bFGF的明膠海綿留置，W使鼓膜的穿孔部分被完全被覆（圖 1C)。此后，用數(shù)滴纖維蛋白膠度eriplast注冊商標(biāo)）C化Be虹ing)將其固定。
[0069] 在治療后，指導(dǎo)患者不要進(jìn)行任何對他們的耳朵施加壓力的事情，如劇烈吸鼻子 和鼻子呼氣，并且不可在洗頭和洗澡時讓水進(jìn)入他們的耳朵。
[0070] Ξ周后的檢查顯示殘留于表面的被覆材料和明膠海綿的牢固粘附；當(dāng)使用Rosen 探針等將其小屯、除去時，在其下觀察到了再生的鼓膜（圖ID)。通過單次治療不能閉合穿孔 時，重復(fù)相同的治療。
[0071] 此時，再生的鼓膜作為厚的、富含血管的組織出現(xiàn)，但它們會隨著時間經(jīng)過而變薄 (圖1E)，并在2個月后變得與正常鼓膜難W分辨（圖1F)。 陽07引如結(jié)果 對于26個對象的31只耳朵通過該方法進(jìn)行鼓膜再生治療。結(jié)果示于表1。將結(jié)果按 照完成閉合所需的治療次數(shù)、閉合率、聽力改善程度、除去麻醉時間的治療時間和后遺癥的 有無，通過穿孔尺寸（I級-III級）進(jìn)行總結(jié)。將僅浸潰生理鹽水而未使用bFGF的明膠海 綿留置于鼓膜穿孔部分的5個患者的結(jié)果示于表2。
[0073] 甚至在僅浸潰生理鹽水而未使用bFGF的明膠海綿的情況下，也觀察到稍微的鼓 膜閉合趨勢。運(yùn)顯示了即使僅留置支架也能促進(jìn)鼓膜的再生；閉合對于非常小的鼓膜穿孔 似乎可能，然而，當(dāng)鼓膜穿孔大時，即使提高治療次數(shù)也不能閉合。
[0074] 同時，添加bFGF時，在所有情況中鼓膜穿孔都閉合，而與鼓膜穿孔尺寸無關(guān)。運(yùn)顯 示了細(xì)胞再生在僅使用支架時受到限制，認(rèn)為在鼓膜穿孔大于一定尺寸時，添加生長因子 如bFGF似乎是必要和不可缺少的。關(guān)于聽力改善的程度，恢復(fù)到了正常水平，而與鼓膜穿 孔尺寸無關(guān)；觀察到了功能正常化的鼓膜的再生。
[0075] 實(shí)施例2耳道軟組織的再生 1)患者選擇 研究對象包括耳道膽脂瘤切除后的患者（n=7)、鼓室成形術(shù)后的患者（n=2)、和耳道腫 瘤切除后的患者（n=l)，所有運(yùn)些患者都有耳道軟組織缺陷和耳道骨露出。缺陷的尺寸不重 要。
[0076] 2)治療方法和跟進(jìn)檢查 在確認(rèn)傷口中沒有活動性感染和炎癥之后，進(jìn)行局部麻醉。在顯微鏡下，對耳道膽脂 瘤或耳道腫瘤患者從耳道內(nèi)部切除膽脂瘤或腫瘤，并對鼓室成形術(shù)后耳道骨露出的患者利 用手術(shù)刀等形成新鮮創(chuàng)傷，之后，將大于傷口的明膠海綿塊浸潰bFGF，并將載有bFGF的明 膠海綿塊留置，W使明膠海綿塊完全被覆缺陷部分（圖2B)。此后，用數(shù)滴纖維蛋白膠或海 藻酸巧膜將其被覆（圖2C)。
[0077] 指導(dǎo)患者克制使用耳朵，并且不可在洗澡、洗頭和洗臉過程中讓水進(jìn)入耳道。
[0078] 2或3周后的檢查顯示，殘留于表面的被覆材料和明膠海綿的牢固粘附；在使用 Rosen探針將其小屯、除去時，在其下觀察到了完全再生的耳道上皮和軟組織（圖2D)。如果 單次治療再生不充分，則重復(fù)相同的治療。
[0079] 如結(jié)果 對10名患者通過該方法進(jìn)行耳道再生治療。結(jié)果示于表3,將結(jié)果按照完成閉合所需 治療次數(shù)、閉合率、除去麻醉時間的治療時間和后遺癥的有無，通過缺陷尺寸（I級-III級） 進(jìn)行總結(jié)。
[0080] 工業(yè)實(shí)用性 根據(jù)本發(fā)明，鼓膜穿孔和耳道軟組織缺陷可只在口診基礎(chǔ)上進(jìn)行治療大約10分鐘， 而不用完整的外科手術(shù)治療，因而消除了對住院和來醫(yī)院的需要。因為鼓膜/耳道的再生 與缺陷尺寸和原因無關(guān)均是可能的，因而本發(fā)明適用于常規(guī)再生醫(yī)學(xué)技術(shù)治療不適用的患 者。而且，所設(shè)及的外科技術(shù)簡單，重復(fù)治療不會產(chǎn)生后遺癥，并可W再生完全正常的鼓膜 /耳道。另外，治療之后即可使聽力正?；?，對于日常生活不造成妨礙。因此，病人的屯、理、 生理、時間上的和經(jīng)濟(jì)上的負(fù)擔(dān)得到緩解，因此從醫(yī)學(xué)經(jīng)濟(jì)學(xué)觀點(diǎn)出發(fā)，本發(fā)明高度有利。
[0081] 本申請基于在日本提交的專利申請No. 2008-167744(申請日：2008年6月26 日），將其內(nèi)容完全并入本文。
【主權(quán)項】
1. 鼓膜或耳道再生試劑，其包括明膠海棉和被覆材料的組合，所述明膠海棉載有堿性 成纖維細(xì)胞生長因子。2. 根據(jù)權(quán)利要求1的試劑，其中，所述被覆材料是纖維蛋白膠或水溶性高分子多糖或 其衍生物。3. 根據(jù)權(quán)利要求2的試劑，其中，所述水溶性高分子多糖是幾丁質(zhì)、殼聚糖或海藻酸或 其鹽。4. 根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項的試劑，其中鼓膜穿孔和耳道軟組織缺陷的邊緣已被新 鮮化。5. 鼓膜或耳道的再生方法，其包括將載有治療有效量堿性成纖維細(xì)胞生長因子的明膠 海綿留置于患有鼓膜穿孔或耳道軟組織缺陷的患者的鼓膜穿孔或耳道軟組織缺陷部分中， 并用被覆材料被覆所述海綿。6. 根據(jù)權(quán)利要求5的再生方法，其中，所述被覆材料是纖維蛋白膠或水溶性高分子多 糖或其衍生物。7. 根據(jù)權(quán)利要求6的再生方法，其中，所述水溶性高分子多糖是幾丁質(zhì)、殼聚糖或海藻 酸或其鹽。8. 根據(jù)權(quán)利要求5-7中任一項的再生方法，其中，所述鼓膜穿孔和耳道軟組織缺陷的 邊緣被預(yù)先新鮮化。9. 被覆材料和由明膠海綿所載有的堿性成纖維細(xì)胞生長因子用于制備鼓膜或耳道再 生試劑的用途。10. 根據(jù)權(quán)利要求9的用途，其中，所述被覆材料是纖維蛋白膠或者水溶性高分子多糖 或其衍生物。11. 根據(jù)權(quán)利要求10的用途，其中，所述水溶性高分子多糖是幾丁質(zhì)、殼聚糖或海藻酸 或其鹽。12. 根據(jù)權(quán)利要求9-11中任一項的用途，其中，鼓膜穿孔和耳道軟組織缺陷的邊緣已 被新鮮化。
【專利摘要】提供鼓膜或耳道再生試劑，其包括明膠海綿和被覆材料的組合，所述明膠海綿載有堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)。被覆材料不僅用于將所述明膠海綿固定至患處，而且用于防止干燥和感染的目的，以提供與外部隔離的適于再生組織的培養(yǎng)環(huán)境。為促進(jìn)組織再生，鼓膜或耳道缺陷的邊緣優(yōu)選被預(yù)先新鮮化。
【IPC分類】A61L27/54, A61L27/34, A61L27/22
【公開號】CN105381506
【申請?zhí)枴緾N201510678619
【發(fā)明人】金丸真一
【申請人】耐貝醫(yī)藥株式會社
【公開日】2016年3月9日
【申請日】2009年6月26日
【公告號】CA2729093A1, CN102131478A, EP2353547A1, EP2353547A4, US9161904, US20110110987, US20160067383, WO2009157558A1