材料均可用于實(shí)踐或測(cè)試本發(fā)明。在描述實(shí)施 方案及權(quán)利要求書時(shí)，會(huì)根據(jù)下文所述的定義使用某些術(shù)語。
[0043] 除非另有說明，否則如本文所使用的單數(shù)形式"a"、"an"和"the"包括復(fù)數(shù)指代。 因此，例如，"所述方法"包括本文所述類型的一種或多種方法和/或一個(gè)或多個(gè)步驟，和/ 或其會(huì)在本領(lǐng)域技術(shù)人員閱讀本公開內(nèi)容之后而變得明了。
[0044] 如本文所使用的術(shù)語"約"意指在某一值的統(tǒng)計(jì)學(xué)上有意義的范圍內(nèi)，例如所述濃 度范圍、時(shí)間范圍、分子量、溫度或pH。此類范圍可在所給定的值或范圍的一個(gè)數(shù)量級(jí)內(nèi)，通 常在20%內(nèi)，更通常在10%內(nèi)，甚至更通常在5%內(nèi)或在1%內(nèi)。有時(shí)，此類范圍可在用于 測(cè)量和/或測(cè)定給定值或范圍的標(biāo)準(zhǔn)方法的典型實(shí)驗(yàn)誤差內(nèi)。術(shù)語"約"所涵蓋的允許變 化會(huì)取決于所研宄的具體系統(tǒng)，并且可容易被本領(lǐng)域技術(shù)人員所理解。無論何時(shí)在本申請(qǐng) 內(nèi)列舉一個(gè)范圍，所述范圍內(nèi)的每個(gè)整數(shù)也被涵蓋作為本發(fā)明的實(shí)施方案。
[0045] 應(yīng)注意，在本公開內(nèi)容中，諸如"包括"、"包含"等術(shù)語可具有在美國專利法中所歸 屬于它們的含義；例如，它們可意指"包括"等。此類術(shù)語是指包括具體成分或成分組而不 排除任何其他的成分。諸如"基本上由……組成"等術(shù)語具有在美國專利法中所歸屬于它們 的含義，例如，它們?cè)试S包括不損害本發(fā)明的新穎或基本特征的其他成分或步驟，即，它們 排除損害本發(fā)明的新穎或基本的特征的其他未列舉的成分或步驟。術(shù)語"由……組成"具 有在美國專利法中所歸屬于它們的含義；也就是說，這些術(shù)語是封閉式的。因此，這些術(shù)語 是指包括具體成分或成分組并且排除所有其他成分。
[0046]如本文所使用的術(shù)語"糖"可以用于指多糖、寡糖或單糖。
[0047]如本文所使用的關(guān)于糖的術(shù)語"氧化度"是指每摩爾醛的糖重復(fù)單元摩爾比。糖 的氧化度可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)方法而測(cè)定。
[0048]如本文所使用的術(shù)語"綴合物"或"糖綴合物"是指與載體蛋白共價(jià)綴合的糖。本 發(fā)明的糖綴合物和包含其的免疫原性組合物可以包含一定量的游離糖。
[0049]如本文所使用的術(shù)語"游離糖"意指未與載體蛋白共價(jià)綴合但仍然存在于糖綴合 物組合物中的糖。所述游離糖可與綴合的糖-載體蛋白糖綴合物非共價(jià)締合（即，非共價(jià) 結(jié)合到綴合的糖-載體蛋白糖綴合物、吸附到綴合的糖-載體蛋白糖綴合物或截留于綴合 的糖-載體蛋白糖綴合物中或與其一起被截留）。術(shù)語"游離多糖"和"游離莢膜多糖"可 在本文中用于傳達(dá)關(guān)于糖綴合物的相同含義，其中所述糖分別是多糖或莢膜多糖。
[0050]如本文所使用的"綴合"是指借以使例如細(xì)菌莢膜多糖的糖與載體分子或載體蛋 白共價(jià)連接的過程?？筛鶕?jù)下文所述的方法或通過本領(lǐng)域內(nèi)已知的其他方法進(jìn)行綴合。綴 合增強(qiáng)了細(xì)菌莢膜多糖的免疫原性。
[0051]術(shù)語"個(gè)體"是指包括人類在內(nèi)的哺乳動(dòng)物，或指鳥、魚、爬行動(dòng)物、兩棲動(dòng)物或任 意其他動(dòng)物。術(shù)語"個(gè)體"還包括家庭寵物或研宄用動(dòng)物。家庭寵物和研宄用動(dòng)物的非限 制性實(shí)例包括：狗、貓、豬、兔、大鼠、小鼠、沙鼠、倉鼠、豚鼠、白鼬、猴、鳥、蛇、蜥蜴、魚、烏龜 和青蛙。術(shù)語"個(gè)體"還包括牲畜動(dòng)物。牲畜動(dòng)物的非限制性實(shí)例包括：羊駝、美洲野牛、駱 駝、牛、鹿、豬、馬、美洲蛇、騾、驢、綿羊、山羊、兔、馴鹿、牦牛、雞、鶴和火雞。
[0052] 糖綴合物
[0053] 本發(fā)明涉及制備包含與載體蛋白綴合的糖的糖綴合物的方法，所述方法特別通 過使用穩(wěn)定的硝酰基或氮氧自由基化合物將所述糖的伯醇選擇性氧化成醛，并且使用氧 化劑來進(jìn)行。在一方面，所述穩(wěn)定的硝酰基化合物是哌啶-N-氧基或吡咯烷-N-氧基化 合物。優(yōu)選地，所述化合物具有在氧化劑的存在下將伯醇選擇性氧化成醛而不過度氧化 成羧酸且不影響仲羥基的能力。在一方面，所述穩(wěn)定的硝?；衔锸菐в蠺EMPO或 PR0XYL(2, 2, 5, 5-四甲基-1-吡咯烷氧基）部分的分子。優(yōu)選地，所述分子具有在氧化劑 的存在下選擇性氧化伯醇以生成醛基而不影響仲羥基的能力。更優(yōu)選地，所述分子具有在 氧化劑的存在下選擇性氧化伯醇以生成醛基而不過度氧化成羧基的能力。在一個(gè)方面，所 述穩(wěn)定的硝?；衔镞x自TEMP0、2,2,6,6-四甲基_4_(甲基磺酰氧基）-1_哌啶氧基、 4_膦酰氧基-TEMPO、4-氧代-TEMPO、4-甲氧基-TEMPO、4-異硫氰酸基-TEMPO、4-(2-碘乙 酰氨基）_TEMP0自由基、4-羥基-TEMP0、4-氰基-TEMP0、4-羧基-TEMP0、4-(2-溴乙酰氨 基）-TEMP0、4-氨基-TEMP0、4-乙酰氨基-2, 2, 6, 6-四甲基哌啶1-氧基。優(yōu)選地，所述穩(wěn)定 的硝?；衔锸荰EMPO。在另一方面，所述穩(wěn)定的硝?；衔镞x自3 -DOXYL-5 a -膽 甾烷、5-D0XYL-硬脂酸、16-D0XYL-硬脂酸、5-D0XYL-硬脂酸甲酯、3-(氨基甲基）-PR0XYL、 3-氨甲酰基-PR0XYL、3-氨甲?；?2, 2, 5, 5-四甲基-3-吡咯啉-1-氧基、3-羧基-PR0XYL、 3-氰基-PR0XYL。在一個(gè)方面，所述氧化劑是帶有N-鹵代部分的分子。優(yōu)選地，所述分 子具有在硝?；衔锏拇嬖谙逻x擇性氧化伯醇的能力。在一個(gè)方面，所述氧化劑選自 N-氯代琥珀酰亞胺、N-溴代琥珀酰亞胺、N-碘代琥珀酰亞胺、二氯異氰尿酸、1，3, 5-三 氯-1，3, 5-三嗪-2, 4, 6-三酮、二溴異氰尿酸、1，3, 5-三溴-1，3, 5-三嗪-2, 4, 6-三酮、二 碘異氰尿酸以及1，3, 5-三碘-1，3, 5-三嗪-2, 4, 6-三酮。優(yōu)選地，所述氧化劑為N-氯代 琥珀酰亞胺。
[0054] 在一方面，本發(fā)明涉及制備包含與載體蛋白綴合的糖的糖綴合物的方法，所述 方法特別通過使用2, 2, 6, 6-四甲基-1-哌啶氧基自由基（TEMPO)、使用作為共氧化劑 (cooxidant)的N-氯代琥泊酰亞胺（NCS)將所述糖的伯醇氧化成醛來進(jìn)行。
[0055] 在本發(fā)明的糖綴合物中，所述糖選自多糖、寡糖和單糖，并且所述載體蛋白選自本 文進(jìn)一步描述或本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任意合適的載體。在一些實(shí)施方案中，所述糖是多 糖，尤其是細(xì)菌莢膜拖多糖，例如肺炎鏈球菌血清型l〇A(Pn-血清型10A)、Pn-血清型12F 或Pn-血清型33F。在一些此類實(shí)施方案中，所述載體蛋白是CRM 197。
[0056] 莢膜多糖可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)制備。例如，莢膜多糖可以由 多種血清型制備，例如肺炎鏈球菌的 1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、 19A、19F、22F、23F和33F。這些肺炎球菌綴合物通過分離過程而制備，并被配制成單劑量制 劑。例如，在一個(gè)實(shí)施方案中，每一肺炎球菌多糖血清型在大豆基培養(yǎng)基中生長。然后，通過 離心、沉淀、超濾和柱層析來純化各多糖。純化的多糖經(jīng)化學(xué)活化以使所述糖（即，活化的 糖）能夠與載體蛋白反應(yīng)。一旦活化，則每一莢膜多糖分別與載體蛋白綴合以形成糖綴合 物。在一個(gè)實(shí)施方案中，每一莢膜多糖與相同的載體蛋白綴合。多糖的化學(xué)活化及隨后與 載體蛋白的綴合可以通過常規(guī)手段而實(shí)現(xiàn)。參見例如第4, 673, 574、4, 902, 506、7, 709, 001 和7,955,605號(hào)美國專利。
[0057] 在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的糖綴合物具有約50kDa至約20, OOOkDa的分子量。 在另一實(shí)施方案中，所述糖綴合物具有約200kDa至約10, OOOkDa的分子量。在另一實(shí)施方 案中，所述糖綴合物具有約500kDa至約5, OOOkDa的分子量。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述糖綴 合物具有約1，OOOkDa至約3, OOOkDa的分子量。在其他實(shí)施方案中，所述糖綴合物具有約 600kDa 至約 2800kDa ;約 700kDa 至約 2700kDa ;約 1000kDa 至約 2000kDa ;約 1800kDa 至約 2500kDa ;約 llOOkDa 至約 2200kDa ;約 1900kDa 至約 2700kDa ;約 1200kDa 至約 2400kDa ;約 1700kDa 至約 2600kDa ;約 1300kDa 至約 2600kDa ;約 1600kDa 至約 3000kDa 的分子量。任 何上述范圍內(nèi)的任何整數(shù)也被涵蓋作為本發(fā)明的實(shí)施方案。
[0058] 本發(fā)明的糖綴合物的新穎特征還包括所述糖和得到的綴合物的分子量分布 (profile)、每個(gè)載體蛋白綴合的賴氨酸與共價(jià)連接到多糖的賴氨酸的數(shù)量的比率、作為糖 的重復(fù)單元的函數(shù)的載體蛋白與所述糖之間的共價(jià)鍵的數(shù)量、以及游離糖相對(duì)于總糖的相 對(duì)量。
[0059] 在另一實(shí)施方案中，所述多糖是源自腦膜炎奈瑟氏球菌（Neisseria meningitidi)的莢膜多糖。在一些此類實(shí)施方案中，所述莢膜多糖選自腦膜炎奈瑟氏球菌 的血清型A、B、C、W135、X和Y莢膜多糖。在一個(gè)此類實(shí)施方案中，所述莢膜多糖是血清型 C莢膜多糖。在另一此類實(shí)施方案中，所述莢膜多糖是血清型W135莢膜多糖。在另一此類 實(shí)施方案中，所述莢膜多糖是血清型Y莢膜多糖。
[0060] 在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的糖綴合物包括細(xì)菌莢膜多糖，其中所述莢膜多糖具 有10kDa至2, OOOkDa或50kDa至1，OOOkDa的分子量。在一些此類實(shí)施方案中，所述莢膜多 糖源自肺炎鏈球菌或腦膜炎奈瑟氏球菌。在一些此類實(shí)施方案中，所述莢膜多糖源自肺炎 鏈球菌，并選自血清型 1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9V、10A、11A、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F、 23F和33F莢膜多糖。在其他此類實(shí)施方案中，所述莢膜多糖源自腦膜炎奈瑟氏球菌并選自 血清型A、B、C、W135、X和Y莢膜多糖。
[0061] 在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了包含與載體蛋白共價(jià)綴合的莢膜多糖的糖綴合 物，其具有下列特征中的一個(gè)或多個(gè)：所述多糖具有50kDa至1，OOOkDa的分子量；所述糖 綴合物具有1，OOOkDa至3, OOOkDa的分子量；以及所述綴合物包含相對(duì)于總多糖少于約 45%的游離多糖。在一些實(shí)施方案中，所述多糖具有10kDa至2, OOOkDa的分子量。在一些 實(shí)施方案中，所述糖綴合物具有50kDa至20, OOOkDa的分子量。在其他實(shí)施方案中，所述糖 綴合物具有200kDa至10, OOOkDa的分子量。在其他實(shí)施方案中，所述綴合物包含相對(duì)于總 多糖少于約30 %、20 %、15 %、10 %或5 %的游離多糖?？梢詴r(shí)間函數(shù)的形式測(cè)量游離多糖 的量，例如在制備綴合物之后的10、20、30、40、50、60、70、80、90或120天之后或更久。
[0062] 在與糖綴合的載體蛋白中的賴氨酸殘基的數(shù)量可以表征為綴合的賴氨酸的范圍， 其可以摩爾比形式表示。例如，在其中CRM 197的4至15個(gè)賴氨酸殘基與糖共價(jià)連接的免疫 原性組合物中，綴合的賴氨酸與CRM197在糖綴合物中的摩爾比為約10:1至約40:1。在其中 CRM 197的2至20個(gè)賴氨酸殘基與糖共價(jià)連接的免疫原性組合物中，綴合的賴氨酸與CRM 197 在糖綴合物中的摩爾比為約5:1至約50:1。
[0063] 在一個(gè)實(shí)施方案中，綴合的賴氨酸與載體蛋白的摩爾比為約10:1至約25:1。在一 些此類實(shí)施方案中，所述載體蛋白為CRM 197。
[0064] 在一個(gè)實(shí)施方案中，糖：載體蛋白的比率（w/w)為0.2至4。在另一實(shí)施方案中， 糖：載體蛋白的比率（w/w)為1. 1至1. 7。在一些實(shí)施方案中，所述糖是細(xì)菌莢膜多糖，并且 糖：載體蛋白的比率（w/w)為0.2至4。在其他實(shí)施方案中，所述糖是細(xì)菌莢膜多糖，并且 糖：載體蛋白的比率（w/w)為1. 1至1. 7。在一些此類實(shí)施方案中，所述載體蛋白是CRM197。
[0065] 糖鏈與載體蛋白上的賴氨酸的連接頻率是表征本發(fā)明的糖綴合物的另一參數(shù)。例 如，在一個(gè)實(shí)施方案中，對(duì)于多糖的每1〇〇個(gè)糖重復(fù)單元，在載體蛋白與多糖之間存在至少 一個(gè)共價(jià)鍵。在一個(gè)實(shí)施方案中，對(duì)于多糖的每50個(gè)糖重復(fù)單元，在載體蛋白與多糖之間 存在至少一個(gè)共價(jià)鍵。在一個(gè)實(shí)施方案中，對(duì)于多糖的每25個(gè)糖重復(fù)單元，在載體蛋白與 多糖之間存在至少一個(gè)共價(jià)鍵。在另一實(shí)施方案中，在多糖的每4個(gè)糖重復(fù)單元中載體蛋 白與多糖之間的共價(jià)鍵出現(xiàn)至少一次。在另一實(shí)施方案中，在多糖的每10個(gè)糖重復(fù)單元中 載體蛋白與多糖之間的共價(jià)鍵出現(xiàn)至少一次。在其他實(shí)施方案中，在多糖的每15個(gè)糖重復(fù) 單元中載體蛋白與多糖之間的共價(jià)鍵出現(xiàn)至少一次。
[0066] 在常見的實(shí)施方案中，所述載體蛋白是CRM197，并且在多糖的每4、10、15或25個(gè)糖 重復(fù)單元中CRM 197與多糖之間的共價(jià)鍵出現(xiàn)至少一次。在一些此類實(shí)施方案中，所述多糖 是細(xì)菌莢膜多糖，例如源自肺炎鏈球菌或腦膜炎奈瑟氏球菌的莢膜多糖。
[0067] 在其他實(shí)施方案中，對(duì)于每5至10個(gè)糖重復(fù)單元；每2至7個(gè)糖重復(fù)單元；每3至 8個(gè)糖重復(fù)單元；每4至9個(gè)糖重復(fù)單元；每6至11個(gè)糖重復(fù)單元；每7至12個(gè)糖重復(fù)單 元；每8至13個(gè)糖重復(fù)單元；每9至14個(gè)糖重復(fù)單元；每10至15個(gè)糖重復(fù)單元；每2至 6個(gè)糖重復(fù)單元；每3至7個(gè)糖重復(fù)單元；每4至8個(gè)糖重復(fù)單元；每6至10個(gè)糖重復(fù)單 元；每7至11個(gè)糖重復(fù)單元；每8至12個(gè)糖重復(fù)單元；每9至13個(gè)糖重復(fù)單元；每10至 14個(gè)糖重復(fù)單元；每10至20個(gè)糖重復(fù)單元；或每4至25個(gè)糖重復(fù)單元，所述綴合物包含 至少一個(gè)在載體蛋白與糖之間的共價(jià)鍵。
[0068]在另一實(shí)施方案中，對(duì)于多糖的每 2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、 18、19、20、21、22、23、24或25個(gè)糖重復(fù)單元，發(fā)生載體蛋白與糖之間的至少一個(gè)鍵合。
[0069] 在一個(gè)實(shí)施方案中，對(duì)于多糖的每25個(gè)糖重復(fù)單元，本發(fā)明的糖綴合物包含至少 一個(gè)在載體蛋白與多糖之間的共價(jià)鍵。在另一實(shí)施方案中，在多糖的每4個(gè)糖重復(fù)單元中 載體蛋白與多糖之間的共價(jià)鍵出現(xiàn)至少一次。在另一實(shí)施方案中，在多糖的每10個(gè)糖重復(fù) 單元中載體蛋白與多糖之間的共價(jià)鍵出現(xiàn)至少一次。在又一實(shí)施方案中，在多糖的每15個(gè) 糖重復(fù)單元中載體蛋白與多糖之間的共價(jià)鍵出現(xiàn)至少一次。
[0070] 在一個(gè)實(shí)施方案中，與糖的總量相比，所述糖綴合物包含少于約45%的游離糖。在 另一實(shí)施方案中，與糖的總量相比，所述糖綴合物包含少于約30 %的游離糖。在另一實(shí)施方 案中，與糖的總量相比，所述糖綴合物包含少于約20%的游離糖。在其他實(shí)施方案中，與糖 的總量相比，所述糖綴合物包含少于約10%的游離糖。在另一實(shí)施方案中，與糖的總量相 比，所述糖綴合物包含少于約5%的游離糖。
[0071] 在另一實(shí)施方案中，與糖的總量相比，所述糖綴合物包含少于約20摩爾％的載體 蛋白殘基。
[0072] 在另一方面，本發(fā)明提供了免疫原性組合物，其包含本發(fā)明的糖綴合物以及佐劑、 稀釋劑或載體中的至少一種。
[0073] 在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了免疫原性組合物，其包含本發(fā)明的糖綴合物以 及佐劑、稀釋劑或載體中的至少一種，其中所述糖綴合物包含與載體蛋白共價(jià)綴合的細(xì)菌 莢膜多糖。在一些此類實(shí)施方案中，所述莢膜多糖源自肺炎鏈球菌或腦膜炎奈瑟氏球菌。
[0074] 在一些實(shí)施方案中，所述免疫原性組合物包含佐劑。在一些此類實(shí)施方案中，所述 佐劑是選自磷酸鋁、硫酸鋁和氫氧化鋁的鋁系佐劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述免疫原性組合 物包含佐劑憐fe錯(cuò)。
[0075] 在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的糖綴合物或免疫原性組合物可以用于生成功能性的 抗體，如通過在動(dòng)物效力模型中或通過調(diào)理吞噬殺滅測(cè)定對(duì)細(xì)菌的殺滅所測(cè)量的。
[0076] 在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了誘導(dǎo)個(gè)體的免疫應(yīng)答的方法，其包括向所述個(gè) 體給藥免疫有效量的本文所述的本發(fā)明的免疫原性組合物。在另一方面，本發(fā)明提供了在 個(gè)體中誘導(dǎo)針對(duì)致病菌的免疫應(yīng)答的方法，其包括向所述個(gè)體給藥免疫有效量的本文所述 的免疫原性組合物。在另一方面，本發(fā)明提供了預(yù)防或改善個(gè)體的由致病菌引發(fā)的疾病或 病癥的方法，其包括向所述個(gè)體給藥免疫有效量的本文所述的免疫原性組合物。在另一方 面，本發(fā)明提供了降低個(gè)體的由致病菌的感染而引發(fā)的疾病或病癥的至少一種癥狀的嚴(yán)重 性的方法，其包括向所述個(gè)體給藥免疫有效量的本文所述的免疫原性組合物。在一些實(shí)施 方案中，所述致病菌是肺炎鏈球菌或腦膜炎奈瑟氏球菌。
[0077] 此外，本發(fā)明提供了誘導(dǎo)針對(duì)肺炎鏈球菌或腦膜炎奈瑟氏球菌的免疫應(yīng)答的方 法、預(yù)防由肺炎鏈球菌或腦膜炎奈瑟氏球菌引發(fā)的疾病的方法、以及降低由肺炎鏈球菌或 腦膜炎奈瑟氏球菌的感染而引發(fā)的疾病的至少一種癥狀的嚴(yán)重性的方法。
[0078]糖
[0079] 糖包括多糖、寡糖和單糖。在一些實(shí)施方案中，所述糖是多糖，尤其是細(xì)菌莢膜多 糖。
[0080] 莢膜多糖的分子量是供在免疫原性組合物中使用的一個(gè)考慮因素。高分子量莢膜 多糖由于存在于抗原表面上的表位的化合價(jià)較高而能夠誘導(dǎo)某些抗體免疫應(yīng)答。高分子量 莢膜多糖的分離和純化被涵蓋用于本發(fā)明的綴合物、組合物和方法中。
[0081] 在一個(gè)實(shí)施方案中，所述莢膜多糖具有10kDa至2, OOOkDa的分子量。在一個(gè)實(shí)施 方案中，所述莢膜多糖具有50kDa至1，OOOkDa的分子量。在另一實(shí)施方案中，所述莢膜多 糖具有50kDa至300kDa的分子量。在另一實(shí)施方案中，所述莢膜多糖具有70kDa至300kDa 的分子量。在其他實(shí)施方案中，所述莢膜多糖具有90kDa至250kDa ;90kDa至150kDa ;90kDa 至 120kDa ;80kDa 至 120kDa ;70kDa 至 100kDa ;70kDa 至 llOkDa ;70kDa 至 120kDa ;70kDa 至 130kDa ;70kDa 至 140kDa ;70kDa 至 150kDa ;70kDa 至 160kDa ;80kDa 至 llOkDa ;80kDa 至 120kDa ;80kDa 至 130kDa ;80kDa 至 140kDa ;80kDa 至 150kDa ;80kDa 至 160kDa ;90kDa 至 llOkDa ;90kDa 至 120kDa ;90kDa 至 130kDa ;90kDa 至 140kDa ;90kDa 至 150kDa ;90kDa 至 160kDa ;100kDa 至 120kDa ;100kDa 至 130kDa ;100kDa 至 140kDa ;100kDa 至 150kDa ;100kDa 至160kDa的分子量；以及類似的期望分子量范圍。任何上述范圍內(nèi)的任何整數(shù)也被涵蓋作 為本發(fā)明的實(shí)施方案。