化癥、眼腦腎Lowe綜合征、肌萎縮性脊髓側(cè)索硬化癥、骨髓發(fā)育不 良癥候群、Tangier病、家族性肝內(nèi)膽汁淤積癥、X-連鎖腎上腺腦白質(zhì)營養(yǎng)不良、Scott綜 合征、1型和2型Hermansky-Pudlak綜合征、Zellweger綜合征、肢近端型點狀軟骨發(fā)育不 良、常染色體隱性原發(fā)性高草酸鹽尿、Mohr Tranebjaerg綜合征、脊髓和bullar肌肉萎縮、 原發(fā)性ciliary diskenesia(Kartagener綜合征）、巨人癥和肢端肥大癥、乳漏、Addison 病、腎上腺性男性化、Cushing綜合征、酮酸中毒、原發(fā)性或繼發(fā)性醛留酮癥、Miller Dieker 綜合征、無腦回、運(yùn)動神經(jīng)元病、Usher綜合征、Wiskott-Aldrich綜合征、Optiz綜合征、 亨廷頓氏病、遺傳性胰腺炎、抗磷脂綜合征、重疊結(jié)締組織病、Sjdgren綜合征、僵人綜合 征、Brugada綜合征、Finnish型先天性腎臟綜合征、Dubin-Johnson綜合征、X連鎖的低磷 酸鹽血癥、Pendred綜合征、持續(xù)性胰島素低血糖嬰兒、遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥、無血漿 銅藍(lán)蛋白、嬰兒神經(jīng)元蠟樣質(zhì)脂褐質(zhì)沉積癥、假性軟骨發(fā)育不全和多發(fā)性骨骺、Stargardt 樣黃斑營養(yǎng)不良、X連鎖的進(jìn)行性神經(jīng)性腓骨肌萎縮癥、常染色體顯性色素性視網(wǎng)膜炎、 Wolcott-Rallison綜合征、Cushing病、肢節(jié)型肌營養(yǎng)不良癥、IV型粘多糖癥、遺傳性家族 性Finish淀粉樣病變、肝糖儲積病、肉瘤、慢性骨髓單核細(xì)胞性白血病、心肌病、面生殖發(fā) 育異常、Torsion病、亨廷頓氏病和脊髓小腦性共濟(jì)失調(diào)、遺傳性高同型半胱氨酸血癥、多 神經(jīng)病、低運(yùn)動神經(jīng)元病、色素性視網(wǎng)膜炎、血清陰性關(guān)節(jié)炎、間質(zhì)性肺纖維化、Raynaud癥 狀、Wegner 氏肉芽腫、preoteinuria、CDG-Ia、CDG-Ib、CDG-Ic、CDG-Id、CDG-Ie、CDG-If、 CDG-IIa、CDG-IIb、CDG-IIc、CDG-IId、Ehlers-Danlos 綜合征、多發(fā)性外生骨疣、Griscelli 綜合征（1型或2型）或X連鎖的非特異性智力遲鈍。此外，代謝功能障礙還可以包括溶 酶體貯積癥，例如但不限于：費波瑞病、I型粘多糖病、法伯氏病、高歇氏病、GM1-神經(jīng)節(jié) 苷脂沉積病、泰-薩二氏病、山德霍夫氏病、GM2活化因子病、克拉伯病、異染性腦白質(zhì)營 養(yǎng)不良、尼曼-匹克病（A、B和C型）、V型粘多糖?。⊿cheie disease)、II型粘多糖病 (Hunter disease)、IV型粘多糖?。⊿anfilippo disease)、莫奎歐氏癥、VI型粘多糖病 (Maroteaux-Lamy disease)、透明質(zhì)酸酶缺乏癥、天冬氨酰葡萄糖胺尿癥、巖藻糖代謝病、 甘露糖苷貯積癥、辛德勒病、I型唾液腺病、龐貝氏癥、骨密質(zhì)發(fā)育不全、蠟樣脂褐質(zhì)沉積癥、 膽固醇酯沉積病、沃爾曼病、多種硫酸酯酶缺乏癥、半乳糖涎酸貯積癥、粘脂沉積癥 和IV型）、胱氨酸病、唾液酸貯積功能障礙、具有Marinesco-Sjdgren綜合征的乳糜微滴滯 留病、Hermansky-Pudlak 綜合征、Chediak-Higashi 綜合征、Danon 氏病或 Geleophysic 發(fā) 育不良。
[0213]代謝功能障礙的癥狀是多種多樣的，可以包括一種或多種的例如貧血、疲勞、易 怒、低血小板、肝腫大、脾腫大、骨骼衰弱、肺損傷、感染（例如，胸腔感染或肺炎）、腎損傷、 進(jìn)行性腦損害、癲癇發(fā)作、超厚胎糞、咳嗽、哮鳴、過多的唾液或粘液產(chǎn)生、呼吸短促、腹痛、 腸閉塞、繁殖力問題、鼻息肉、指甲/趾甲和皮膚的增生性病變、手足痛、血管角質(zhì)瘤、少汗、 角膜和晶狀體渾濁、白內(nèi)障、二尖瓣脫垂和/或回流、心臟擴(kuò)大癥、不耐低溫、行走困難、吞 咽困難、進(jìn)行性視力喪失、進(jìn)行性聽力喪失、張力減退、巨舌、反射消失、下腰痛、睡眠呼吸暫 停、端坐呼吸、嗜睡、脊柱前彎癥或脊柱側(cè)凸?？梢岳斫?，由于缺陷或缺少的蛋白質(zhì)和導(dǎo)致的 疾病表型（例如，代謝功能障礙的癥狀表現(xiàn)）的不同性質(zhì)，給定的功能障礙一般將只表現(xiàn)出 特定功能障礙的特征性癥狀。例如，患法布里?。‵abry disease)的患者可以表現(xiàn)出上述 癥狀特定子集，例如但不限于不耐低溫、角膜旋轉(zhuǎn)、疼痛、皮膚發(fā)紅、惡心或腹瀉。患有高歇 氏病的患者可以表現(xiàn)出脾腫大、肝硬化、抽搐、張力亢進(jìn)、窒息、骨質(zhì)疏松或皮膚褪色。
[0214] 除了施用一種或多種本文描述的脫帽的分子外，還可以通過正確的營養(yǎng)和維生素 (例如，輔助因子療法）、物理療法和疼痛藥物治療代謝功能障礙。
[0215] 根據(jù)給定的代謝功能障礙的特定性質(zhì)，患者可以在任何年齡表現(xiàn)出這些癥狀。在 許多情況下，癥狀可以出現(xiàn)于兒童期或早成年期。例如，法布里?。‵abry disease)的癥狀 可以出現(xiàn)于較早的年齡段，例如10歲或11歲。
[0216] 在本文中，"處于出現(xiàn)代謝功能障礙的風(fēng)險"的對象是這樣的對象，所述對象具有 出現(xiàn)功能障礙的傾向，即，由于酶突變的結(jié)果導(dǎo)致出現(xiàn)代謝功能障礙的遺傳傾向，例如酸性 a葡萄糖苷酶、a半乳糖苷酶、a -L-艾杜糖苷酸酶、0 -D-半乳糖苷酶、0 -葡萄糖苷酶、 氨基己糖苷酶、P-D-甘露糖苷酶、a-L-巖藻糖苷酶、芳基硫酸酯酶B、芳基硫酸酯酶 A、a -N乙酰氨基半乳糖苷酶、天冬氨酰氨基葡糖苷酶、艾杜糖酸-2-硫酸酯酶、a -葡萄糖 胺-N-乙酰轉(zhuǎn)移酶、0 -D-葡萄糖酸酶、透明質(zhì)酸酶、a -L-甘露糖苷酶、a -神經(jīng)氨酸苷酶、 磷酸轉(zhuǎn)移酶、酸性脂肪酶、酸性神經(jīng)酰胺酶、神經(jīng)磷脂酶、硫酯酶、組織蛋白酶K和脂蛋白脂 肪酶。顯而易見的，"處于出現(xiàn)代謝功能障礙的風(fēng)險"的對象不是目標(biāo)物種中的所有對象。
[0217] "懷疑具有功能障礙"的對象是這樣的對象，所述對象具有一種或多種代謝功能障 礙的癥狀，例如本文描述的任何功能障礙的癥狀
[0218] 藥物組合物和治療方法
[0219] 具有脫帽的M6P殘基的靶分子可以整合到含有治療有效量的分子和一種或多種 佐劑、賦形劑、載體和/或稀釋劑的藥物組合物中?？山邮艿南♂寗?、載體和賦形劑通常不 會負(fù)面的影響受體的內(nèi)穩(wěn)態(tài)（例如，電解質(zhì)平衡）。可接受的載體包括生物可兼容的、惰 性的或生物可吸收的鹽、緩沖試劑、寡糖或多糖、聚合物、改善粘性的試劑、防腐劑等。一 個示例性的載體是生理鹽溶液（0.15M NaCl，pH 7.0至7. 4)。另一個示例性的載體是 50mM磷酸鈉，100mM氯化鈉。制備和施用藥物組合物的其他細(xì)節(jié)可見于例如Remington' s Pharmaceutical Sciences(Maack Publishing Co., Easton, Pa.)中。組合物中還可以整合 補(bǔ)充的活性化合物。
[0220] 含具有脫帽的M6P殘基的分子組合物的施用可以使系統(tǒng)性的或局部的。藥物組合 物可以如下制備使得它們適合不經(jīng)腸道的和/或經(jīng)腸道的施用。
[0221] 特定的施用方式包括皮下、靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、腹腔內(nèi)、透皮的、鞘內(nèi)的、口腔的、直腸 的、臉頰的、局部的、鼻腔的、眼的、關(guān)節(jié)內(nèi)的、動脈內(nèi)的、蛛網(wǎng)膜下的、支氣管的、陰道的和子 宮內(nèi)的施用。
[0222] 施用可以是周期性的注射藥物組合物的大藥丸（bolus)，或者可以通過外部 (例如，IV袋）或內(nèi)部（例如，生物可侵蝕的植入物、生物人工器官或植入后改變的N糖 基化分子生產(chǎn)細(xì)胞的克?。┑膬Σ圻M(jìn)行靜脈內(nèi)或腹腔內(nèi)不間斷或持續(xù)的施用。參見例 如美國專利號4, 407, 957、5, 798, 113和5, 800, 828。藥物組合物的施用可以使用合適 的遞送手段實現(xiàn)，例如：泵（參見例如，Annals of Pharmacotherapy, 27:912(1993); Cancer, 41:1270 (1993) ;Cancer Research, 44:1698 (1984));微膠囊（參見例如，美國專利 號4, 352, 883 ;4, 353, 888和5, 084, 350);連續(xù)釋放的聚合物植入物（參見例如，Sabel，美 國專利號4, 883, 666);大膠囊（參見例如，美國專利號5, 284, 761、5, 158, 881、4, 976, 859 和4, 968, 733,和公開的PCT專利申請TO92/19195、TO 95/05452);皮下、靜脈內(nèi)、動脈內(nèi)、肌 肉內(nèi)或其他合適位點的注射；或口服施用，以膠囊、液體、片劑、丸劑或緩釋配方的形式。
[0223] 不經(jīng)腸道的遞送系統(tǒng)的實例包括乙烯-醋酸乙烯酯共聚物顆粒、滲透泵、可植入 的灌注系統(tǒng)、泵遞送、封閉的細(xì)胞遞送、脂質(zhì)體遞送、針頭遞送的注射、無針頭注射、噴霧器、 煙霧器和透皮貼。
[0224] 適合不經(jīng)腸道的施用的配方通常含有改變的N糖基化分子的無菌含水制品，優(yōu)選 是與受體的血液等滲的（例如，生理鹽水）。配方可以存在單元劑量或多劑量形式。
[0225]適合口服施用的配方可以作為分散單元存在，例如膠囊劑、扁囊劑（cachet)、片劑 或潤喉糖，都含有預(yù)定量的改變的N糖基化分子；或作為含水液體或不含水液體中的懸浮 液存在，例如糖漿、酏劑、乳化液或飲劑（draught)。
[0226] 適合局部施用的具有脫帽的M6P殘基的分子可以作為例如：乳膏、噴霧、泡沫劑、 凝膠、油膏、軟膏或干擦劑（dry rub)施用給哺乳動物（例如，人類患者）。干擦劑可以在 施用位點再水合。此類分子還可以直接融合到（例如，浸泡到或干燥為）可以之后應(yīng)用于 局部的繃帶、紗布或貼劑上。此類分子還可以在局部施用的繃帶、紗布或貼劑上維持成半固 體、凝膠狀或完全的液體狀態(tài)（參見例如，美國專利號4, 307, 717)。
[0227] 藥物組合物的治療有效量可以按本領(lǐng)域技術(shù)人員可認(rèn)知的劑量方案向需要 的對象施用。例如，可以向?qū)ο笙到y(tǒng)性的施用組合物，按例如每次劑量0. 01 u g/kg至 10, 000 ii g/kg對象體重。在另一個實例中，劑量是從每次劑量1 ii g/kg至100 ii g/kg對象 體重。在另一個實例中，劑量是從每次劑量1 U g/kg至30 ii g/kg對象體重，例如從每次劑 量3 y g/kg至10 y g/kg對象體重。
[0228] 為了使治療效果最佳，可以首先以不同的劑量方案施用具有脫帽的M6P殘基的分 子。單元劑量和方案取決于這樣的因素，包括例如哺乳動物的物種、其免疫狀態(tài)、哺乳動物 的體重。通常，可以使用恰當(dāng)?shù)暮Y選測定監(jiān)控此類分子在組織中的水平，所述測定作為臨床 測試程序的一部分，例如確定給定治療方案的功效。
[0229] 具有脫帽的M6P殘基的分子的給藥頻率落入醫(yī)學(xué)實踐人員（例如，醫(yī)生或護(hù)士） 的技能和臨床判斷范圍內(nèi)。通常，施用方案是通過建立最佳施用參數(shù)的臨床試驗建立的。然 而，實踐人員可以根據(jù)對象的年齡、健康、體重、性別和醫(yī)學(xué)狀態(tài)，改變此類施用方案。給藥 頻率可以根據(jù)治療是否是預(yù)防性或治療性的而改變。
[0230] 可以通過例如細(xì)胞培養(yǎng)或?qū)嶒瀯游镏幸阎闹扑幏椒ǎ_定此類分子或其藥物 組合物的毒性和治療功效。這些方法可用于例如確定LD50(50%的群體致死的劑量）和 ED50 (在50%的群體中治療有效的劑量）。在毒性效應(yīng)和治療效應(yīng)之間的劑量比例是治療 指數(shù)，可表示為LD50/ED50比。表現(xiàn)出高治療指數(shù)的藥物組合物是優(yōu)選的。可以使用表現(xiàn) 出毒副作用的藥物組合物，但是應(yīng)該仔細(xì)的設(shè)計遞送系統(tǒng)，將此類混合物靶向到受影響組 織的位點，從而使對正常細(xì)胞（例如，非靶細(xì)胞）的潛在損傷最小化，從而降低副作用。
[0231] 從細(xì)胞培養(yǎng)測定和動物研究中獲得的數(shù)據(jù)可用于配置在恰當(dāng)對象（例如，人類患 者）中使用的劑量范圍。此類藥物組合物的劑量一般落入循環(huán)濃度范圍內(nèi)，包括沒有或只 有極小毒性的ED50。劑量可以在該范圍內(nèi)改變，取決于使用的制劑類型和利用的施用途徑。 對于所使用的本文描述的藥物組合物（例如，用于治療對象中的代謝功能障礙），可以從細(xì) 胞培養(yǎng)測定中初步估計治療有效劑量?？梢栽趧游锬Ｐ椭信渲瞥蛇@樣的劑量，所述劑量實 現(xiàn)了包括細(xì)胞培養(yǎng)中確定的IC50(即，實現(xiàn)了癥狀的半最大抑制的藥物組合物濃度）在內(nèi) 的循環(huán)血漿濃度范圍。此類信息可用于更精確的確定人中的有效劑量。可以通過例如高性 能的液相色譜測量血漿中的水平。
[0232] 如本文中定義的，具有脫帽的M6P殘基的分子的"治療有效量"是能夠在治療對象 中產(chǎn)生醫(yī)學(xué)上理想的結(jié)果（例如，減輕一種或多種代謝功能障礙的癥狀）的分子的量。治 療有效量（即，有效劑量）可以包括毫克或微克量的化合物/千克對象或樣品重量（例如， 約1微克/千克至約500毫克/千克，約100微克/千克至約5毫克/千克，或約1微克/ 千克至約50微克/千克）。
[0233] 對象可以是任何哺乳動物，例如人（例如，人類患者）或非人靈長類（例如，黑猩 猩、狒狒或猴子）、小鼠、大鼠、兔、荷蘭豬、沙鼠、田鼠、馬、家畜類（例如，牛、綿羊或山羊）、 狗、貓、或鯨。
[0234] 本文描述的分子或其藥物組合物可以作為與另一只治療的組合療法向?qū)ο笫┯茫?例如，代謝功能障礙（例如，溶酶體貯積癥）的治療。例如，組合療法可以不看向?qū)ο螅ɡ?如，人類患者）施用一種或多種其他試劑，所述試劑為患有或有風(fēng)險出現(xiàn)（或懷疑患有）代 謝功能障礙（例如，溶酶體貯積癥）的對象提供了治療益處。因而，化合物或藥物組合物和 一種或多種其他試劑可以同時施用?？蛇x的，可以首先施用分子，其次施用一種或多種其他 試劑，反之亦然。
[0235] 應(yīng)理解，處于在先治療特別毒性（例如，具有顯著副作用的代謝功能障礙治療）的 情況下時，本文描述的分子的施用可用于抵消和/或減少在先治療的量至足以產(chǎn)生相同或 改善的治療益處但沒有毒性的水平。
[0236] 本文描述的任何藥物組合物可以與施用說明一起包括在容器、包裝或分配器中。
[0237] 下文是實踐本發(fā)明的實施例。實施例不以任何方式視為對本發(fā)明范圍的限制。 實施例
[0238] 實施例1
[0239] 產(chǎn)牛具有高度磷酸化的N-聚糖的解脂耶氐酵母菌株
[0240] 為了上調(diào)解脂耶氏酵母的聚糖磷酸化，用2種額外的MNN4基因拷貝轉(zhuǎn)化MTLY60 菌株，每種基因拷貝位于分離的表達(dá)載體中。MNN4基因參與增加酵母中的聚糖磷酸化。圖 1含有克隆了 MNN4基因的pYLTmAX質(zhì)粒的示意圖，所述質(zhì)粒用于生產(chǎn)pYLTmAXMnn4,含有 處于TEF啟動子控制下的MNN4開放閱讀框。制備含有2種額外的MNN4基因拷貝的菌株， 1種處于hp4d啟動子的控制下，1種處于TEF1啟動子的控制下。從MTLY60A〇chl菌株 (1份MNN4野生型拷貝）、MTLY60 A 0Chl+Hp4dMNN4菌株（1WT+1份額外的MNN4拷貝）和 MTLY60 A 〇chl+Hp4dMNN4+TEFMNN4菌株（1WT+2份額外的MNN4拷貝）制備N聚糖，和通過 DNA測序儀輔助的（DSA)、熒光團(tuán)輔助的碳水化合物電泳（FACE)。參見Callewaert等人， Glycobiology 11(4):275-281(2001)?；趫D2中的結(jié)果，可以推斷含1份額外拷貝的菌 株中磷酸化峰是上調(diào)的，并出現(xiàn)雙磷酸化的峰。在含2份額外拷貝的菌株中，雙磷酸化的峰 高得多，而中性的Man8Gl〇嫩(： 2糖的峰低得多。
[0241] 實施例2
[0242]鑒別可以脫帽直菌來源的磷酸化聚糖中存在的加蓋（capping)的甘露糖殘某的 甘露糖苷酶活件
[0243] 酵母和絲狀真菌對糖的磷酸化導(dǎo)致甘露糖-磷酸-甘露糖二酯連接（圖3)。為了 獲得磷酸處于單酯連接中的結(jié)構(gòu)，需要能夠水解甘露糖-磷酸連接的甘露糖苷酶，使磷酸 保持連接在高甘露糖聚糖結(jié)構(gòu)的6位上。Chiba等人，Glycobiology，12(12) : 821-8 (2002) 指出，纖維單胞菌物種中的甘露糖苷酶能夠脫帽甘露糖。然而，Chiba等人僅部分的純化了 甘露糖苷酶蛋白，不能鑒別編碼蛋白質(zhì)的基因。
[0244] 從LMG細(xì)菌收藏中心獲得纖維化纖維單胞菌（Cellulosimicrobium cellulans， 也稱為溶黃噪呤厄菌（Oerskovia xanthineolytica)和藤黃節(jié)桿菌（Arthrobacter luteus))的分離物，并測試所生產(chǎn)的甘露糖苷酶活性。細(xì)菌在30°C和含甘露糖的基質(zhì)中生 長，向培養(yǎng)基中分泌甘露糖苷酶。從培養(yǎng)物獲得細(xì)菌上清液（SN)，通過將SN與分離的源自 實施例1所述過表達(dá)MNN4的菌株中的N-聚糖孵育，測試所需的甘露糖苷酶活性。在孵育 后，通過DSA-FACE測定聚糖（圖4)。
[0245] 在用SN處理后，聚糖獲得了額外的電荷，在電場中遷移更快，并移動到 electroferogram的左手側(cè)。如果這些跑動快的結(jié)構(gòu)確實是磷酸單酯取代的高甘露糖聚糖， 則它們的尺寸將比運(yùn)動到相同位置的中性產(chǎn)物更大。用磷酸酶處理此類聚糖可獲得跑得更 慢的中性寡糖。如圖5所示，用胎牛腸磷酸酶（CIP)處理，獲得了表現(xiàn)出較低電泳遷移率的 峰，證明磷酸是末端的且甘露糖是脫帽的。
[0246] 實施例3
[0247]部分鈍化和講一步鑒別甘露糖苷酶
[0248] 為了純化甘露糖苷酶，將纖維化纖維單胞菌生長在1L的培養(yǎng)基B(Bagiyan等人， Eur. J. Biochem. 249(1) :286-92(1997))或培養(yǎng)基 A(Chiba 等人，2002,見上文）上。參見表 1。之后，用40%和80%硫酸銨沉淀培養(yǎng)基，通過303^^6￡分析樣品。用含1禮0 &(：12的 20mM磷酸鈉緩沖液pH 6. 5透析硫酸銨級分，然后在源自MNN4過表達(dá)菌株（實施例1)的寡 糖上測試活性。
[0249]表1
[0250] 培養(yǎng)基組分
[0251]
【主權(quán)項】
1. 脫帽（uncapping)寡糖上的甘露糖-6-磷酸殘基的方法，所述方法包括： A) 提供所述具有甘露糖-1-磷酸-6-甘露糖連接的寡糖；和 B) 將所述寡糖與能夠水解所述甘露糖-1-磷酸-6-甘露糖殘基為磷酸-6-甘露糖的甘 露糖苷酶接觸，其中所述甘露糖苷酶是糖基水解酶家族的92成員。
2. 權(quán)利要求1的方法，其中所述甘露糖苷酶包括與SEQ ID NO: 50的1至774位殘基或 SEQ ID N0:50具有至少90%同一性的氨基酸序列。
3. 權(quán)利要求1的方法，其中所述甘露糖苷酶包括與SEQ ID NO: 50的1至774位殘基或 SEQ ID N0:50具有至少95%同一性的氨基酸序列。
4. 權(quán)利要求1的方法，其中所述甘露糖苷酶包括與SEQ ID NO: 50的1至774位殘基或 SEQ ID N0:50具有至少98%同一性的氨基酸序列。
5. 權(quán)利要求1的方法，其中所述氨基酸序列包括SEQ ID NO: 50的1至774位殘基或 SEQ ID NO:50〇
6. 權(quán)利要求5的方法，其中所述氨基酸序列進(jìn)一步包括，并位于SEQ ID NO:50的1至 774位殘基或SEQ ID NO: 50的N端，SEQ ID NO: 15的1-15位殘基。
7. 權(quán)利要求2-6任一項的方法，其中對于所述甘露糖苷酶，位于最小的催化中心的氨 基酸側(cè)鏈中的原子的三維蛋白坐標(biāo)落入距圖33中等價原子的坐標(biāo)丨.5 A偏差以內(nèi)。
8. 權(quán)利要求1-6中任一項的方法，其中所述甘露糖苷酶包括以下氨基酸序列，所述序 列具有（i) GVGXXGXGG基序，其中X是Gly，Ala, Ser，Thr或Cys ; (ii) VRXE基序，其中X是除 Pro以外的任何氨基酸；QiDX1YQGX2基序，其中乂1是1^11，lie, Val, Ala, Phe, Tyr或Met,其 中父2是1111'，561·或Asn;或（iv)⑶XGN，其中X可以是除Pro以外的任何氨基酸。
9. 權(quán)利要求1-6的任一項的方法，其中所述接觸步驟是使用純化的甘露糖苷酶、重組 的甘露糖苷酶、含有所述重組的甘露糖苷酶的細(xì)胞裂解物，或者含有所述重組的甘露糖苷 酶的真菌細(xì)胞來實施的。
10. 權(quán)利要求1-6的任一項的方法，其中所述寡糖與蛋白質(zhì)連接。
【專利摘要】本文通過能夠水解甘露糖-1-磷酸-6-甘露糖連接為磷酸-6-甘露糖的甘露糖苷酶描述了用于脫帽寡糖上的甘露糖-6-磷酸殘基的方法和遺傳改造過的細(xì)胞。
【IPC分類】C12P19-14
【公開號】CN104651428
【申請?zhí)枴緾N201510037529
【發(fā)明人】N.L.M.卡勒沃特, W.弗維肯, P.S.蒂爾斯, H.K.雷毛特, K.C.T.A.M.皮恩斯
【申請人】根特大學(xué), Vib研究所, 奧克西雷恩英國有限公司, Vrije布魯塞爾大學(xué)
【公開日】2015年5月27日
【申請日】2010年9月29日
【公告號】CA2775938A1, CN102712914A, EP2483399A2, US20130158239, WO2011039634A2, WO2011039634A3, WO2011039634A9