、炙麻黃20g、五味子15g、生姜20g、防風(fēng)15g、定木香20g分別 洗凈，切段，混合在一起，以醇濃度為80 %乙醇加熱回流提取3次，每次溶劑量為1. 5kg，每 次提取時(shí)間為2小時(shí)；過濾，合并濾液，濾液回收乙醇后濃縮，得醇提浸膏，備用，藥渣與巴 戟天25g、肉蓯蓉25g、萌蘆巴20g、龜板膠15g、炒杜仲30g、菟絲子20g、炙甘草10g、澤蘭 20g、金爪兒10g、寶蓋草15g混合，加水提取3次，每次加1. 4kg的水，每次提取時(shí)間為2小 時(shí)；過濾，合并濾液，備用，將前面獲得的醇提浸膏加入到獲得的濾液中，加熱到30°C，攪拌 溶解完全，冷卻到室溫，經(jīng)截流分子量為10000的超濾柱超濾，取相對(duì)于各原料藥質(zhì)量之和 〇. 05倍的蔗糖，加水溶解，隨后加入到超濾柱過濾后的濾液中，將產(chǎn)物濃縮，除去部分水，獲 得生藥濃度為lg/ml的溶液，在0°C的溫度下冷藏過夜，過濾，獲得口服液，捋過濾后的口服 液采用間歇式脫氣的方式，在灌裝前進(jìn)行脫氣其真空度-0. 04mpa，捋口服液在50°C溫度下 充入10ml管狀瓶中并封蓋，使充填溶液后的管狀瓶中的真空度多0.Olmpa要求管狀瓶采用 無菌水洗爭(zhēng)、熱風(fēng)吹干再行灌裝；瓶蓋按衛(wèi)生要求使用；殺菌，充填包裝完成的口服液，采 用105°C、30分鐘進(jìn)彳丁蒸汽尚溫殺菌方式進(jìn)彳丁最終廣品殺菌。
[0062] 實(shí)施例2 口服液2
[0063] 取制附子10g、肉桂20g、炒山藥15g、鵝不食草15g、白石英10g、炒蒼耳子10g、白 10g、細(xì)辛5g、荊芥穗10g、炙麻黃15g、五味子10g、生姜15g、防風(fēng)10g和定木香15g分 別洗凈，切段，混合在一起，以醇濃度為80%乙醇加熱回流提取3次，每次溶劑量為1. 2kg， 每次提取時(shí)間為2小時(shí)；過濾，合并濾液，濾液回收乙醇后濃縮，得醇提浸膏，備用，藥渣與 巴戟天25g、肉蓯蓉25g、萌蘆巴15g、龜板膠10g、炒杜仲25g、菟絲子15g、炙甘草10g、澤蘭 15g、金爪兒10g、寶蓋草15g混合，加水提取3次，每次加lkg的水，每次提取時(shí)間為2小 時(shí)；過濾，合并濾液，備用，將前面獲得的醇提浸膏加入到獲得的濾液中，加熱到30°C，攪拌 溶解完全，冷卻到室溫，經(jīng)截流分子量為10000的超濾柱超濾，取相對(duì)于各原料藥質(zhì)量之和 〇. 05倍的蔗糖，加水溶解，隨后加入到超濾柱過濾后的濾液中，將產(chǎn)物濃縮，除去部分水，獲 得生藥濃度為lg/ml的溶液，在0°C的溫度下冷藏過夜，過濾，獲得口服液，捋過濾后的口服 液采用間歇式脫氣的方式，在灌裝前進(jìn)行脫氣其真空度-0. 04mpa，捋口服液在50°C溫度下 充入10ml管狀瓶中并封蓋，使充填溶液后的管狀瓶中的真空度多0.Olmpa要求管狀瓶采用 無菌水洗爭(zhēng)、熱風(fēng)吹干再行灌裝；瓶蓋按衛(wèi)生要求使用；殺菌，充填包裝完成的口服液，采 用105°C、30分鐘進(jìn)彳丁蒸汽尚溫殺菌方式進(jìn)彳丁最終廣品殺菌。
[0064] 實(shí)施例3 口服液3
[0065] 取制附子15g、肉桂25g、炒山藥20g、鵝不食草20g、白石英15g、炒蒼耳子15g、白 芷15g、細(xì)辛10g、荊芥穗15g、炙麻黃20g、五味子15g、生姜20g、防風(fēng)15g和定木香20g分 別洗凈，切段，混合在一起，以醇濃度為80%乙醇加熱回流提取3次，每次溶劑量為1. 5kg， 每次提取時(shí)間為2小時(shí)；過濾，合并濾液，濾液回收乙醇后濃縮，得醇提浸膏，備用，藥渣與 巴戟天30g、肉灰蓉30g、萌蘆巴20g、龜板膠15g、炒杜仲30g、英絲子20g、炙甘草15g、澤蘭 20g、金爪兒15、寶蓋草20g混合，加水提取3次，每次加1. 4的de水，每次提取時(shí)間為2小 時(shí)；過濾，合并濾液，備用，將前面獲得的醇提浸膏加入到獲得的濾液中，加熱到30°C，攪拌 溶解完全，冷卻到室溫，經(jīng)截流分子量為10000的超濾柱超濾，取相對(duì)于各原料藥質(zhì)量之和 〇. 05倍的蔗糖，加水溶解，隨后加入到超濾柱過濾后的濾液中，將產(chǎn)物濃縮，除去部分水，獲 得生藥濃度為lg/ml的溶液，在0°C的溫度下冷藏過夜，過濾，獲得口服液，捋過濾后的口服 液采用間歇式脫氣的方式，在灌裝前進(jìn)行脫氣其真空度-0. 04mpa，捋口服液在50°C溫度下 充入10ml管狀瓶中并封蓋，使充填溶液后的管狀瓶中的真空度多0.Olmpa要求管狀瓶采用 無菌水洗爭(zhēng)、熱風(fēng)吹干再行灌裝；瓶蓋按衛(wèi)生要求使用；殺菌，充填包裝完成的口服液，采 用105°C、30分鐘進(jìn)彳丁蒸汽尚溫殺菌方式進(jìn)彳丁最終廣品殺菌。
[0066] 實(shí)施例4
[0067] 藥理學(xué)急毒性試驗(yàn)
[0068] 目的：評(píng)價(jià)某藥物毒性特點(diǎn)時(shí)，首先進(jìn)行急毒性試驗(yàn)，提供短期內(nèi)接觸可能對(duì)健康 引起危害的資料。已達(dá)到求出半數(shù)致死量，觀察受試動(dòng)物急毒性效應(yīng)特征，為亞急性、慢性 毒性試驗(yàn)提供接觸劑量水平依據(jù)。
[0069] 動(dòng)物選擇：清潔級(jí)昆明小鼠，30只，20±2g，雌雄各半。購(gòu)入后適應(yīng)性飼養(yǎng)一周。
[0070] 藥物制備：本發(fā)明實(shí)施例1制備的藥物口服液1，濃縮至含生藥1. 0g/ml，4°C保存， 備用?？瞻讓?duì)照組：蒸餾水等體積灌胃，其余條件同本發(fā)明藥物組。
[0071] 給藥方式選擇：中藥制劑有的無法進(jìn)行注射途徑給藥，因此考慮胃腸道給藥，本發(fā) 明制劑采取灌胃給藥。
[0072] 給藥劑量：本發(fā)明實(shí)施例1制備的口服液1日給藥量為75g/kg/d，分3次灌胃，給 藥0. 5ml;空白組給與0. 5ml蒸餾水，3次/日，0. 5ml/次，灌胃，連續(xù)灌胃一周，詳細(xì)記錄各 組小鼠行為學(xué)反應(yīng)，體重、外觀、進(jìn)食進(jìn)水量。
[0073] 結(jié)果判定：灌胃給藥后，通過對(duì)小鼠自主活動(dòng)、皮毛、進(jìn)食飲水量的記錄。經(jīng)過觀 察，本發(fā)明口服液小鼠無死亡，本發(fā)明口服液組小鼠與正常組小鼠各生理指標(biāo)基本一致，統(tǒng) 計(jì)學(xué)分析，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P> 0. 05)。
[0074] 本發(fā)明口服液臨床擬用量為5g/kg/d，根據(jù)水溶液小鼠急毒性實(shí)驗(yàn)，小鼠灌胃 75g/kg/d計(jì)算，此耐受量對(duì)應(yīng)成人臨床草藥擬用量為675g/kg/d(135倍）。一般認(rèn)為最大 耐受量相當(dāng)于人臨床日用劑量100倍以上而動(dòng)物無死亡，無明顯毒性反應(yīng)情況出現(xiàn)時(shí)，該 藥是安全的。因此，可以肯定，本藥品臨床應(yīng)用是安全的。
[0075] 本發(fā)明大鼠長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)
[0076] 目的：通過重復(fù)連續(xù)給藥，觀察受試藥品產(chǎn)生的毒性反應(yīng)、中毒癥狀及發(fā)生率。提 供毒性反應(yīng)的靶器官及其損害的可逆性，初步確定無毒性反應(yīng)的最高劑量或最大無作用劑 量。因此長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)的結(jié)果及其樹脂具有中藥的意義，對(duì)新藥評(píng)價(jià)以及為臨床試驗(yàn)設(shè)計(jì) 提供科學(xué)依據(jù)。
[0077] 動(dòng)物選擇：清潔級(jí)Wistar大鼠，220±20g，雌雄各半，購(gòu)入后適應(yīng)性飼養(yǎng)一周。
[0078] 給藥方法：清潔級(jí)Wistar大鼠，40只，雌雄各半，按體重隨機(jī)分為對(duì)照組、本發(fā)明 高濃度組、本發(fā)明中濃度組、本發(fā)明低濃度組，相應(yīng)濃度為1. 25g/ml、l. 00g/ml，0. 75g/ml。 各給藥組按劑量灌胃給藥20mL/kg，2次/日，對(duì)照組同法灌胃給予蒸餾水20mL/kg。每周稱 1次體重，并根據(jù)體重調(diào)整給藥量，連續(xù)給藥6周后停藥（臨床用藥1個(gè)療程為1~2周）， 恢復(fù)觀察期為停藥后2周。
[0079] 結(jié)果判定：根據(jù)相應(yīng)的給藥濃度計(jì)算，大鼠灌胃本發(fā)明實(shí)施例1制備的口服液1劑 量對(duì)應(yīng)為50g/kg/d、40g/kg/d、30g/kg/d，折合成成人臨床擬用量，分別是90倍、72倍、54 倍。灌胃給藥后，通過對(duì)小鼠自主活動(dòng)、皮毛、進(jìn)食飲水量的記錄。經(jīng)過觀察，本發(fā)明口服液 小鼠無死亡，本發(fā)明口服液組小鼠與正常組小鼠各生理指標(biāo)基本一致，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，無統(tǒng)計(jì) 學(xué)差異（P> 0.05)。對(duì)各組大鼠臟器進(jìn)行解剖觀察，未見明顯的毒性敏感指標(biāo)和毒性靶器 官。
[0080] 綜合分析，本發(fā)明口服液高濃度長(zhǎng)期服用，未見產(chǎn)生遲發(fā)性毒性反應(yīng)和蓄積性毒 性反應(yīng)。試驗(yàn)結(jié)果說明本發(fā)明口服液長(zhǎng)期應(yīng)用對(duì)大鼠無明顯毒副作用，臨床成人擬用劑量 和療程處于安全范圍。
[0081] 實(shí)施例5動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
[0082] 實(shí)驗(yàn)材料
[0083] 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
[0084] 豚鼠30只，雌雄各半，體重（400±50)g，在清潔級(jí)動(dòng)物飼養(yǎng)室飼養(yǎng)，由青島大學(xué)醫(yī) 學(xué)院提供。豚鼠分為正常對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、治療組（本發(fā)明實(shí)施例1制備的口服液1灌 胃）3組，每組10只。
[0085] 藥物
[0086] 中藥方劑
[0087] 本發(fā)明實(shí)施例1制備的口服液1，濃縮至生藥濃度0. 425g/ml，再次用加壓過濾法 過濾，得到高純度的本發(fā)明制劑高純液，濃度為0. 4g/ml，4°C保存，備用。
[0088] 其他試劑
[0089] 0. 5 %地塞米松麻黃素，購(gòu)自山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院
[0090] 佛氏完全佐劑（FCA)，購(gòu)自華英生物技術(shù)有限公司
[0091] 不完全佐劑（FIA)，購(gòu)自華英生物技術(shù)有限公司
[0092] 超聲粉碎儀，150uSE，日本
[0093] 告訴冷凍離心機(jī)，JZ-21BACKMAN，德國(guó)
[0094] 實(shí)驗(yàn)方法
[0095] 造模方式
[0096] 免疫接種
[0097] 陽(yáng)性對(duì)照組及治療組每只豚鼠用豚草花粉變應(yīng)原液0. 75mL與等量佛氏完全佐劑 (FCA)或不完全佐劑（FIA)進(jìn)行人工免疫接種。第1次采用變應(yīng)原加佛氏完全佐劑，于腹腔 注射0. 5mL，四肢皮下（腋下、腹股溝）各注射0. 25mL共1. 5mL。2周后改為豚草花粉變應(yīng) 原加佛氏不完全佐劑，每周1次，連續(xù)2周；正常對(duì)照組以生理鹽水代替抗原，注射方法同陽(yáng) 性對(duì)照組。
[0098] 激發(fā)
[0099] 于第4周末進(jìn)行鼻腔激發(fā)，模型組配制0. 5%的豚草花粉變應(yīng)原生理鹽水溶液，用 加樣器滴入豚鼠雙側(cè)鼻孔（每側(cè)10/L)，每日1次，連續(xù)5d后改為隔日激