br>[0227] 在第一方面，本發(fā)明提供了一種微囊組合物，包括一種含洗涂劑酶的微囊，其中該 微囊的膜通過(guò)一種具有高于IkDa分子量的多支化的多胺的交聯(lián)而產(chǎn)生，并且其中該洗涂 劑酶選自下組，該組由W下各項(xiàng)組成：蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、纖維素酶、甘露聚糖酶、果膠 酶、及其組合。
[022引在第二方面，本發(fā)明提供了一種液體洗涂劑組合物，包括總濃度按重量計(jì)是至少 3%的表面活性劑和洗涂劑助洗劑，和含洗涂劑酶的微囊，其中該微囊的膜通過(guò)具有高于 IkDa分子量的多支化的多胺的交聯(lián)而產(chǎn)生。
[0229] 在本發(fā)明第一和第二方面組合物的一個(gè)實(shí)施例中，該多支化的多胺的運(yùn)些反應(yīng)性 氨基構(gòu)成至少15%的分子量。優(yōu)選地，該多支化的多胺的分子量高于IkDa,例如至少為 1.SkDaO
[0230] 在運(yùn)些組合物的一個(gè)實(shí)施例中，通過(guò)使用一種酷基氯作為交聯(lián)劑生成該微囊。
[0231] 在運(yùn)些組合物的一個(gè)實(shí)施例中，該微囊的直徑大于50微米。
[0232] 在運(yùn)些組合物的一個(gè)實(shí)施例中，該微囊包含至少1%活性酶。
[0233] 在一個(gè)實(shí)施例中，運(yùn)些組合物進(jìn)一步包括醇，例如多元醇。
[0234] 在運(yùn)些組合物的一個(gè)實(shí)施例中，該表面活性劑是陰離子表面活性劑。
[0235] 在一個(gè)實(shí)施例中，運(yùn)些組合物是液體衣物或自動(dòng)餐具洗涂劑。
[0236] 在一個(gè)實(shí)施例中，運(yùn)些組合物包含少于90 %的水。
[0237] 在運(yùn)些組合物的一個(gè)實(shí)施例中，該洗涂劑酶是淀粉酶、脂肪酶、纖維素酶、甘露聚 糖酶、果膠酶、DNA酶、氧化還原酶（例如，漆酶、過(guò)氧化物酶、面代過(guò)氧化物酶、過(guò)水解酶）、 或其任何組合。
[023引在運(yùn)些組合物的一個(gè)實(shí)施例中，該洗涂劑酶是蛋白酶，例如金屬蛋白酶或堿性絲 氨酸蛋白酶（例如，枯草桿菌蛋白酶）。
[0239] 在運(yùn)些組合物的一個(gè)實(shí)施例中，該洗涂劑酶是淀粉酶或脂肪酶；優(yōu)選一種與SEQ IDNO: 1具有至少70%氨基酸序列一致性的淀粉酶，或一種與SEQIDN0:2或3具有至少 70%氨基酸序列一致性的脂肪酶。
[0240] 在運(yùn)些組合物的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，通過(guò)界面聚合使用一種酷基氯作為交聯(lián)劑生 成該微囊。
[0241] 在運(yùn)些組合物的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，該多支化的多胺是一種聚乙締亞胺。
[0242] 在另一個(gè)方面中，本發(fā)明提供了一種用于制備（液體）洗涂劑組合物的方法，包括 將如上所述的微囊組合物與表面活性劑和洗涂劑助洗劑組合。優(yōu)選地，表面活性劑和洗涂 劑助洗劑的總濃度為按重量計(jì)該洗涂劑組合物的至少3%。該表面活性劑可W是陰離子表 面活性劑。
[0243] 在又另一個(gè)方面中，本發(fā)明提還供了一種微囊用于改進(jìn)洗涂劑酶在液體洗涂劑組 合物中穩(wěn)定性的用途，其中該洗涂劑組合物包括表面活性劑和洗涂劑助洗劑，W至少3%的 總濃度，并且其中其中該微囊通過(guò)一種多支化的多胺的交聯(lián)而產(chǎn)生，并且其中根據(jù)實(shí)例2 中的方法活性損失降低至少10%，并且其中根據(jù)實(shí)例3中的方法該微囊能夠在3分鐘之內(nèi) 釋放至少50%的酶。
[0244] 根據(jù)本發(fā)明的用途的實(shí)施例與如上所描述的本發(fā)明運(yùn)些組合物的實(shí)施例相同。
[0245] 在另一個(gè)方面中，本發(fā)明還提供了本發(fā)明運(yùn)些組合物（如W上所描述的）用于衣 物洗涂或自動(dòng)餐具洗涂中的用途。
[0246] 本發(fā)明的運(yùn)些微囊可W用于具有高或低儲(chǔ)備堿度的組合物中（參見WO 2006/090335)。運(yùn)些微囊還與具有高或低水平的沸石、憐酸鹽或其他用于與化和Mg離子 相互作用的強(qiáng)或弱助洗劑（馨合劑、馨合劑、沉淀劑）的組合物相容。
[0247] 根據(jù)本發(fā)明的用途可W在W下溫度下進(jìn)行：從5至90攝氏度，優(yōu)選從5至70攝氏 度，更優(yōu)選從5至60攝氏度，甚至更優(yōu)選從5至50攝氏度，甚至更優(yōu)選從5至40攝氏度， 最優(yōu)選從5至30攝氏度，并且特別是從10至30攝氏度。
[024引W下實(shí)例進(jìn)一步描述本發(fā)明，運(yùn)些實(shí)例不應(yīng)當(dāng)解釋為限制本發(fā)明的范圍。
[0249]實(shí)例
[0巧0] 用作緩沖液和底物的化學(xué)品至少是試劑等級(jí)的商品。淀粉酶1具有SEQIDNO: 1 中所示的氨基酸序列（描述于WO2001/066712中）。脂肪酶1具有SEQIDNO: 2中所示的 氨基酸序列（描述于WO2000/060063中）。脂肪酶2具有SEQIDNO: 3中所示的氨基酸序 列。
[0巧1] 實(shí)例1 。巧引 液體發(fā)物滿絡(luò)劑的制備
[0253] 液體衣物標(biāo)準(zhǔn)洗涂劑；洗涂劑A和洗涂劑B分別從W下組合物中制備（所有百分 比均為w/w):
[0巧4]
[0巧6] 此外，一種可商購(gòu)的無(wú)酶洗涂劑；"寶奎少量且有利型非生物液（PersilSmall andMi曲tyNon-biological)"于2010年六月購(gòu)于英國(guó)。運(yùn)種洗涂劑稱為"洗涂劑C"。
[0巧7] 實(shí)例2 。巧引 具有不同聚賺W胺聚合物（分子量）的奪的制備
[0巧引 由BASF提供了具有商品名Lupaso傾多種不同的聚乙締。制造者所述的一些規(guī) 格總結(jié)于下表中：
[0260]
[0261] 通過(guò)將脂肪酶1 (120mg活性酶/克）的一種水溶液與根據(jù)下表所列的聚乙締亞胺 混合來(lái)制備屯種水相溶液。
[0262]
[0264] 通過(guò)將1000血的石蠟油（由Statoil提供的怖iteway巧）與苯乙締、甲基丙締 酸十八烷基醋W及馬來(lái)酸酢=元共聚物乳化劑在石蠟油中的高M(jìn)W水解共聚物的IOg20% 溶液通過(guò)攬拌混合制備一個(gè)油相（參見WO99/01534,實(shí)例5)。
[0265] 在連續(xù)磁性攬拌下，將運(yùn)些水相中的每個(gè)添加至IOOmL油相W形成具有200ym和 600ym之間的平均液滴尺寸的油包水乳劑。
[026引通過(guò)將2. 4g的對(duì)苯二甲酯氯（來(lái)自西格瑪奧德里奇（SigmaAl化ich))用加至 400g的石蠟油溶解并且在連續(xù)磁性攬拌下加熱至85°C來(lái)制備一個(gè)反應(yīng)物油相。
[0267] 向每個(gè)油包水乳劑中添加50mL熱反應(yīng)物油相來(lái)引發(fā)界面聚合反應(yīng)和囊形成。允 許在攬拌下1小時(shí)完成該反應(yīng)。
[026引然后，允許囊沉降大約5分鐘，棄去上清液并且用石蠟油（來(lái)自Statoil的Whiteway 15;或來(lái)自埃克森美孚巧xxonMobil)的Isopar M)沖洗運(yùn)些囊兩次。盡可能多 的排出最終的囊產(chǎn)品中的油。
[0269] 用100血洗涂劑A與每一批囊混合。
[0270] 通過(guò)將0.IOg的脂肪酶1溶液（120mg活性酶/克）與100g洗涂劑A在磁攬拌下 混合來(lái)制備參照。
[0271] 將參照和囊批次分裝入密閉小瓶，每一瓶中大約5g并在5°C或37°C下儲(chǔ)存1周 (加速條件）。
[0272] 在儲(chǔ)存之后，通過(guò)使用標(biāo)準(zhǔn)酶分析方法（在37°C下，pH= 8.0水解對(duì)硝基苯基棟 桐酸醋），在脫礦質(zhì)水中初始1:100稀釋（W便促進(jìn)酶從囊中釋放）之后測(cè)量活性。相對(duì)于 在5°C下儲(chǔ)存的樣品計(jì)算殘余活性。相對(duì)于參照計(jì)算活性損失減少。
[0273]
[0275] 結(jié)果證明，相比于非囊化參照樣品，由分子量1. 3kDa至2000kDa的聚乙締亞胺交 聯(lián)形成的囊顯示出在衣物洗涂劑中顯著改進(jìn)的酶穩(wěn)定性。
[0276]實(shí)例 3 陽(yáng)277] 酶活忡的釋放
[027引為了證實(shí)酶在模擬衣物洗涂中足夠快地釋放，大部分的酶活性需要在2-3分鐘內(nèi) 釋放。
[0279] 將通過(guò)實(shí)施例2中所描述的方法生成的囊樣品與洗涂劑A中LupasolG20W化按 1:100在去離子水中稀釋。該混合物被稱為"洗涂液"。
[0280] 通過(guò)使用標(biāo)準(zhǔn)酶分析方法，W30秒的間隔，測(cè)量過(guò)濾的（玻璃纖維0. 65ym過(guò)濾 器）洗涂液樣品上的酶活性（脂肪酶）
[0281] 10分鐘之后，用高剪切混合機(jī)扣ItraTurrax)處理該洗涂液一分鐘W確保所有 囊的破壞。高剪切混合樣品的活性用作下表中指數(shù)100%，顯示出洗涂液中的釋放特性（兩 個(gè)的平均）。
[0282]
[0283] 運(yùn)證明了 2分鐘內(nèi)在水中按1:100稀釋獲得了完全的酶活性釋放。
[0284]實(shí)例 4 陽(yáng)2財(cái)微奪化淀粉酶放講的穩(wěn)定忡
[0286] 使用W下水相組合物，通過(guò)實(shí)施例2中所描述的方法制備含淀粉酶的囊：
[0287]
[028引將囊與洗涂劑B或洗涂劑C混合，已經(jīng)向其中添加了 0. 5%非囊化蛋白酶。如在 實(shí)例2中描述制備了參照樣品。將參照和樣品分開并分別在5°C和3(TC下儲(chǔ)存八周，然后 用標(biāo)準(zhǔn)淀粉酶酶活性測(cè)定（在37°C下，抑=7. 35水解（4, 6-亞乙基（G7)-p-硝基苯基 (Gl) -a，D-麥芽屯糖巧（亞乙基-G7PNP))來(lái)分析。在此總結(jié)了殘余活性：
[0289]
[0290] 該實(shí)例證明了運(yùn)些囊保護(hù)了含蛋白酶洗涂劑中的酶，其中蛋白水解是一種重要的 去穩(wěn)定機(jī)制。
[0291]實(shí)例 5 陽(yáng)29引用淀粉酶制備并目含有碳酸鉤作為穩(wěn)定劑的奪
[0293] 根據(jù)下表制備兩種水相溶液（囊I和囊II):
[0294]
陽(yáng)29引淀粉酶：淀粉酶1濃縮物（1Img活性酶/克）。
[0296]碳酸巧：CaC03是一種化化來(lái)源，并且是一種非常難溶性的鹽。
[0297]油相：594gWhiteway15與6.Og如實(shí)例2中的高分子乳化劑。
[029引反應(yīng)物油相：在85°C下，230g怖iteway15與4.Ig間苯二甲酯氯（來(lái)自西格瑪奧 德里奇（SigmaAl化ich))。
[0299] 在連續(xù)磁性攬拌下，將運(yùn)些水相中的每個(gè)的20ml添加至SOmL油相W形成具有 200ym和600ym之間的平均液滴尺寸的油包水乳劑。
[0300] 向每個(gè)油包水乳劑中添加50mL熱反應(yīng)物油相來(lái)引發(fā)界面聚合反應(yīng)和囊形成。允 許在攬拌下1小時(shí)完成該反應(yīng)。
[030。 然后，允許囊沉降大約5分鐘，棄去上清液并且用Whiteway15沖洗運(yùn)些囊兩次。 盡可能多的排出最終的囊產(chǎn)品中的油。
[0302] 將0. 6克排油后的產(chǎn)品添加至150ml洗涂劑A。
[0303] 通過(guò)將0. 4ml淀粉酶濃縮物與125g洗涂劑A在磁攬拌下混合來(lái)制備參照。
[0304] 將參照和囊批次分裝入密閉小瓶，每一瓶中大約5g并在5°C和37°C下儲(chǔ)存8周。
[0305] 在儲(chǔ)存之后，通過(guò)使用如實(shí)例4中的標(biāo)準(zhǔn)酶分析方法測(cè)量活性。
[0306] 在37°C下8周后，洗涂劑A中殘余的淀粉酶活性（相對(duì)于在5°C下儲(chǔ)存的樣品的 殘余活性）：
[0307]
[030引運(yùn)些結(jié)果顯示，淀粉酶的囊化改進(jìn)了穩(wěn)定性；而且添加化C03作為穩(wěn)定劑甚至進(jìn) 一步改進(jìn)了淀粉酶的穩(wěn)定性。
[0309]實(shí)例6 惦10] 滿絡(luò)劑中胎化酶奪的儲(chǔ)存穩(wěn)定忡
[0311] 水相溶液：將50g脂肪酶2溶液（80mg活性酶/克）、20gLupasolGlOO(50 % )W 及30g自來(lái)水混合。
[031引油相：90gWhiteway15與IOg如實(shí)例2中的高分子乳化劑。
[031引反應(yīng)物油相：在85°C下，47. 5g怖iteway15與2. 5g間苯二甲酯氯（來(lái)自西格瑪 奧德里奇（SigmaAl化ich))。
[0314] 使用SilversonL4RT高剪切混合機(jī)在1000巧m下連續(xù)混合15分鐘，將運(yùn)些水相 添加至該油相W形成具有約50ym的平均液滴尺寸的油包水乳劑。
[0315] 在磁性攬拌下，向100mL的乳劑中添加50mL熱反應(yīng)物油相來(lái)引發(fā)界面聚合反應(yīng)和 囊形成。允許在攬拌下1小時(shí)完成該反應(yīng)。所得囊具有50ym的平均直徑。
[031引將0. 84克的囊產(chǎn)品添加至210ml的寶奎小與強(qiáng)大生物液（PersilSmall&Mi曲ty Bio)中，于2013年在英國(guó)商購(gòu)的液體衣物洗涂劑，包含〉15%表面活性劑W及其他助洗劑 和蛋白酶。通過(guò)將0. 35ml脂肪酶濃縮物與175g的液體洗涂劑在磁攬拌下混合來(lái)制備參照。 [0317]將1. 6克的囊產(chǎn)品添加至250ml的單位劑量洗涂劑（白色液相取自汰潰艙白相 (Tide化dsWhite化ase)(于2012年在美國(guó)商購(gòu)）最大的腔室）。通過(guò)將0. 45ml脂肪酶 濃縮物與225g的液體洗涂劑在磁攬拌下混合來(lái)制備參照。
[031引將參照和囊批次分裝入密閉小瓶，每一瓶中大約5 g并在5 °C和3 (TC下在Small&Mi曲ty中儲(chǔ)存8周，并且并在5°C和35°C下在汰潰艙白相燈ide化ds怖ite化ase) 中儲(chǔ)存8周。
[0319] 在儲(chǔ)存之后，通過(guò)使用如實(shí)例2中的標(biāo)準(zhǔn)酶分析方法測(cè)量活性。
[0320] 8周后的殘余活性（相對(duì)于在5°C下儲(chǔ)存的樣品的殘余活性）：
[0321]
[0322] 運(yùn)些結(jié)果顯示，囊化的脂肪酶比非囊化的參照明顯地在更為穩(wěn)定。此外，具有非囊 化脂肪酶的汰潰艙白相燈ide化dsWhite化ase)在存儲(chǔ)時(shí)視覺(jué)上地相分離，而具有囊化 脂肪酶的洗涂劑和不含添加脂肪酶的參照洗涂劑在視覺(jué)上不受影響。
[0323] 運(yùn)表明，當(dāng)存在游離脂肪酶時(shí)，洗涂劑中的脂肪酶敏感組分降解，但當(dāng)脂肪酶被囊 化或不存在時(shí)不會(huì)降解。該汰潰艙白相燈ide化dsWhite化ase)洗涂劑含有氨化藍(lán)麻油， 其是一種脂肪酶敏感成分。
[0324]實(shí)例7 防3巧]將穩(wěn)定劑添加牽胎化酶奪
[0326] 通過(guò)將脂肪酶1 (120mg活性酶/克）的一種水溶液與根據(jù)下表所列的聚乙締亞胺 混合來(lái)制備屯種水相溶液：
[0327]
[0328] 對(duì)于每個(gè)囊，通過(guò)將100mLWhiteway 15與Iml的如實(shí)例2中的高分子乳化劑混 合制備一個(gè)油相。
[0329] 在連續(xù)磁性攬拌下，將運(yùn)些水相中的每個(gè)的2ml添加至該油相W形成具有200 ym 和600 ym之間的平均液滴尺寸的油包水乳劑。
[0330] 通過(guò)將1. Sg的對(duì)苯二甲酯氯用300g Whiteway 15油溶解并且在連續(xù)磁性攬拌下 加熱至85°C來(lái)制備一個(gè)反應(yīng)物油相。
[033。 向每個(gè)油包水乳劑中添加50mL熱反應(yīng)物油相來(lái)引發(fā)界面聚合反應(yīng)和囊形成。允 許在攬拌下1小時(shí)完成該反應(yīng)。
[0332] 然后，允許囊沉降大約5分鐘，棄去上清液并且用Isopar M油沖洗運(yùn)些囊兩次。盡 可能多的排出最終的囊產(chǎn)品中的油。
[033引將125血洗涂劑A與每一批囊混合。
[0334] 將囊批次分裝入密閉小瓶，每一瓶中大約5g并在5°C和30°C下儲(chǔ)存8周。
[0335] 在儲(chǔ)存之后，通過(guò)使用標(biāo)準(zhǔn)酶分析方法（在37°C下，pH= 8. 0水解對(duì)硝基苯基棟 桐酸醋），在脫礦質(zhì)水中初始1:100稀釋（W便促進(jìn)酶從囊中釋放）之后測(cè)量活性。相對(duì)于 在5°c下儲(chǔ)存的樣品計(jì)算殘余活性。相對(duì)于參照計(jì)算活性損失減少。
[0336]
[0337] 結(jié)果證明，將不同的穩(wěn)定劑添加至運(yùn)些囊可W改進(jìn)儲(chǔ)存穩(wěn)定性。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種微囊組合物，包括含洗滌劑酶的微囊，其中該微囊的膜是通過(guò)具有高于IkDa分 子量的多支化的多胺的交聯(lián)而產(chǎn)生，并且其中該洗滌劑酶選自下組，該組由以下各項(xiàng)組成： 蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、纖維素酶、甘露聚糖酶、果膠酶、DNA酶、漆酶、過(guò)氧化物酶、鹵代過(guò) 氧化物酶、過(guò)水解酶、及其組合。2. -種液體洗滌劑組合物，包括總濃度按重量計(jì)是至少3%的表面活性劑和洗滌劑助 洗劑，和含洗滌劑酶的微囊，其中該微囊的膜是通過(guò)具有高于IkDa分子量的多支化的多胺 的交聯(lián)而產(chǎn)生。3. 如權(quán)利要求1或2所述的組合物，其中該多支化的多胺的這些反應(yīng)性氨基構(gòu)成該分 子量的至少15%。4. 如權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的組合物，其中通過(guò)使用?；茸鳛榻宦?lián)劑生成該 微囊。5. 如權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的組合物，其中該微囊的直徑是至少50微米，或大 于50微米。6. 如權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)所述的組合物，其中該微囊包含按重量計(jì)至少1 %的活 性酶。7. 如權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)所述的組合物，該組合物進(jìn)一步包括醇，例如多元醇。8. 如權(quán)利要求2至7中任一項(xiàng)所述的組合物，其中該表面活性劑是陰離子表面活性劑。9. 如權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)所述的組合物，該組合物是液體衣物或自動(dòng)餐具洗滌洗 滌劑組合物。10. 如權(quán)利要求1至9中任一項(xiàng)所述的組合物，該組合物包含按重量計(jì)少于90%的水。11. 如權(quán)利要求2至10中任一項(xiàng)所述的組合物，其中該洗滌劑酶是蛋白酶、淀粉酶、月旨 肪酶、纖維素酶、甘露聚糖酶、果膠酶、DNA酶、氧化還原酶、或其任何組合。12. 如權(quán)利要求1或11所述的組合物，其中該蛋白酶是金屬蛋白酶或堿性絲氨酸蛋白 酶，例如枯草桿菌蛋白酶。13. 如權(quán)利要求1至12中任一項(xiàng)所述的組合物，其中使用酰基氯作為交聯(lián)劑通過(guò)界面 聚合來(lái)生成該微囊。14. 如權(quán)利要求1至13中任一項(xiàng)所述的組合物，其中該多支化的多胺是聚乙烯亞胺。15. 如權(quán)利要求1至14中任一項(xiàng)所述的組合物，其中該微囊包括Mg2+、Ca2+、或Zn2+ 離子的來(lái)源，例如Mg2+、Ca2+、或Zn2+的難溶性鹽。16. -種用于制備洗滌劑組合物的方法，該方法包括將如權(quán)利要求1至15中任一項(xiàng)所 述的微囊組合物與表面活性劑和洗滌劑助洗劑組合。17. -種微囊用于改進(jìn)洗滌劑酶在液體洗滌劑組合物中的穩(wěn)定性的用途，其中該洗 滌劑組合物包括總濃度按重量計(jì)是至少3%的表面活性劑和洗滌劑助洗劑，并且其中該微 囊是通過(guò)多支化的多胺的交聯(lián)而產(chǎn)生，并且其中根據(jù)實(shí)例2中的方法活性損失降低至少 10%，并且其中根據(jù)實(shí)例3中的方法該微囊能夠在3分鐘之內(nèi)釋放至少50%的該酶。18. 根據(jù)權(quán)利要求17所述的用途，其中該多支化的多胺是聚乙烯亞胺。19. 根據(jù)權(quán)利要求2至15中任一項(xiàng)所述的液體洗滌劑組合物用于衣物洗滌或自動(dòng)餐具 洗滌中的用途。
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種(液體洗滌劑)組合物，包括含酶的微囊，該微囊是通過(guò)多支化的多胺的交聯(lián)而產(chǎn)生。
【IPC分類】C11D3/386, C12N9/98, C11D17/00
【公開號(hào)】CN105164244
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201480024047
【發(fā)明人】K.B.安德森, M.福維斯科夫, T.拉斯馬森, O.西蒙森, K.雅各布森, M.諾爾比, L.安德森
【申請(qǐng)人】諾維信公司
【公開日】2015年12月16日
【申請(qǐng)日】2014年5月2日
【公告號(hào)】WO2014177709A1