化合物。
[0117] 發(fā)明人進(jìn)一步深入地研究了本發(fā)明化合物的藥理作用，通過藥物轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的體外 模型實(shí)驗(yàn)，進(jìn)一步表征了本發(fā)明化合物的優(yōu)異跨細(xì)胞膜性能，從而揭示了本發(fā)明化合物具 有優(yōu)異活性的原理，也為BAPTA衍生物的研究提供了一種全新的構(gòu)思。
[0118] 3、肝臟攝入型轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白OATPIBl吸收實(shí)驗(yàn)
[0119] A、0ATP1B1轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的功能確認(rèn)
[0120] 將0ATP1B1-HEK293細(xì)胞加于24孔盤內(nèi)，放置于37°C、5%CO2條件下培養(yǎng)48h后， 開始給藥實(shí)驗(yàn)確證細(xì)胞功能。
[0121] 0ATP1B1轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的標(biāo)準(zhǔn)轉(zhuǎn)運(yùn)底物是硫酸雌酮，將放射性比活度為1.68rTBq/ mmol的3H-硫酸雌酮配置成50nmol/L的濃度溶于DPBS緩沖液中，另外分別加入100nM、 300nM、lyM、3yM、10yM、30yM的非同位素標(biāo)記的硫酸雌酮作為抑制劑，將無0ATP1B1轉(zhuǎn) 運(yùn)蛋白表達(dá)的空白HEK293細(xì)胞（MOCK細(xì)胞）做為陰性對(duì)照，試驗(yàn)結(jié)果見附圖1。
[0122] 由Eadie-Hofstee法線性回歸，計(jì)算出0ATP1B1標(biāo)準(zhǔn)轉(zhuǎn)運(yùn)底物硫酸雌酮 Michaelis-Menten方程，Kj直為 0? 5392IiMJniJ直為 20. 569pmol/mg蛋白質(zhì) / 分鐘。Kni值 小于IyM，說明硫酸雌酮與OATP1B1親和性非常好，同時(shí)也證明了OATP1B1-HEK293細(xì)胞系 的功能良好。
[0123]B、本發(fā)明化合物與0ATP1B1轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白親和性實(shí)驗(yàn)
[0124] 以50nM3H-硫酸雌酮（給藥0ATP1B1)作為陽(yáng)性對(duì)照100%，分別添加IyM、3yM、 10yM、30yM、100yM、300yM、600yM的本發(fā)明化合物（II)，測(cè)定陽(yáng)性底物的吸收變化，實(shí) 驗(yàn)結(jié)果見附圖2。
[0125] 回歸計(jì)算出本發(fā)明式（II)化合物對(duì)于0ATP1B1的IC5。值約為4. 62yM，證 明對(duì)于0ATP1B1具有非常理想的抑制作用。進(jìn)一步進(jìn)行常規(guī)的K"、Vniax變化實(shí)驗(yàn)，通過Eadie-Hofstee方法線性回歸確定本發(fā)明式（II)化合物對(duì)于0ATP1B1攝入3H-硫酸雌酮 的影響，發(fā)現(xiàn)本發(fā)明式（II)化合物引起0ATP1B1攝入3H-硫酸雌酮的KJ直產(chǎn)生了顯著的 變化：從0. 5392yM增大至2. 5714 Vniax值未產(chǎn)生顯著的變化，這可以證明本發(fā)明式 (II)化合物是0ATP1B1轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑，即它是0ATP1B1的轉(zhuǎn)運(yùn)底物。
[0126]C、現(xiàn)有技術(shù)化合物與0ATP1B1轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白親和性實(shí)驗(yàn)
[0127] 采用上述B中的相同的實(shí)驗(yàn)方法，驗(yàn)證了BAPTA以及專利文獻(xiàn)CN103288664A中實(shí) 施例化合物1，2-雙（2-氨基苯氧基）乙烷-N，N，N'，N' -四乙酸四（二乙氨基乙醇酯）與 0ATP1B1轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白親和性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：BAPTA對(duì)于0ATP1B1的IC5。值為約為50yM，可以認(rèn)為 是沒有顯著的抑制作用；而CN103288664A中實(shí)施例化合物對(duì)于0ATP1B1的IC5。值為約為 15yM，抑制作用也遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于本發(fā)明式（II)化合物。
[0128] 通過上述的進(jìn)一步0ATP1B1轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的競(jìng)爭(zhēng)性抑制實(shí)驗(yàn)，證明了現(xiàn)有技術(shù)中的兩 種化合物均不是0ATP1B1的轉(zhuǎn)運(yùn)底物。
[0129] 通過與0ATP1B1轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的親和性實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可與顯而易見地看出本發(fā)明式（II) 化合物作為0ATP1B1轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的轉(zhuǎn)運(yùn)底物，相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)中的BAPTA以及CN103288664A 中的實(shí)施例化合物，可以更容易的跨越細(xì)胞膜，這一結(jié)果證實(shí)了本發(fā)明式（II)化合物具有 優(yōu)良的跨越細(xì)胞膜的能力，解決了現(xiàn)有技術(shù)中迫切需要解決的技術(shù)問題，同時(shí)也解釋了本 發(fā)明化合物為何能夠具有優(yōu)良的抗缺血缺氧活性，這是意想不到的優(yōu)異的效果。
[0130] 綜上所述，由上述所有實(shí)施例可明確看出，本發(fā)明提供了一種新的鈣離子選擇性 螯合劑及其制備方法和用途，本發(fā)明的化合物具有優(yōu)良的抗缺血缺氧的能力，同時(shí)，其還作 為0ATP1B1轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的轉(zhuǎn)運(yùn)底物具備了優(yōu)良的跨細(xì)胞膜能力，對(duì)于BAPTA衍生物的研究具 有非常重要的意義和潛在價(jià)值。
[0131] 應(yīng)當(dāng)理解，這些實(shí)施例的用途僅用于說明本發(fā)明而非意欲限制本發(fā)明的保護(hù)范 圍。此外，也應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明的技術(shù)內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對(duì)本發(fā)明作各 種改動(dòng)、修改和/或變型，所有的這些等價(jià)形式同樣落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求書所限定的 保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種下式（I)所示新型巧離子選擇性馨合劑，其結(jié)構(gòu)式如下：其中，Ri、R2各自獨(dú)立地選自H、面素、C1 5烷基、C1 5烷氧基或徑基。2. 如權(quán)利要求所述的巧離子選擇性馨合劑，其特征在于：其為下式（II)化合物：3. 權(quán)利要求1或2所述新型巧離子選擇性馨合劑的制備方法，所述制備方法如下： 在有機(jī)溶劑中，于催化劑和芳香酸促進(jìn)劑存在下，下式（III)化合物與下式（IV)化合 物反應(yīng)，從而得到所述式（I)或式（II)化合物，其中，Ri、R2分別如權(quán)利要求1或2中所定義。4. 如權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于：所述催化劑是按照如下制備方法制得 的： (1) 將SBA-15介孔分子篩在500-550°C下般燒20-40分鐘，然后自然冷卻至室溫，得到 一次處理分子篩； (2) 將一次處理分子篩放置于500°C的水蒸氣氣氛中放置60-80分鐘，得到二次處理分 子篩； (3) 將二次處理分子篩和離子液體加入到溶劑中，于40-50°C下充分?jǐn)埌杌旌?-8小 時(shí)，然后過濾，將所得固體物用去離子水洗涂2-3次，然后真空干燥，即得所述催化劑。5. 如權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于：所述離子液體選自1-(4-二乙酷基艦 苯基）-3-甲基咪挫四氣棚酸鹽、1-甲基-3-橫酸丙基咪挫硫酸氨鹽、1-正下基-3-甲基咪 挫憐酸二氨鹽、N，N，N'，N' -四甲基-N，N' -二橫酸丙基丙二胺硫酸氨鹽、1-正下基-3-甲 基咪挫六氣憐酸鹽中的任意一種，最優(yōu)選為N，N，N'，N'-四甲基-N，N'-二橫酸丙基丙二胺 硫酸氨鹽。6. 如權(quán)利要求3-5任一項(xiàng)所述的制備方法，其特征在于：所述有機(jī)溶劑為第一組分與 第二組分構(gòu)成的雙組分混合溶劑，其中第一組分與第二組分的體積比為1:2-3 ; 其中，第一組分為N，N-二甲基甲酯胺值MF)、二甲基亞諷值MSO)、N-甲基化咯燒酬 (NMP)、甲苯、苯中的任意一種，最優(yōu)選為DMSO; 其中，第二組分為聚乙締醇200 (陽(yáng)G-200)、15-冠-6或S下基胺中的任意一種，最優(yōu)選 為陽(yáng)G-200。7. 如權(quán)利要求3-6任一項(xiàng)所述的制備方法，其特征在于：所述芳香酸促進(jìn)劑為苯甲酸、 苯乙酸、對(duì)琉基苯甲酸或3-硝基苯甲酸中的任意一種，最優(yōu)選為3-硝基苯甲酸。8. 權(quán)利要求1所述式（I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備治療臨床上大面積細(xì)胞 死亡性疾病的藥物中的用途。9. 權(quán)利要求1所述式（I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備與OATP1B1轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白相 關(guān)疾病藥物中的用途。10. 包含權(quán)利要求1所述式（I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的藥物組合物。
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種新型的下式(I)鈣離子選擇性螯合劑及其制備方法和用途，所述化合物具有優(yōu)良的抗缺血和抗缺氧的能力，同時(shí)，其還作為OATP1B1轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的轉(zhuǎn)運(yùn)底物而具備了優(yōu)良的跨細(xì)胞膜能力，對(duì)于BAPTA衍生物的研究具有非常重要的意義和潛在價(jià)值。
【IPC分類】A61P35/00, A61P1/16, B01J31/02, A61P9/10, A61K31/4453, A61P1/18, A61P13/12, C07D295/088
【公開號(hào)】CN105001180
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510320576
【發(fā)明人】陳嫣
【申請(qǐng)人】陳嫣
【公開日】2015年10月28日
【申請(qǐng)日】2015年6月11日