白及其設計和選擇的方法可參見，例如W0/2002/088171、W0/2006/ 055689和W0/2002/032925)，選擇用于活化素、ActRIIb或ActRIIa結合的隨機化的肽，通常 附著在Fc結構域上。具有活化素、ActRIIb或ActRIIa結合活性的兩種不同蛋白（或其它部 分），特別是分別阻斷I型（例如，可溶I型活化素受體)和II型（例如，可溶II型活化素受體） 結合位點的活化素結合劑，可連接在一起創(chuàng)建雙功能結合分子。抑制該活化素 -ActRII信號 傳導軸的核酸適體、小分子和其它藥劑也包括在活化素 -ActRII拮抗劑之中。各種蛋白具有 活化素 -ActRII詰抗劑活性，包括抑制素（即，抑制素 α亞基）（盡管抑制素并不在所有的組織 中普遍詰抗活化素）、卵泡抑素（例如，卵泡抑素-288和卵泡抑素-315)、FSRP、活化素 C、a (2)-巨球蛋白、以及M108A(在位置108由蛋氨酸突變?yōu)楸彼幔┩蛔兓罨?A。一般而言，活 化素的替代形式，特別是在I型受體結合結構域中替代的形式，能夠結合II型受體且不能形 成活性三元復合物，因此作為詰抗劑。此外，能夠抑制活化素 A、B、C或E或者特別地能夠抑制 ActRIIa或ActRIIb表達的核酸，如反義分子，siRNA或核酶能被用作活化素 -ActRII拮抗劑。 待使用的該活化素 -ActRII拮抗劑可顯示對活化素-介導的信號傳導相對于其它TGF-β家族 成員，特別是相對于GDF8和GDF11的抑制選擇性。
[0043]在本發(fā)明的上下文中以及在每個術語所用的特定的上下文中，在本說明書中所用 的這些術語通常具有本領域的一般含義。在下文以及說明書的其它部分討論了某些術語， 從而在描述本發(fā)明的組合物和方法以及如何制造和使用它們的方面為從業(yè)者提供額外的 指導。術語的任何使用范圍和含義將從該術語所用的特定上下文變得顯而易見。
[0044] "大約"和"約"一般指在給定測量法的性質和精確性的前提下測得數(shù)值的可接受 誤差程度。典型地，示范性誤差程度為在給定的數(shù)值或數(shù)值范圍的20%以內，優(yōu)選在10%以 內，更優(yōu)選在5%以內。
[0045] 替代性地，特別是在生物系統(tǒng)中，術語"大約"和"約"可表示在一定數(shù)量級范圍內， 優(yōu)選在給定值的5倍以內，更優(yōu)選在2倍以內的平均值。除非另有說明，此處給出的數(shù)量為近 似值，表示在未明確指出時，可推出術語"大約"或"約"。
[0046] 本發(fā)明的方法可包括對序列彼此比較的步驟，包括將野生型序列與一種或多種突 變體(序列變體)進行比較。該種比較通常包括聚合物序列的比對，例如，采用本領域公知的 序列比對程序和/或算法(例如，稍加舉例，BLAST、FASTA和MEGALIGN)進行。技術人員可容易 地理解:在該種比對中，當突變包含殘基插入或刪除時，該序列比對將在未包含該插入或刪 除殘基的聚合物序列中引入"間隙"（通常由破折號或"A"表示）。
[0047] "同源性"及其所有的語法形式和拼寫變體均指具有"共同進化起源"的兩種蛋白 (包括來自相同生物物種的超家族的蛋白，以及來自不同生物物種的同源性蛋白）之間的關 系。這種蛋白（及其編碼核酸)具有序列同源性，這反映在它們的序列相似性，不管是根據(jù)百 分比同一性還是通過特定殘基或基序以及保守位置的存在。
[0048]術語"序列相似性"及其所有的語法形式指具有或不具有共同進化起源的核酸或 氨基酸序列之間的同一性或對應性。
[0049]然而，在通常的使用以及在當前的應用中，當以副詞例如"高度"修飾術語"同源 性"時，可表示序列相似性，并涉及或不涉及共同進化起源。
[0050] 2. ActRII 多肽
[0051]在某些方面，本發(fā)明涉及ActRII多肽。本文所用的術語"ActRII"指II型活化素受 體家族。該家族同時包括Ila型活化素受體和lib型活化素受體。
[0052]在某些方面，本發(fā)明涉及ActRIIa多肽。本文所用的術語"ActRIIa"指來自任意物 種的Ila型活化素受體(ActRIIa)蛋白以及通過突變或其它修飾從該ActRIIa蛋白衍生的變 體的家族。在此提及ActRIIa時，應理解為提及目前鑒定的形式中的任意一種。該ActRIIa家 族的成員通常為跨膜蛋白，由富含半胱氨酸區(qū)的配體-結合胞外結構域、跨膜結構域、具有 預定的絲氨酸/蘇氨酸激酶活性的細胞質結構域所組成。
[0053]術語"ActRIIa多肽"包括包含天然存在的ActRIIa家族成員多肽及其保留了有用 活性的任意變體(包括突變體、片段、融合體以及擬肽形式）的多肽。例如，參見W0/2006/ 012627。例如，ActRIIa多肽包括由任意已知ActRIIa的序列所衍生的多肽，其中該已知 ActRIIa具有與ActRIIa多肽序列有至少80%同一性、任選至少85%、90%、95%、97%、99% 或更高同一性的序列。例如，本發(fā)明的ActRIIa多肽可結合ActRIIa蛋白和/或活化素并抑制 其功能?？筛鶕?jù)在體內促進紅細胞形成的活性選擇ActRIIa多肽。ActRIIa多肽的實例包括 人ActRIIa前體多肽（SEQ ID N0:1)和可溶的人ActRIIa多肽（例如，SEQ ID N0:2、3、7和 12)〇
[0054] 人ActRIIa前體多肽的序列如下：
[0055] MGAAAKLAFAVFLI SCSS(；AILGRSETQECLFFNANWEKDRT^QTGV
[0056] EPCYGDKDKRRHCFATWKNISGSIEIVKQGCWLDDINCYDRTDCVE
[0057] KKDSFE V YFCCC EG N MC N E KFSYFPEMEVTQPTSNPVTPKPP YYNIL
[0058] LYSLVPLMLIAGIVICAFWVYRHHKMAYPPVLVPTQDPGPPPPSPLLGLK
[0059] PLQLLEVKARGRFGCVWKAQLLNEYVAVKIFPIQDKQSffQNEYEVYSL
[0060] PGMKHENILQFIGAEKRGTSVDVDLWLITAFHEKGSLSDFLKANVVSWN [0061 ] ELCHIAETMARGLAYLHEDIPGLKDGHKPAISHRDIKSKNVLLKNNLTAC
[0062] IADFGLALKFEAGKSAGDTHGQVGTRRYMAPEVLEGAINFQRDAFLRID
[0063] MYAMGLVLWELASRCTAADGPVDEYMLPFEEEIGQHPSLEDMQEVVVH
[0064] KKKRPVLRDYWQKHAGMAMLCETIEECWDHDAEARLSAGCVGERITQ
[0065] MQRLTNIITTEDIVTVVTMVTNVDFPPKESSL(SEQ ID N0:1)
[0066] 信號肽以單下劃線表示;胞外結構域以粗體表示，而潛在的N-連接的糖基化位點 以雙下劃線表示。
[0067] 人可溶ActRIIa(胞外)加工的多肽序列如下：
[0068] ILGRSETQECLFFNANWEKDRTNQTGVEPCYGDKDKRRHCFATWKNIS
[0069] GSIEIVKQGCWLDDINCYDRTDCVEKKDSPEVYFCCCEGNMCNEKFSYF
[0070] PEMEVTQPTSNPVTPKPP(SEQ ID NO:2)
[0071]胞外結構域的C-末端"尾部"以下劃線表示。刪除"尾部"的序列（Δ 15序列)表示如 下：
[0072] ILGRSETQECLFFNANWEKDRTNQTGVEPCYGDKDKRRHCFATWKNIS
[0073] GSIEIVKQGCWLDDINCYDRTDCVEKKDSPEVYFCCCEGNMCNEKFSY
[0074] FPEM(SEQ ID NO:3)
[0075] 編碼人ActRIIa前體蛋白的核酸序列如下：
[0076] (Genbank入口NM_001616的核苷酸 164-1705):
[0077] ATGGGAGCTGCTGCAAAGTTGGCGTTTGCCGTCTTTCTTATCTCCTGT
[0078] TCTTCAGGTGCTATACTTGGTAGATCAGAAACTCAGGAGTGTCTTTTC
[0079] TTTAATGCTAATTGGGAAAAAGACAGAACCAATCAAACTGGTGTTGA
[0080] ACCGTGTTATGGTGACAAAGATAAACGGCGGCATTGTTTTGCTACCTG [0081 ] GAAGAATATTTCTGGTTCCATTGAAATAGTGAAACAAGGTTGTTGGCT
[0082] GGATGATATCAACTGCTATGACAGGACTGATTGTGTAGAAAAAAAAG
[0083] ACAGCCCTGAAGTATATTTTTGTTGCTGTGAGGGCAATATGTGTAATGA
[0084] AAAGTTTTCTTATTTTCCAGAGATGGAAGTCACACAGCCCACTTCAAA
[0085] TCCAGTTACACCTAAGCCACCCTATTACAACATCCTGCTCTATTCCTTG
[0086] GTGCCACTTATGTTAATTGCGGGGATTGTCATTTGTGCATTTTGGGTGT
[0087] ACAGGCATCACAAGATGGCCTACCCTCCTGTACTTGTTCCAACTCAAG
[0088] ACCCAGGACCACCCCCACCTTCTCCATTACTAGGGTTGAAACCACTGC
[0089] AGTTATTAGAAGTGAAAGCAAGGGGAAGATTTGGTTGTGTCTGGAAA
[0090] GCCCAGTTGCTTAACGAATATGTGGCTGTCAAAATATTTCCAATACAG
[0091] GACAAACAGTCATGGCAAAATGAATACGAAGTCTACAGTTTGCCTGG
[0092] AATGAAGCATGAGAACATATTACAGTTCATTGGTGCAGAAAAACGAG
[0093] GCACCAGTGTTGATGTGGATCTTTGGCTGATCACAGCATTTCATGAAA
[0094] AGGGTTCACTATCAGACTTTCTTAAGGCTAATGTGGTCTCTTGGAATG
[0095] AACTGTGTCATATTGCAGAAACCATGGCTAGAGGATTGGCATATTTACA
[0096] TGAGGATATACCTGGCCTAAAAGATGGCCACAAACCTGCCATATCTCA
[0097] CAGGGACATCAAAAGTAAAAATGTGCTGTTGAAAAACAACCTGACA
[0098] GCTTGCATTGCTGACTTTGGGTTGGCCTTAAAATTTGAGGCTGGCAAG
[0099] TCTGCAGGCGATACCCATGGACAGGTTGGTACCCGGAGGTACATGGC
[0100] TCCAGAGGTATTAGAGGGTGCTATAAACTTCCAAAGGGATGCATTTTT
[0101] GAGGATAGATATGTATGCCATGGGATTAGTCCTATGGGAACTGGCTTCT
[0102] CGCTGTACTGCTGCAGATGGACCTGTAGATGAATACATGTTGCCATTT
[0103] GAGGAGGAAATTGGCCAGCATCCATCTCTTGAAGACATGCAGGAAGT
[0104] TGTTGTGCATAAAAAAAAGAGGCCTGTTTTAAGAGATTATTGGCAGA
[0105] AACATGCTGGAATGGCAATGCTCTGTGAAACCATTGAAGAATGTTGG
[0106] GATCACGACGCAGAAGCCAGGTTATCAGCTGGATGTGTAGGTGAAAG
[0107] AATTACCCAGATGCAGAGACTAACAAATATTATTACCACAGAGGACAT
[0108] TGTAACAGTGGTCACAATGGTGACAAATGTTGACTTTCCTCCCAAAG
[0109] AATCTAGTCTATGA(SEQ ID NO:4)
[0110] 編碼人ActRIIa可溶(胞外)多肽的核酸序列如下：
[0111] ATACTTGGTAGATCAGAAACTCAGGAGTGTCTTTTCTTTAATGCTAATT
[0112] GGGAAAAAGACAGAACCAATCAAACTGGTGTTGAACCGTGTTATGGT
[0113] GACAAAGATAAACGGCGGCATTGTTTTGCTACCTGGAAGAATATTTCT
[0114] GGTTCCATTGAAATAGTGAAACAAGGTTGTTGGCTGGATGATATCAAC
[0115] TGCTATGACAGGACTGATTGTGTAGAAAAAAAAGACAGCCCTGAAGT
[0116] ATATTTTTGTTGCTGTGAGGGCAATATGTGTAATGAAAAGTTTTCTTAT
[0117] TTTCCAGAGATGGAAGTCACACAGCCCACTTCAAATCCAGTTACACCT
[0118] AAGCCACCC(SEQ ID NO:5)
[0119]在某些方面，本發(fā)明涉及ActRIIb多肽。本文所用的術語"ActRIIb"指來自任意物 種的lib型活化素受體(ActRIIb)蛋白以及通過突變或其它修飾從該ActRIIb蛋白衍生的變 體的家族。在此提及ActRIIb時，應理解為提及目前鑒定的形式中的任意一種。該ActRIIb家 族的成員通常為跨膜蛋白，由富含半胱氨酸區(qū)的配體-結合胞外結構域、跨膜結構域、具有 預定的絲氨酸/蘇氨酸激酶活性的細胞質結構域所組成。
[0120]術語"ActRIIb多肽"包括包含天然存在的ActRIIb家族成員多肽及其保留了有用 活性的任意變體(包括突變體、片段、融合體以及擬肽形式）的多肽。例如，參見W0/2006/ 012627。例如，ActRIIb多肽包括由任意已知ActRIIb的序列所衍生的多肽，其中該已知 ActRIIb具有與ActRIIb多肽序列有至少80%同一性、任選至少85%、90%、95%、97%、99% 或更高同一性的序列。例如，本發(fā)明的ActRIIb多肽可結合ActRIIb蛋白和/或活化素并抑制 其功能?？筛鶕?jù)在體內促進紅細胞形成的活性選擇ActRIIb多肽。ActRIIb多肽的實例包括 人ActRIIb前體多肽（SEQIDN0:15)和可溶的人ActRIIb多肽（例如，SEQIDN0:16、17、20 和21)。人ActRIIb前體多肽的序列如下：
[0121] MTAPffVALALLffGSLffPGSGRGEAETRECIYYNANVELERT^QSGLER
[0122] CEGEQDKRLHCYASWA畫;SSGTIELVKKGCWLDDFNCYDRQECVATEEN
[0123] PQVYFCCCEGNFCNERFTHLPEAGGPEVTYEPPPTAPTLLTVLAYSLLPIG
[0124] GLSLIVLLAFWMYRHRKPPYGHVDIHEDPGPPPPSPLVGLKPLQLLEIKA
[0125] RGRFGCVWKAQLMNDFVAVKIFPLQDKQSWQSEREIFSTPGMKHENLL
[0126] QFIAAEKRGSNLEVELWLITAFHDKGSLTDYLKGNIITWNELCHVAETMS
[0127] RGLSYLHEDVPWCRGEGHKPSIAHRDFKSKNVLLKSDLTAVLADFGLAV
[0128] RFEPGKPPGDTHGQVGTRRYMAPEVLEGAINFQRDAFLRIDMYAMGLV
[0129] LWELVSRCKAADGPVDEYMLPFEEEIGQHPSLEELQEVVVHKKMRPTIK
[0130] DHWLKHPGLAQLCVTIEECWDHDAEARLSAGCVEERVSLIRRSVNGTT
[0131] SDCLVSLVTSVTNVDLPPKESSI(SEQ ID NO:15)
[0132] 信號肽以單下劃線表示;胞外結構域以粗體表示，而潛在的N-連接的糖基化位點 以方框表示。
[0133] 人可溶的ActRIIb(胞外)加工的多肽序列如下：
[0134] SGRGEAETRECIYYNANWELERTNQSGLERCEGEQDKRLHCYASWANS
[0135] SGTIELVKKGCWLDDFNCYDRQECVATEENPQVYFCCCEGNFCNERFTH
[0136] LPEAGGPEVTYEPPPTAPT(SEQ ID NO:16)
[0137] 胞外結構域的C-末端"尾部"以下劃線表示。刪除"尾部"的序列（△ 15序列)表示如 下：
[0138] SGRGEAETRECIYYNANWELERTNQSGLERCEGEQDKRLHCYASWANS
[0139] SGTIELVKKGCWLDDFNCYDRQECVATEENPQVYFCCCEGNFCNERFTH
[0140] LPEA(SEQ ID NO:17)
[0141] 編碼人ActRIIb前體蛋白的核酸序列如下：（Genbank入口NM_001616的核苷酸5-1543)
[0142] ATGACGGCGCCCTGGGTGGCCCTCGCCCTCCTCTGGGGATCGCTGTG
[0143] GCCCGGCTCTGGGCGTGGGGAGGCTGAGACACGGGAGTGCATCTACT
[0144] ACAACGCCAACTGGGAGCTGGAGCGCACCAACCAGAGCGGCCTGGA
[0145] GCGCTGCGAAGGCGAGCAGGACAAGCGGCTGCACTGCTACGCCTCC
[0146] TGGGCCAACAGCTCTGGCACCATCGAGCTCGTGAAGAAGGGCTGCTG
[0147] GCTAGATGACTTCAACTGCTACGATAGGCAGGAGTGTGTGGCCACTG
[0148] AGGAGAACCCCCAGGTGTACTTCTGCTGCTGTGAAGGCAACTTCTGC
[0149] AACGAGCGCTTCACTCATTTGCCAGAGGCTGGGGGCCCGGAAGTCAC
[0150] GTACGAGCCACCCCCGACAGCCCCCACCCTGCTCACGGTGCTGGCCT
[0151] ACTCACTGCTGCCCATCGGGGGCCTTTCCCTCATCGTCCTGCTGGCCT
[0152] TTTGGATGTACCGGCATCGCAAGCCCCCCTACGGTCATGTGGACATCC
[0153] ATGAGGACCCTGGGCCTCCACCACCATCCCCTCTGGTGGGCCTGAAG
[0154] CCACTGCAGCTGCTGGAGATCAAGGCTCGGGGGCGCTTTGGCTGTGT
[0155] CTGGAAGGCCCAGCTCATGAATGACTTTGTAGCTGTCAAGATCTTCCC
[0156] ACTCCAGGACAAGCAGTCGTGGCAGAGTGAACGGGAGATCTTCAGC
[0157] ACACCTGGCATGAAGCACGAGAACCTGCTACAGTTCATTGCTGCCGA
[0158] GAAGCGAGGCTCCAACCTCGAAGTAGAGCTGTGGCTCATCACGGCCT
[0159] TCCATGACAAGGGCTCCCTCACGGATTACCTCAAGGGGAACATCATC
[0160] ACATGGAACGAACTGTGTCATGTAGCAGAGACGATGTCACGAGGCCT
[0161] CTCATACCTGCATGAGGATGTGCCCTGGTGCCGTGGCGAGGGCCACA
[0162] AGCCGTCTATTGCCCACAGGGACTTTAAAAGTAAGAATGTATTGCTGA
[0163] AGAGCGACCTCACAGCCGTGCTGGCTGACTTTGGCTTGGCTGTTCGA
[0164] TTTGAGCCAGGGAAACCTCCAGGGGACACCCACGGACAGGTAGGCA
[0165] CGAGACGGTACATGGCTCCTGAGGTGCTCGAGGGAGCCATCAACTTC
[0166] CAGAGAGATGCCTTCCTGCGCATTGACATGTATGCCATGGGGTTGGTG
[0167] CTGTGGGAGCTTGTGTCTCGCTGCAAGGCTGCAGACGGACCCGTGGA
[0168] TGAGTACATGCTGCCCTTTGAGGAAGAGATTGGCCAGCACCCTTCGTT
[0169] GGAGGAGCTGCAGGAGGTGGTGGTGCACAAGAAGATGAGGCCCACC
[0170] ATTAAAGATCACTGGTTGAAACACCCGGGCCTGGCCCAGCTTTGTGT
[0171] GACCATCGAGGAGTGCTGGGACCATGATGCAGAGGCTCGCTTGTCCG
[0172] CGGGCTGTGTGGAGGAGCGGGTGTCCCTGATTCGGAGGTCGGTCAAC
[0173] GGCACTACCTCGGACTGTCTCGTTTCCCTGGTGACCTCTGTCACCAAT
[0174] GTGGACCTGCCCCCTAAAGAGTCAAGCATCTAA(SEQ ID NO:18)
[0175] 編碼人ActRIIb可溶(胞外)的多肽的核酸序列如下：
[0176] TCTGGGCGTGGGGAGGCTGAGACACGGGAGTGCATCTACTACAACGC
[0177] CAACTGGGAGCTGGAGCGCACCAACCAGAGCGGCCTGGAGCGCTGC
[0178] GAAGGCGAGCAGGACAAGCGGCTGCACTGCTACGCCTCCTGGGCCA
[0179] ACAGCTCTGGCACCATCGAGCTCGTGAAGAAGGGCTGCTGGCTAG