，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線為A=O. 0058C+0. 03,濃度范圍為：10. 7~107yg/mL， R2=O. 993,DPI和DP2中糖醛酸的含量分別為2. 2759%、5. 5603%。
[0064] 綜上，冬棗多糖純品DPl和DP2的理化性質(zhì)測定結(jié)果，如下表七：
結(jié)果表明，DPl的組成主要為阿拉伯糖和葡萄糖，DP2主要組成為阿拉伯糖、半乳糖和 葡萄糖。
[0065] 五、多糖純品DPl和DP2的抗氧化活性研究 5. 1羥自由基清除率的測定 操作步驟： 將冬棗多糖純品DPl和DP2用蒸餾水分別配成0. 05、0. 1、0. 2、0. 4、0. 8、1. 2、2. 4、3. 2、 4、4. 8、6. 4、8mg/mL濃度溶液，采用鄰二氮菲法進(jìn)行羥自由基清除率的測定，以Vc為對照。 取ImLO. 75mmol/L鄰二氮菲無水乙醇溶液于試管中依次加入2mL50mmmol/LpH7. 4磷酸鹽 緩沖溶液和ImL蒸餾水，充分混合后，加入ImLO. 75mmol/L硫酸亞鐵溶液，混勻后，加入 ImLO. 01%雙氧水，于37°C水浴60min后，在536nm測定其吸光度，所測得的數(shù)據(jù)為損傷管的 吸光值A(chǔ)s。未損管以ImL蒸餾水代替損傷管中ImLO. 01%雙氧水，操作方法同損傷管，可測 得536nm未損傷管的吸光值A(chǔ)未。樣品管以ImL樣品代替損傷管中的ImL蒸餾水，操作方法 同損傷管，可測得536nm樣品管的吸光值A(chǔ)#。清除率I的計(jì)算公式：
結(jié)果如圖4所示，在一定濃度范圍內(nèi)隨著多糖濃度的增加，羥自由基清除率逐漸增加， 其中DPl和DP2在8mg/mL時，羥自由基清除率分別為28. 52%、78. 79%，表明冬棗多糖純品 DPl和DP2都具有一定的清除羥自由基清除率的作用。
[0066] 5. 2DPPH清除率的測定 采用二苯代苦味肼基自由基（DPPH)體系測定冬棗多糖DPl和DP2的DPPH清除率，并 以Vc為對照。用無水乙醇配制DPPH溶液的濃度為2X10Vol/L，取一系列濃度為0. 0025、 0? 005、0. 01、0. 02、0. 04、0. 05、0. 1、0. 2、0. 4mg/mL的多糖溶液 2.OmL加入DPPH溶液 2.OmL 搖勻后，暗處放置30min，以2.OmL無水乙醇和2.OmLDPPH混合液為空白，以2.OmL多糖液 和2.OmL無水乙醇為對照，以Vc為對照，分別在517nm處測定吸光度，按照公式清除率（％) =[1_ (A樣品-A對照)/A空白]X100%。
[0067]由圖5可知，隨著冬棗多糖DPl和DP2濃度的增加，DPPH清除率逐漸成遞增趨勢， 當(dāng)樣液濃度為〇. 4mg/mL時，DPl和DP2的DPPH清除率分別為9. 97%、24. 54%。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種從冬棗中分離、純化多糖的方法，其特征在于，包括以下步驟： (1) 采用水提、醇沉法從冬棗中提取出一次粗多糖； (2) 將所述一次粗多糖采用酶-三氯乙酸法進(jìn)行脫蛋白處理，離心分離得到一次上清 液； (3) 將所述一次上清液加入活性炭進(jìn)行脫色處理，得到二次上清液； (4) 所述二次上清液經(jīng)膜過濾得二次粗多糖； (5) 將所述二次粗多糖上離子交換柱一次層析，得多糖DPl粗品和多糖DP2粗品； (6) 將一次層析后的多糖DPl粗品和多糖DP2粗品分別上凝膠色譜柱進(jìn)行二次層析，得 到多糖DPl純品和多糖DP2純品。2. 如權(quán)利要求1所述的一種從冬棗中分離、純化多糖的方法，其特征在于，所述步驟 (1)中水提、醇沉法提取所述一次粗多糖具體為：將烘干并粉碎的冬棗粉末，按照冬棗粉與 水的質(zhì)量比為1:20~1:30,室溫條件下浸泡30分鐘后，經(jīng)熱水浸提，得到粗多糖提取液和 濾渣；將粗多糖提取液進(jìn)行濃縮，濃縮至原體積的1/2~1/4得濃縮液，向該濃縮液中加入 質(zhì)量濃度90%~100%的乙醇進(jìn)行醇沉，乙醇與濃縮液的體積比為2~4倍，醇沉4~8h，醇 沉后進(jìn)行離心，得冬棗粗多糖沉淀物，將所述冬棗粗多糖沉淀物在60°C條件下真空干燥即 得一次粗多糖。3. 如權(quán)利要求2所述的一種從冬棗中分離、純化多糖的方法，其特征在于，所述熱水浸 提的提取溫度80-100°C，料液比為1:20-1:30,浸提時間為2-4h。4. 如權(quán)利要求1或2所述的一種從冬棗中分離、純化多糖的方法，其特征在于，所述步 驟（2)的脫蛋白處理具體為：將步驟（1)中制得的所述粗多糖配成體積濃度為1%的粗多糖 溶液，向所述粗多糖溶液中加入一定量的木瓜蛋白酶，酶解后在沸水浴中滅酶15分鐘，自 然冷卻，冷卻后加入三氯乙酸得質(zhì)量濃度為5%-9%的一次混合溶液，將所述混合溶液置于 4°C冰箱中靜置過夜，在轉(zhuǎn)速為5000rpm/min條件下離心10分鐘，收集一次上清液備用。5. 如權(quán)利要求4所述的一種從冬棗中分離、純化多糖的方法，其特征在于，脫蛋白的酶 解溫度為40-60°C，加酶量為150-450U/mL，酶解時間為1-2h。6. 如權(quán)利要求4所述的一種從冬棗中分離、純化多糖的方法，其特征在于，所述步驟 (3)的脫色處理具體為：將步驟（2)中所述一次上清液用1%的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至 7. 0后，加入1%活性炭得二次混合溶液，在溫度為40 °C條件下脫色40min，將脫色后的所述 二次混合溶液在轉(zhuǎn)速為5000rpm/min條件下離心10分鐘，收集二次上清液備用。7. 如權(quán)利要求1所述的一種從冬棗中分離、純化多糖的方法，其特征在于，所述步驟 (4 )膜過濾具體為：將步驟（3 )中的所述二次上清液用0. 45 y m微孔濾膜過濾，過濾后減壓 濃縮、真空干燥，得二次粗多糖。8. 如權(quán)利要求1所述的一種從冬棗中分離、純化多糖的方法，其特征在于，所述步 驟（5)離子交換柱一次層析具體為：選用DEAE-52纖維素柱進(jìn)行一次層析，將步驟（4)中 的二次粗多糖配成一定濃度上樣，依次用蒸餾水、〇? 2mol/L的NaCl、0. 3mol/L的NaCl和 0. 5mol/L的NaCl進(jìn)行分段洗脫，再經(jīng)濃縮、透析后分別得多糖DPl粗品和多糖DP2粗品。9. 如權(quán)利要求7所述的一種從冬棗中分離、純化多糖的方法，其特征在于，所述步驟 (6)凝膠色譜柱二次層析具體為=Sephad exG-IOO凝膠色譜柱進(jìn)行二次層析，分別將步驟 (5)中的多糖DPl粗品和多糖DP2粗品上樣，均用蒸餾水洗脫，濃縮、真空干燥后制得多糖 DPI純品和多糖DP2純品。10.如權(quán)利要求8或9所述的一種從冬棗中分離、純化多糖的方法，其特征在于，所述多 糖DPl純品組成主要為阿拉伯糖和葡萄糖，所述多糖DP2純品組成主要為阿拉伯糖、半乳糖 和葡萄糖。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種從冬棗中分離、純化多糖的方法，包括以下步驟:采用水提、醇沉法從冬棗中提取出一次粗多糖；將一次粗多糖采用酶-三氯乙酸法進(jìn)行脫蛋白處理，離心分離得到一次上清液；將一次上清液加入活性炭進(jìn)行脫色處理，得到二次上清液；二次上清液經(jīng)膜過濾得二次粗多糖；將二次粗多糖上離子交換柱一次層析，得多糖DP1粗品和多糖DP2粗品；將一次層析后的多糖DP1粗品和多糖DP2粗品分別上凝膠色譜柱進(jìn)行二次層析，得到多糖DP1純品和多糖DP2純品。本發(fā)明中從冬棗中分離、純化所得到的冬棗多糖制得的冬棗多糖DP1、多糖DP2具有一定的抗氧化活性，產(chǎn)品純度高、能耗低，高品質(zhì)的多糖為將來在食品、保健品、化妝品等領(lǐng)域更好的開發(fā)利用奠定了基礎(chǔ)。
【IPC分類】C08B37/00
【公開號】CN105085703
【申請?zhí)枴緾N201510584508
【發(fā)明人】潘瑩, 許經(jīng)偉, 吳憶春, 李明, 趙春海, 張柱岐
【申請人】濱州職業(yè)學(xué)院
【公開日】2015年11月25日
【申請日】2015年9月15日