上述CLL-I被連接于治療化合物，例如細(xì)胞毒素或 細(xì)胞生長抑制劑。
[0133] 本發(fā)明還提供了包含本文所述CLL-I抗體和藥學(xué)可接受的賦形劑或載體的藥物 組合物。
[0134] 本發(fā)明提供了用于確定細(xì)胞是否表達(dá)CLL-I的方法，其包括：將CLL-I抗體（即， 具有上述活性或序列中的任意項的CLL-I抗體）與細(xì)胞接觸；檢測所述抗體與所述細(xì)胞的 結(jié)合，其中所述抗體與所述細(xì)胞的結(jié)合指示所述細(xì)胞表達(dá)CLL-I ;以及確定所述細(xì)胞是否 表達(dá)CLL-I。在一些實施方案中，所述方法還包括確定所述細(xì)胞是否表達(dá)⑶34。在一些實 施方案中，所述方法還包括確定所述細(xì)胞是否表達(dá)CD38。在一些實施方案中，所述方法還 包括確定所述細(xì)胞是否表達(dá)CD45。在一些實施方案中，所述細(xì)胞處于獲自個體的生物樣品 (例如，血液樣品或來自腫瘤或組織的組織活檢樣品）中。在一些實施方案中，通過FACS來 檢測抗體結(jié)合。
[0135] 本發(fā)明還提供了鑒定骨髓癌細(xì)胞（表達(dá)CLL-I的癌細(xì)胞，例如來自諸如AMUCML、 CMML、多發(fā)性骨髓瘤、漿細(xì)胞瘤或MDS等的骨髓增生性疾?。┗駽SC(例如，LSC或骨髓癌母 細(xì)胞）的方法，其包括：將CLL-I抗體（即，具有上述活性或序列中的任意項的CLL-I抗體） 與細(xì)胞接觸；檢測所述抗體與所述細(xì)胞的結(jié)合；以及在所述抗體結(jié)合所述細(xì)胞時鑒定CSC 或骨髓癌細(xì)胞。在一些實施方案中，所述骨髓癌細(xì)胞選自41^、01^、0麗1^、多發(fā)性骨髓瘤、漿 細(xì)胞瘤或MDS細(xì)胞。在一些實施方案中，所述方法還包括確定所述細(xì)胞是否表達(dá)CD45,以及 在所述細(xì)胞表達(dá)CD45時鑒定AML細(xì)胞。在一些實施方案中，所述方法還包括確定所述細(xì)胞 是否表達(dá)⑶34,以及在所述細(xì)胞表達(dá)⑶34時鑒定CSC。在一些實施方案中，所述細(xì)胞處于 來自個體的生物樣品中。在一些實施方案中，通過FACS來檢測抗體結(jié)合。
[0136] 本發(fā)明還提供了診斷個體骨髓增生性疾病（例如，AML、CML、MDS、CMML、多發(fā)性骨 髓瘤、漿細(xì)胞瘤骨髓纖維變性）的方法，其包括：將CLL-I抗體（即，具有上述活性或序列中 的任意項的CLL-I抗體）與來自個體的生物樣品接觸；檢測所述抗體與所述生物樣品中細(xì) 胞的結(jié)合；以及在所述抗體結(jié)合所述細(xì)胞時診斷所述個體的骨髓增生性疾病。在一些實施 方案中，所述生物樣品是血液樣品（例如，外周有核血細(xì)胞）或來自腫瘤或組織的組織活檢 樣品。在一些實施方案中，所述方法還包括確定所述細(xì)胞是否表達(dá)CD34。在一些實施方案 中，所述方法還包括在診斷出骨髓增生性疾病時確定個體的治療過程。在一些實施方案中， 所述治療過程包括給予有效劑量的CLL-I抗體。在一些實施方案中，在包含藥學(xué)可接受的 賦形劑的藥物組合物中給予所述有效劑量的CLL-I抗體。在一些實施方案中，所述方法還 包括，例如在診斷出骨髓增生性疾病或在個體以前被診斷出骨髓增生性疾病但接受了該疾 病的治療時，監(jiān)測個體。
[0137] 本發(fā)明還提供了抑制表達(dá)CLL-I細(xì)胞的存活（例如，降低細(xì)胞生長或分裂、介導(dǎo) ADC、介導(dǎo)⑶C)的方法，其包括，將CLL-I抗體（即，具有上述活性或序列中任一項的CLL-I 抗體）與所述細(xì)胞接觸，并抑制細(xì)胞存活。在一些實施方案中，所述接觸包括向診斷患有骨 髓增生性疾?。ɡ纾?1^、01^、1?3、0麗1^、多發(fā)性骨髓瘤、漿細(xì)胞瘤骨髓纖維變性）的個體 給予所述抗體（例如，在藥物組合物中）。在一些實施方案中，以有效抑制表達(dá)CLL-I的細(xì) 胞存活的劑量給予所述CLL-I抗體。
[0138] 本發(fā)明提供了治療個體中的骨髓增生性疾病（例如，與未治療的對照相比，降低 腫瘤生長或定植）的方法，其包括向所述個體給予有效劑量的CLL-I抗體（即，具有上述活 性或序列中任一項的CLL-I抗體），從而治療所述個體中的所述骨髓增生性疾病。在一些實 施方案中，所述骨髓增生性疾病選自41^、01^、1?3、0麗1^、多發(fā)性骨髓瘤、漿細(xì)胞瘤和骨髓纖 維變性。在一些實施方案中，在包含藥學(xué)可接受的賦形劑的藥物組合物中給予所述有效劑 量的CLL-I抗體。在一些實施方案中，所述個體已經(jīng)例如通過使用本文所述的CLL-I抗體 被診斷出患有骨髓增生性疾病。在一些實施方案中，所述治療方法還包括例如通過使用本 文所述CLL-I抗體來監(jiān)測所述個體中的細(xì)胞生長（例如，腫瘤生長或循環(huán)骨髓癌細(xì)胞）。在 一些實施方案中，所述CLL-I抗體被連接于治療化合物，例如細(xì)胞毒素或細(xì)胞生長抑制劑。
【附圖說明】
[0139] 圖1示出了使用來自3名不同AML患者#49 (A)、#50 (B)和#52(C)的原代細(xì)胞進(jìn) 行的補體依賴性細(xì)胞毒性（CDC)測定的結(jié)果。A和B示出，CLL-I抗體克隆M26具有IOng/ mL至100ng/mL的EC50。圖IC示出了 CLL-I抗體克隆M26、M31以及陰性對照E12(不相關(guān) 的抗體）和IgG的結(jié)果。M26和M31都具有10ng/mL至100ng/mL的EC50。
[0140] 圖2示出了 CLL-I抗體克隆在小鼠異種移植模型中的抗腫瘤效果。將HL60AML細(xì) 胞經(jīng)皮下注射至小鼠中。將小鼠分為5組，每組η = 6只小鼠：（I) IgG2a對照；（2) M5 ; (3) M13;(4)M26;和（5)M31。小鼠每周接受一次200 yg抗體，持續(xù)7周。對于所有治療組，相 對于對照組P〈〇. 05。
[0141] 圖3示出了 CLL-I抗體克隆在小鼠原位異種移植模型中的抗腫瘤效果。將AML細(xì) 胞經(jīng)靜脈內(nèi)注射至免疫功能受損的NSG(N0D/SCID/IL2受體γ鏈敲除）小鼠中。將小鼠分 為5組，每組η = 6只小鼠：（l)IgG2a對照；（2)Μ5 ;(3)Μ13 ;⑷Μ26 ;和（5)Μ31。小鼠每周 接受兩次200 μ g抗體，持續(xù)2周，并且在移植4周后處死。通過FACS來確定骨髓中的腫瘤 負(fù)荷（CD45+CLL-1+ 細(xì)胞）。
[0142] 圖4示出，CLL-I抗體-藥物綴合物（ADC)抑制AML干細(xì)胞的集落形成，但不抑制 正常造血干細(xì)胞（⑶34+HSC)的集落形成。圖4A示出，接種的⑶34+HSC在抗體-藥物綴合 物以陰性對照水平（無抗體或抗體-藥物綴合物）存在下形成集落。圖4B示出，對于接種 的總PBMC，AML癌癥干細(xì)胞（CSC)在與皂草素綴合的CLL-I抗體M26存在下具有比陰性對 照（無抗體或抗體-藥物綴合物）低80 %的集落形成。
[0143] 圖5示出，CLL-I抗體克隆M26、M31和G4(還有經(jīng)標(biāo)記的31. G4)以小鼠形式和 嵌合人（Chi)形式與人PBMC結(jié)合。陰性對照包括每個CLL-I抗體相應(yīng)的但是對不相關(guān)的 抗原具有特異性的IgG。單核細(xì)胞分離自PBMC樣品，并且根據(jù)CD89 (粒細(xì)胞）、CD14 (單核 細(xì)胞和粒細(xì)胞）、CD3 (淋巴細(xì)胞）和CD19 (B細(xì)胞）的表達(dá)使用FACS來表征細(xì)胞。對于各 CLL-I抗體，以從左至右的順序示出了每個群體CLL-I陽性染色的百分比。
[0144] 圖6示出，CLL-I抗體克隆M26、M31和G4(經(jīng)標(biāo)記的31G4)以原代小鼠形式和嵌 合人（Chi)形式與食蟹猴PBMC結(jié)合。陰性對照包括每個CLL-I抗體相應(yīng)的但是對不相關(guān) 的抗原具有特異性的IgG。單核細(xì)胞分離自PBMC樣品，并且根據(jù)CD3 (淋巴細(xì)胞）、CD19 (B 細(xì)胞）、CD14 (粒細(xì)胞）、CD14 (單核細(xì)胞）和CD89 (粒細(xì)胞）的表達(dá)使用FACS來表征細(xì)胞。 對于各CLL-I抗體，以從左至右的順序示出了每個群體CLL-I陽性染色的百分比。
[0145] 圖7示出，小鼠 CLL-I和嵌合人CLL-I都對CLL-I轉(zhuǎn)染的293細(xì)胞具有體外抗 體-藥物綴合物（ADC)活性。圖7A示出了小鼠 CLL-I抗體克隆M26、M31和G4(31G4)相比 陰性對照小鼠 IgG2a的結(jié)果。圖7B示出了相應(yīng)的嵌合人CLL-I抗體克隆的結(jié)果。
[0146] 圖8示出，嵌合人CLL-I抗體克隆M26、M31和G4(31G4)介導(dǎo)對經(jīng)CLL-I轉(zhuǎn)染的 293細(xì)胞的抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性（ADCC)。ChiM26、ChiM31和Chi31G4的EC50分 別是 79、143 和 105。
[0147] 圖9示出了 CLL-I抗體克隆在小鼠異種移植模型中的抗腫瘤效果。在第1天輻照 N0D/SCID小鼠，并且在第0天將HL60細(xì)胞注射至尾靜脈（每只小鼠3 X IO6個細(xì)胞）。將 小鼠分為3組，每組η = 6只小鼠：（DhuIgG對照；（2)M26 ; (3)ChiM31。小鼠在過程的22 天中接受了 8次抗體注射（200 μ g)，并且在第26天處死。通過FACS來確定骨髓中的腫瘤 負(fù)荷。圖9A示出了 huCD45+CD33+AML細(xì)胞的百分比，并且圖9B示出了 huCD45+CLL-l+AML CSC的百分比。
[0148] 圖10示出了 CLL-I抗體克隆在小鼠異種移植模型中的抗腫瘤效果。在第1天輻照 N0D/SCID小鼠，并且在第0天將OCI AML-5細(xì)胞注射至尾靜脈（每只小鼠5 X IO6個細(xì)胞）。 將小鼠分為 5 組，每組η = 6 只小鼠：（l)huIgG對照；（2)M26 ;(3)ChiM26 ;(4)ChiM31 ;(5) ChiG4。小鼠在19天的過程中接受了 8次抗體注射（200 μ g)，并且在第24天后處死。通過 FACS來確定骨髓中的腫瘤負(fù)荷。圖IOA示出了 hu⑶45+⑶33+AML細(xì)胞的百分比。圖IOB示 出了 hu⑶45+⑶33+AML細(xì)胞的IoglO百分比，以觀察結(jié)果間的更好的解析度。該數(shù)據(jù)示出， 所有4種受試的CLL-I抗體都有效地降低了腫瘤負(fù)荷，并且M26、ChiM26和ChiM31具有最 大的抗腫瘤效果。
[0149] 發(fā)明詳述
[0150] I.介紹
[0151] 本文提供了具有多種有利性質(zhì)的CLL-I特異性抗體。這樣的抗體基于以下標(biāo)準(zhǔn)中 的至少一種來選擇：
[0152] ?在皮摩爾至納摩爾范圍內(nèi)的對人CLL-I的親和力；
[0153] ?與獲自AML患者的相對較高百分比的樣品結(jié)合（例如，相比X357CLL-1抗體或 X1057CLL-1抗體更高百分比的AML患者，或至少50%的AML患者樣品）；
[0154] ?與AML患者樣品中相對較高百分比的細(xì)胞（例如外周血單核細(xì)胞（PBMC))結(jié)合 (例如，相比X357CLL-1抗體或X1057CLL-1抗體更高百分比的細(xì)胞，或AML患者樣品中至少 50 %的細(xì)胞）；
[0155] ?在抗體-藥物綴合物（ADC)細(xì)胞毒性測定中具有活性；
[0156] ?在補體依賴性細(xì)胞毒性（CDC)測定中具有活性；
[0157] ?在抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性（ADCC)測定中具有活性；
[0158] ?體外或體內(nèi)（異種移植小鼠模型）的抗腫瘤活性；
[0159] ?與AML細(xì)胞特異性結(jié)合并且在AML細(xì)胞中具有ADC活性，但是不作用于正常HSC ;
[0160] ?與動物模型的物種同源物（例如，食蟹猴CLL-1)結(jié)合；
[0161] ?抗體在嵌合人形式中保留有上述活性。
[0162] 本文所描述的CLL-I抗體并非都具備所有這些選擇的性質(zhì)，但是將例如根據(jù)序列 在下文中進(jìn)行進(jìn)一步的描述。本發(fā)明的CLL-I抗體可用于檢測表達(dá)CLL-I的細(xì)胞，例如，用 于診斷或監(jiān)測個體中表達(dá)CLL-I的癌細(xì)胞，或者用于治療表達(dá)CLL-I的癌癥，例如AML。
[0163] II.定義
[0164] 除非另有定義，否則本文使用的技術(shù)術(shù)語和科學(xué)術(shù)語具有與本領(lǐng)域技術(shù)人 員所通常理解的相同含義。參見，例如Lackie, DICTIONARY OF CELL AND MOLECULAR BIOLOGY, Elsevier (第四版，2007) ;Sambrook 等，MOLECULAR CLONING, A LABORATORY MANUAL, Cold Springs Harbor 出版社（Cold Springs Harbor, NY 1989)。術(shù)語"一（a/an)" 旨在意為"一或多"。當(dāng)處于所敘述的步驟或要素之前時，術(shù)語"包含（comprise)"及其變 體形式（如comprises和comprising)旨在意為增加額外步驟或要素是任選的，并且是不 被排除的。與本文所述的方法、裝置和材料相似或相同的任何方法、裝置和材料都可用于實 施本發(fā)明。提供了以下定義以便于理解本文頻繁使用的某些術(shù)語，并且不旨在限制本公開 內(nèi)容的范圍。
[0165] C型凝集素樣分子I (CLL-I)，也被稱為CLEC12A、DCAL-2和MICL，是一種II型膜 蛋白（ITIM結(jié)構(gòu)域-TM結(jié)構(gòu)域-莖結(jié)構(gòu)域-凝集素樣結(jié)構(gòu)域）。CLL-I的胞外結(jié)構(gòu)域是 高度糖基化的，并且其僅在骨髓系的細(xì)胞中表達(dá)。CLL-I還表達(dá)于AMUMDS和CML細(xì)胞上。 CLL-I表達(dá)可用于區(qū)分不表達(dá)CLL-I的正常造血干細(xì)胞（HSC)和表達(dá)CLL-I的白血病干細(xì) 胞（LSC)。LSC是白血病患者中導(dǎo)致癌細(xì)胞產(chǎn)生和癌癥復(fù)發(fā)的⑶34+細(xì)胞。參見Bakker等， (2004)Cancer Res. 64:8443〇
[0166] 許多物種的CLL-I的核苷酸序列和蛋白質(zhì)序列是已知的。例如，人序列可 在Genbank登錄號AF247788.1(編碼序列在SEQ ID NO: 1中示出）和Uniprot登錄號 Q5QGZ9(SEQ ID NO: 2)處找到。對于SEQ ID NO: 2所示的人CLL-I蛋白，胞外結(jié)構(gòu)域包含約 第65位至265位的氨基酸，跨膜結(jié)構(gòu)域包含約第44位至64位的氨基酸，并且細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu) 域包含約第1位至43位的氨基酸。人CLL-I的莖結(jié)構(gòu)域跨越第65位至139位氨基酸，并 且C凝集素結(jié)構(gòu)域跨越第140位至249位氨基酸，這二者都參考SEQ ID N0:2所示的序列。 本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解，可任選地對CLL-I變體（例如物種同源物、等位基因變體等）進(jìn)行 比對，例如用于鑒定保守的殘基和結(jié)構(gòu)域。
[0167] 在本文中，所有的術(shù)語"CLL-1特異性抗體"、"抗CLL-I抗體"、"CLL-1抗體"和"抗 CLL-1"是同義的，表示特異性結(jié)合CLL-I的抗體，包括CLL-I的各種糖基化形式。本文描 述的CLL-I抗體特異性結(jié)合例如某些癌細(xì)胞表面上表達(dá)的CLL-I多肽，但是不與HSC結(jié)合。 如在下文中更詳細(xì)描述的，本發(fā)明的抗CLL-I抗體可結(jié)合表達(dá)CLL-I的細(xì)胞、結(jié)合相比其他 AML靶向抗體更大百分比的AML細(xì)胞、抑制AML細(xì)胞增殖并且介導(dǎo)AML的破壞。
[0168] "CLL-1相關(guān)疾病"（或CLL-I有關(guān)疾病、CLL-I疾病、CLL-I相關(guān)病況或病癥等）是 指與CLL-I細(xì)胞表面表達(dá)相比標(biāo)準(zhǔn)對照（例如，正常的細(xì)胞、非疾病細(xì)胞、非癌細(xì)胞）中的 CLL-I表達(dá)而升高或降低相關(guān)的病況和病癥。升高的CLL-I水平與癌細(xì)胞，特別是白血病例 如AML (急性骨髓性白血?。DS (骨髓增生異常綜合征）和CML (慢性骨髓性白血?。┮?及造血性CSC (例如LSC)有關(guān)。
[0169] 術(shù)語"抗體"是指多肽結(jié)構(gòu)，例如，免疫球蛋白、綴合物或其保留了抗原結(jié)合活性的 片段。該術(shù)語包括但不限于衍生自人其他哺乳動物細(xì)胞的同種型類型IgA、IgD、IgE、IgG* IgM的多克隆抗體或單克隆抗體，包括天然形式或遺傳改造形式，例如人源化的、人的、單鏈 的、嵌合的、合成的、重組的、雜合的、突變的、移植的以及體外生成的抗體。該術(shù)語涵蓋綴 合物，包括但不限于包含免疫球蛋白部分的融合蛋白質(zhì)（例如嵌合抗體或雙特異性抗體或 scFv' s)和片段，例如 Fab、F(ab'）2、Fv、scFv、FcU dAb 和其他組合物。
[0170] 示例性的免疫球蛋白（抗體）結(jié)構(gòu)單元包括四聚體。每個四聚體由兩個相同的 多肽鏈對組成，每對都具有一條"輕"鏈（約25kD)和一條"重"鏈（約50kD至70kD)。每 條鏈的N端都限定約100至110或更多個氨基酸的可變區(qū)，其主要負(fù)責(zé)抗原識別。術(shù)語 可變輕鏈（')和可變重鏈（V h)分別指這些輕鏈和重鏈?？勺儏^(qū)包含抗體的抗原結(jié)合區(qū) (或其功能等價物），并且對結(jié)合的特異性和親和力最為重要。參見Paul, Fundamental Immunology (2003)。
[0171] 抗體可作為完整的免疫球蛋白存在，或作為任意數(shù)量良好表征的具有特異性抗原 結(jié)合活性的片段存在。為了清楚的目的，具有重鏈和輕鏈的四聚體抗體在本文中稱為"完 整的免疫球蛋白"，并且可為天然存在的、多克隆的、單克隆的或重組產(chǎn)生的?？赏ㄟ^用多 種肽酶消化來產(chǎn)生片段。胃蛋白酶在鉸鏈區(qū)中二硫鍵連接的下方消化抗體，產(chǎn)生Fab的二 聚體F(ab)' 2, Fab本身是通過二硫鍵與Vh-ChI連接的輕鏈。F(ab)'2可在溫和條件下還 原而破壞鉸鏈區(qū)中的二硫鍵連接，從而將F (ab)'2二聚體轉(zhuǎn)化為Fab'單體。Fab'單體本 質(zhì)上是具有部分鉸鏈區(qū)的Fab。雖然各抗體片段依據(jù)完整抗體的消化來定義，但是本領(lǐng)域 技術(shù)人員將理解，這些片段可以化學(xué)方法或通過使用重組DNA方法來從頭合成。因此，本 文所用術(shù)語抗體還包括通過改造整個抗體產(chǎn)生的抗體片段，或使用重組DNA方法從頭合成 的抗體片段，或使用菌體展示文庫鑒定的抗體片段（參見例如，McCafferty等，Nature 348:552-554(1990))〇
[0172] 本文所用，術(shù)語"Fv"是指一價或二價的可變區(qū)片段，并且可僅涵蓋可變區(qū)（例如， \和/或V H)，以及較長的片段，例如Fab、Fab'或F(ab'）2，其也包含Q和/或(^1。除非另 有說明，否則術(shù)語"Fc"是指包含C hI和CH2區(qū)的重鏈單體或二聚體。
[0173] 單鏈Fv(ScFv)是指包含通過諸如肽連接子等連接子連接的多肽。ScFv 還可用于形成串聯(lián)（或二價）scFv或雙體。串聯(lián)scFv和雙體的生產(chǎn)和性質(zhì)在例如Asano等， (2011)J Biol. Chem. 286:1812 ;Kenanova 等，（2010)Prot Eng Design Sel 23:789 ;Asano 等，（2008)Prot Eng Design Sel 21:597 中有描述。
[0174] 雙特異性抗體或二價抗體是指對兩種不同靶標(biāo)抗原或靶標(biāo)表位具有特異性的抗 體。例如，一個抗體臂（V區(qū)）可對CLL-I具有特異性，同時另一個臂可對另一種靶標(biāo)（例 如白血病靶標(biāo)或AML靶標(biāo)，或招募效應(yīng)細(xì)胞的靶標(biāo)如CD3)具有特異性。雙特異性抗體還可 具有這樣的性質(zhì)，一個臂對第一 CLL-I表位具有特異性，同時另一個臂對第二CLL-I表位具 有特異性。雙特異性抗體可為Fv區(qū)或者完整免疫球蛋白或嵌合免疫球蛋白。雙特異性抗 體在 Lum 等，（2011)BioDrugs 25:365 和 Mabry 等，（2010) IDrugs 13:543 中有描述。
[0175] "單克隆抗體"是指對抗原上的指定表位具有單一結(jié)合特異性和親和力的抗體克 隆制備物。"多克隆抗體"是指針對單一抗原產(chǎn)生的，但是具有不同結(jié)合特異性和親和力的 抗體制備物。
[0176] 本文所用"V區(qū)"是指抗體可變區(qū)結(jié)構(gòu)域，其包含框架1、⑶R1、框架2、⑶R2和框架 3區(qū)段，包含⑶R3和框架4,其在B細(xì)胞分化期間因重鏈和輕鏈V區(qū)基因重排而附加至V區(qū) 段的區(qū)段。
[0177] 本文所用"互補決定區(qū)（CDR) "是指每條鏈中的三個高變區(qū)，其間插于由輕鏈和重 鏈可變區(qū)建立的四個"框架"區(qū)。CDR主要負(fù)責(zé)結(jié)合抗原表位。每條鏈的CDR-般稱為從N 末端開始編號的⑶R1、⑶R2和⑶R3,并且也一般通過具體⑶R所位于的鏈來鑒定。因此， Vh CDR3位于發(fā)現(xiàn)其的抗體重鏈的可變結(jié)構(gòu)域中，而' CDRl是來自發(fā)現(xiàn)其的抗體輕鏈可變 結(jié)構(gòu)域的⑶Rl。
[0178] 在物種內(nèi)，不同的輕鏈或重鏈的框架區(qū)序列相對保守?？贵w框架區(qū)，即所組成性輕 鏈和重鏈的組合框架區(qū)，在三維空間中起排布并對齊⑶R的作用。
[0179] 可使用多種本領(lǐng)域公知的定義來確定CDR和框架區(qū)的氨基酸序列，例如， Kabat、Chothia、國際免疫遺傳學(xué)數(shù)據(jù)庫（MGT)和AbM(參見例如，Johnson等，同 上；Chothia&Lesk, (1987) J. Mol. Biol. 196,901-917 ;Chothia 等，（1989)Nature 342, 877-883 ;Chothia 等，（1992) J. Mol. Biol. 227, 799-817 ;A1-Lazikani 等，J. Mol. Biol 1997, 273(4))。對使用Kabat系統(tǒng)來定位CDR有幫助的指南可在可用網(wǎng)址bioinf. org. uk/abs處找到?？乖M合位點的定義在以下文獻(xiàn)中也有描述：Ruiz等，Nucleic Acids Res. ,28,219-221 (2000);以及 Lefranc Nucleic Acids Res. Jan I ;29 (I) :207-9 (2001); MacCallum 等，J. Mol. Biol.，262:732-745(1996);以及 Martin 等，Proc. Natl Acad. Sci. USA，86,9268-9272(1989) ;Martin 等，Methods Enzymol·，203:121-153,（1991) ;Pedersen 等，Immunomethods, 1，126，（1992);以及 Rees 等，Sternberg M. J. E. (ed.)，Protein Structure Prediction. Oxford University Press, Oxford, 141-172 (1996)〇
[0180] "嵌合抗體"是指這樣的抗體，其中（a)恒定區(qū)或其一部分被改變、替換或交換，使 得抗原結(jié)合位點（可變區(qū)、CDR或其一部分）與不同的或改變的類型、效應(yīng)子功能和/或 物種的恒定區(qū)連接；或（b)可變區(qū)或其一部分被用具有不同或改變的抗原特異性的可變區(qū) (例如，來自不同物種的CDR或框架區(qū)）來改變、替換或交換。嵌合抗體可包含可變區(qū)片段， 例如重組抗體包含兩個Fab區(qū)或Fv區(qū)或scFv。所上文所示，嵌合還可包含來自與附加的 Fv區(qū)不同的來源的Fc區(qū)。在一些情況下，嵌合抗體包含F(xiàn)v區(qū)內(nèi)的嵌合性。這樣的嵌合抗 體的實例為，其中FR和CDR來自不同來源的人源化抗體。
[0181] 人源化抗體是指其中獲自非人抗體Vh區(qū)和區(qū)的抗體結(jié)合環(huán)（即，CDR)被移植 到人框架序列中的抗體。人源化