l純品和DP2純品羥自由基清除率的測(cè)定曲線圖。
[0023] 圖5為多糖DP1純品和DP2純品的DPPH清除率測(cè)定曲線圖。
【具體實(shí)施方式】
[0024] 為了能夠清楚的說(shuō)明本方案的技術(shù)特點(diǎn)，下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一 步的說(shuō)明。
[0025] 實(shí)施例1 一種從冬棗中分離、純化多糖的方法，包括以下步驟： (1)粗多糖的提?。簩⒑娓刹⒎鬯榈亩瑮椃勰凑斩瑮椃叟c水的質(zhì)量比為1:25,室溫 條件下浸泡30分鐘后，經(jīng)熱水浸提，得到粗多糖提取液和濾渣；將粗多糖提取液進(jìn)行濃縮， 濃縮至原體積的1/3得濃縮液，向該濃縮液中加入質(zhì)量濃度95%的乙醇進(jìn)行醇沉，加入乙醇 與濃縮液的體積比為3倍，醇沉6h，醇沉后進(jìn)行離心，得冬棗粗多糖沉淀物，將所述冬棗粗 多糖沉淀物在60°C條件下真空干燥即得一次粗多糖。
[0026] (2)脫蛋白：將步驟（1)中制得的所述粗多糖配成體積濃度為1%的粗多糖溶液， 向所述粗多糖溶液中加入一定量的木瓜蛋白酶，其中，脫蛋白的酶解溫度為40°C，加酶量為 450U/mL、酶解時(shí)間為I. 5h;酶解后在沸水浴中滅酶15分鐘后自然冷卻，冷卻后加入三氯乙 酸(質(zhì)量分?jǐn)?shù)20%)得質(zhì)量濃度為7%的一次混合溶液，將所述混合溶液置于4°C冰箱中靜置 過夜，在轉(zhuǎn)速為5000rpm/min條件下離心10分鐘，收集一次上清液備用，取上清液測(cè)定蛋白 質(zhì)脫除率和多糖保留率。
[0027](3)脫色：將實(shí)施例1、實(shí)施例2和實(shí)施例3的步驟（2)中所述一次上清液用1%的 氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH值至7. 0后，加入1%活性炭得二次混合溶液，在溫度為40°C條件下脫 色40min，將脫色后的所述二次混合溶液在轉(zhuǎn)速為5000rpm/min條件下離心10分鐘，收集二 次上清液備用。
[0028] (4)過濾：將實(shí)施例1、實(shí)施例2和實(shí)施例3的步驟（3)中的所述二次上清液用 0. 45ym微孔濾膜過濾，過濾后真空干燥，得二次粗多糖。
[0029] (5) -次層析：采用DEAE-52纖維素柱進(jìn)行一次層析，將步驟（4)中的二次粗多糖 上樣，依次用蒸餾水、〇? 2mol/L的NaCl、0. 3mol/L的NaCl和0? 5mol/L的NaCl進(jìn)行分段洗 脫，流速為lmL/min，以每管5mL收集洗脫液，用苯酸-硫酸法于490nm處檢測(cè)，合并各吸收 的洗脫液，經(jīng)減壓濃縮裝入透析袋，在流水、蒸餾水中分別透析48h、24h后分別得多糖DPl 粗品和多糖DP2粗品，如圖1所不。
[0030] (6)二次層析：采用S印hadexG-100凝膠色譜柱進(jìn)行二次層析，分別將步驟（5)中 的多糖DPl粗品和多糖DP2粗品上樣，均用蒸餾水洗脫，濃縮、真空干燥后制得多糖DPl純 品和多糖DP2純品。
[0031] 實(shí)施例2 一種從冬棗中分離、純化多糖的方法，包括以下步驟： (1)粗多糖的提?。簩⒑娓刹⒎鬯榈亩瑮椃勰凑斩瑮椃叟c水的質(zhì)量比為1:20,室溫 條件下浸泡30分鐘后，經(jīng)熱水浸提，得到粗多糖提取液和濾渣；將粗多糖提取液進(jìn)行濃縮， 濃縮至原體積的1/2得濃縮液，向該濃縮液中加入質(zhì)量濃度90%的乙醇進(jìn)行醇沉，加入乙醇 與濃縮液的體積比為2倍，醇沉4h，醇沉后進(jìn)行離心，得冬棗粗多糖沉淀物，將所述冬棗粗 多糖沉淀物在60°C條件下真空干燥即得一次粗多糖。
[0032] (2)脫蛋白：將步驟（1)中制得的所述粗多糖配成體積濃度為1%的粗多糖溶液， 向所述粗多糖溶液中加入一定量的木瓜蛋白酶，其中，脫蛋白的酶解溫度為50°C，加酶量為 300U/mL、酶解時(shí)間為Ih;酶解后在沸水浴中滅酶15分鐘后自然冷卻，冷卻后加入三氯乙酸 (質(zhì)量分?jǐn)?shù)20%)得質(zhì)量濃度為5%的一次混合溶液，將所述混合溶液置于4°C冰箱中靜置過 夜，在轉(zhuǎn)速為5000rpm/min條件下離心10分鐘，收集一次上清液備用，取上清液測(cè)定蛋白質(zhì) 脫除率和多糖保留率。
[0033](3)脫色：將實(shí)施例1、實(shí)施例2和實(shí)施例3的步驟（2)中所述一次上清液用1%的 氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH值至7. 0后，加入1%活性炭得二次混合溶液，在溫度為40°C條件下脫 色40min，將脫色后的所述二次混合溶液在轉(zhuǎn)速為5000rpm/min條件下離心10分鐘，收集二 次上清液備用。
[0034] (4)過濾：將實(shí)施例1、實(shí)施例2和實(shí)施例3的步驟（3)中的所述二次上清液用 0. 45ym微孔濾膜過濾，過濾后真空干燥，得二次粗多糖。
[0035] (5) -次層析：采用DEAE-52纖維素柱進(jìn)行一次層析，將步驟（4)中的二次粗多糖 上樣，依次用蒸餾水、〇? 2mol/L的NaCl、0. 3mol/L的NaCl和0? 5mol/L的NaCl進(jìn)行分段洗 脫，，流速為lmL/min，以每管5mL收集洗脫液，用苯酸-硫酸法于490nm處檢測(cè)，合并各吸收 的洗脫液，經(jīng)減壓濃縮裝入透析袋，在流水、蒸餾水中分別透析48h、24h后分別得多糖DPl 粗品和多糖DP2粗品，如圖1所不。
[0036] (6)二次層析：采用S印hadexG-100凝膠色譜柱進(jìn)行二次層析，分別將步驟（5)中 的多糖DPl粗品和DP2粗品上樣，均用蒸餾水洗脫，濃縮、真空干燥后制得多糖DPl純品和 多糖DP2純品。
[0037] 實(shí)施例3 一種從冬棗中分離、純化多糖的方法，包括以下步驟： (1)粗多糖的提?。簩⒑娓刹⒎鬯榈亩瑮椃勰?，按照冬棗粉與水的質(zhì)量比為1:30,室溫 條件下浸泡30分鐘后，經(jīng)熱水浸提，得到粗多糖提取液和濾渣；將粗多糖提取液進(jìn)行濃縮， 濃縮至原體積的1/4得濃縮液，向該濃縮液中加入質(zhì)量濃度100%的乙醇進(jìn)行醇沉，加入乙 醇與濃縮液的體積比為4倍，醇沉8h，醇沉后進(jìn)行離心，得冬棗粗多糖沉淀物，將所述冬棗 粗多糖沉淀物在60°C條件下真空干燥即得一次粗多糖。
[0038] (2)脫蛋白：將步驟（1)中制得的所述粗多糖配成體積濃度為1%的粗多糖溶液， 向所述粗多糖溶液中加入一定量的木瓜蛋白酶，其中，脫蛋白的酶解溫度為60°C，加酶量為 150U/mL、酶解時(shí)間為2h;酶解后在沸水浴中滅酶15分鐘后自然冷卻，冷卻后加入三氯乙酸 (質(zhì)量分?jǐn)?shù)20%)得質(zhì)量濃度為9%的一次混合溶液，將所述混合溶液置于4°C冰箱中靜置過 夜，在轉(zhuǎn)速為5000rpm/min條件下離心10分鐘，收集一次上清液備用，取上清液測(cè)定蛋白質(zhì) 脫除率和多糖保留率。
[0039] (3)脫色：將實(shí)施例1、實(shí)施例2和實(shí)施例3的步驟（2)中所述一次上清液用1%的 氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH值至7. 0后，加入1%活性炭得二次混合溶液，在溫度為40°C條件下脫 色40min，將脫色后的所述二次混合溶液在轉(zhuǎn)速為5000rpm/min條件下離心10分鐘，收集二 次上清液備用。
[0040] (4)過濾：將實(shí)施例1、實(shí)施例2和實(shí)施例3的步驟（3)中的所述二次上清液用 0. 45ym微孔濾膜過濾，過濾后真空干燥，得二次粗多糖。
[0041] (5) -次層析：采用DEAE-52纖維素柱進(jìn)行一次層析，將步驟（4)中的二次粗多糖 上樣，依次用蒸餾水、〇? 2mol/L的NaCl、0. 3mol/L的NaCl和0? 5mol/L的NaCl進(jìn)行分段洗 脫，流速為lmL/min，以每管5mL收集洗脫液，用苯酸-硫酸法于490nm處檢測(cè)，合并各吸收 的洗脫液，經(jīng)減壓濃縮裝入透析袋，在流水、蒸餾水中分別透析48h、24h后分別得多糖DPl 粗品和多糖DP2粗品。
[0042] (6)二次層析：采用SephadexG-IOO凝膠色譜柱進(jìn)行二次層析，分別將步驟（5)中 的多糖DPl粗品和多糖DP2粗品上樣，均用蒸餾水洗脫，濃縮、真空干燥后制得多糖DPl純 品和多糖DP2純品。
[0043] 其中，酶解脫蛋