，氨基區(qū)段或其部 分選自如表7中提供的細(xì)胞表面波形蛋白結(jié)合抗體的氨基酸序列中的一個。
[0036] 在其它方面，實施方案的抗體或多肽包含與細(xì)胞表面波形蛋白結(jié)合抗體（如表7 中所提供）的 V、VJ、VDJ、D、DJ、J 或 CDR 結(jié)構(gòu)域至少 80、85、90、95、96、97、98、99 或 100% 同 一（或其中可導(dǎo)出的任何范圍）的氨基酸區(qū)段。舉例來說，多肽可包含1、2或3個與如表 7中提供的細(xì)胞表面波形蛋白結(jié)合抗體的⑶R 1、2和/或3至少80、85、90、95、96、97、98、 99或100%同一（或其中可導(dǎo)出的任何范圍）的氨基酸區(qū)段。
[0037] 在本發(fā)明的方法和/或組合物的情形下討論的實施方案可關(guān)于本文所述的任何 其它方法或組合物加以采用。因此，涉及一種方法或組合物的一實施方案可也應(yīng)用于本發(fā) 明的其它方法和組合物。
[0038] 如本文在說明書中所用，"一"可意指一個（種）或多個（種）。如本文在權(quán)利要 求中所用，當(dāng)連同措辭"包含"一起使用時，措辭"一"可意指一個（種）或超過一個（種）。
[0039] 除非明確指示僅指代供選擇物或供選擇物是互相排斥的，否則在權(quán)利要求中使用 術(shù)語"或"用于意指"和/或"，但本公開支持僅指代供選擇物以及"和/或"的定義。如本 文所用，"另外"可意指至少第二或第二以上。
[0040] 在整篇本申請中，術(shù)語"約"用于指示值包括用于測定所述值的裝置、方法的固有 誤差偏差或存在于研究受試者之間的偏差。
[0041] 本發(fā)明的其它目標(biāo)、特征和優(yōu)勢將根據(jù)以下詳細(xì)描述而變得顯而易知。然而，應(yīng)了 解盡管指示本發(fā)明的優(yōu)選實施方案，但詳細(xì)描述和特定實施例通過僅說明的方式給出，因 為在本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)的各種變化和修改將根據(jù)這個詳細(xì)描述而變得為本領(lǐng)域技術(shù) 人員顯而易知。
[0042] 附圖簡述
[0043] 以下附圖形成本說明書的一部分，并且被包括來進(jìn)一步說明本發(fā)明的某些方面。 本發(fā)明可通過參照這些附圖中的一個或多個，結(jié)合本文呈現(xiàn)的特定實施方案的詳細(xì)描述來 更充分了解。
[0044] 圖1 :分離和表征細(xì)胞表面波形蛋白（CSV)特異性抗體84-1。圖IA :篩選抗體中 的CSV特異性抗體的圖示。使用流式細(xì)胞計量術(shù)以及針對癌特異性結(jié)合進(jìn)行選擇來分析來 自不同雜交瘤上清液的各池單克隆抗體的CSV結(jié)合性。使用ELISA和蛋白質(zhì)印跡表征所選 抗體的波形蛋白結(jié)合性。圖IB :使用流式細(xì)胞計量術(shù)對不同非上皮正常細(xì)胞系和癌細(xì)胞系 中的CSV表達(dá)的免疫評估：CSV僅可在癌細(xì)胞系SKNBE-2 (成神經(jīng)細(xì)胞瘤）、從患者血液分離 的AML細(xì)胞和LM7 (骨肉瘤）細(xì)胞中檢測，而非上皮正常細(xì)胞HUVEC、HF0B和PBMC是CSV表 達(dá)陰性的。同種型對照用于陰性對照。圖1C:使用流式細(xì)胞計量術(shù)對不同上皮正常細(xì)胞系 和癌細(xì)胞系中的CSV的免疫評估：CSV僅可在癌細(xì)胞系MDA-MB-453 (乳腺癌）、DLD-1 (結(jié)腸 癌）和HLM-6 (肝癌）中檢測，而正常上皮細(xì)胞系HEK-293、NCM-356和MCF-10A是CSV表達(dá) 陰性的。圖ID :使用共焦顯微術(shù)對正常細(xì)胞系和癌細(xì)胞系中的CSV的細(xì)胞表面染色分析： 將HLM-3 (肝癌）和NCM-356 (正常結(jié)腸）細(xì)胞進(jìn)行CSV、WGA (細(xì)胞表面標(biāo)志物）和核染劑 DRAQ5染色。84-1結(jié)合指示與WGA共同定位的細(xì)胞表面波形蛋白，如由圖的用白色箭頭指示 的放大部分所證實。比例尺指示10 μ m。圖IE :使用流式細(xì)胞計量術(shù)對人原發(fā)性和轉(zhuǎn)移性 癌細(xì)胞中的CSV的免疫評估：對人原發(fā)性結(jié)腸癌（HPCl)和人肝轉(zhuǎn)移性癌（HLM3)的分析指 示相較于原發(fā)性HPCl細(xì)胞，CSV在HLM3上充分表達(dá)。圖IF :使用共焦顯微術(shù)于薄Geltrex 涂布的孔上進(jìn)行HPCl源性球體中的CSV檢測：CSV可在球體周邊的少數(shù)細(xì)胞中檢測。核染 劑DRAQ5用于界定細(xì)胞。比例尺指示20 μ m。
[0045] 圖2 :使用84-lmAb分離和計數(shù)CTC的方法。圖2A :84-1介導(dǎo)的CTC檢測、分離、 計數(shù)和分析的圖示。圖2B:使用熒光顯微術(shù)檢測外加至血液中的單細(xì)胞。使用連續(xù)稀釋和 斑點分析來分離單一 LM8細(xì)胞，并且外加至Iml血液中。在RBC溶解之后，將單核細(xì)胞群體 進(jìn)行84-lmAb和AlexaFluor-488二級抗體染色以檢測CSV陽性細(xì)胞。高倍放大顯示檢測 到全血群體中的CSV陽性單細(xì)胞。圖2C :從全血分離單細(xì)胞。使用基于EasyS印的84-1陽 性和⑶45陰性選擇來分離外加至全血中的單細(xì)胞。在37°C下孵育之后2小時，可在培養(yǎng)皿 上觀察到這個單細(xì)胞。圖2D :使用針對CSV、⑶45的抗體和核染劑DRAQ5來將從血液分離 的細(xì)胞的顯微照片共染色。比例尺指示10 μπι。圖2E:從健康、原發(fā)性和轉(zhuǎn)移性患者血液試 樣計數(shù)CSV陽性CTC。來自原發(fā)性癌癥患者的血液用于選擇檢測閾值（虛線）。轉(zhuǎn)移性癌 癥患者樣品顯示相比較來說較高CTC計數(shù)。
[0046] 圖3 :分離的CTC的分子表征。圖3A :對CTC和匹配白細(xì)胞中的KRAS的突變分析。 CTC具有同質(zhì)（中間圖版）和異質(zhì)密碼子13突變（右側(cè)圖版），而白細(xì)胞具有野生型序列 (左側(cè)圖版）。圖3B :對來自尤因肉瘤（EWS)和平滑肌肉瘤（LMS)樣品的CTC的分析。使用 ⑶99標(biāo)志物驗證EWS CTC，并且使用a -SMA染色驗證LMS CTC。比例尺指示10 μ m。圖3C : 針對分子特異性標(biāo)志物來對CTC的分析。針對上皮標(biāo)志物EpCAM、EMT特異性調(diào)控子SLUG、 和E-鈣粘著蛋白將使用84-lmAb分離的CTC染色。比例尺指示10 μ m。圖3D:對CTC的 波形蛋白、連環(huán)蛋白和c-myc表達(dá)的分析。分離來自人結(jié)腸癌樣品的CTC，并且進(jìn)行總 波形蛋白、β-連環(huán)蛋白、c-myc和核染劑DRAQ5染色，此指示患者樣品中的β-連環(huán)蛋白 和c-myc的完全核定位。比例尺指示10 μ m。圖3Ε :原釩酸鈉（SOV)對LM8和WBC的作用。 LM8和WBC用SOV處理，并且使用共焦顯微術(shù)分析CSV的表達(dá)。使細(xì)胞進(jìn)行CSV、細(xì)胞表面 標(biāo)志物WGA和核染劑DRAQ5染色。明顯的是當(dāng)相較于未處理細(xì)胞的CSV表達(dá)時，用SOV處 理癌細(xì)胞15分鐘會增強CSV表達(dá)。未觀察到SOV對WBC具有作用。圖3F :對SOV對患者源 性CTC的作用的分析?；颊哐涸谌芙庵蠼?jīng)受SOV處理，并且使用84-1和核染劑DRAQ5 針對波形蛋白進(jìn)行染色。SOV處理特定增強腫瘤細(xì)胞中CSV的表達(dá)。比例尺指示10 μ m。
[0047] 圖4 :圖4A :使用可商購獲得的抗體對骨肉瘤細(xì)胞系LM7中的CSV的免疫評估。 AMF-17B、EC-40、CS和V-9抗體用于使用流式細(xì)胞計量術(shù)來檢測LM7細(xì)胞上的CSV，然而， 使用這些抗體未觀察到結(jié)合。圖4B :使用流式細(xì)胞計量術(shù)對針對LM7骨肉瘤細(xì)胞系的 CHP-TAMRA肽的免疫評估。CHP-TAMRA肽結(jié)合LM7細(xì)胞，從而指示在這些細(xì)胞上存在CSV。 圖4(：:使用蛋白質(zhì)印跡評估84-1和12-1與^^加蛋白的結(jié)合。將10、100和10001^^^加 裝載于4-20%梯度凝膠上，并且進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡。用84-1和12-1抗體探測印跡。觀察到 抗體對總波形蛋白具有極高親和力。圖4D :制備來自LM7細(xì)胞的細(xì)胞溶解產(chǎn)物，并且使用 84-1和12-1抗體進(jìn)行免疫沉淀并進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡。用cell signaling抗體（兔源，以排 除IgG條帶）探測印跡。圖4E :使用共焦顯微術(shù)在癌細(xì)胞系中進(jìn)行的細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外波形 蛋白染色分析：使HLM-3 (肝癌）細(xì)胞進(jìn)行CSV、WGA和核染劑DRAQ5染色。非滲透化細(xì)胞中 的84-1結(jié)合僅為膜所特有，而滲透化細(xì)胞顯示總波形蛋白水平。比例尺指示20 μ m。
[0048] 圖5 :圖5A :使用免疫熒光成像評估來自人血液的PBMC群體的CSV染色。從人血液 分離PBMC群體，并且連同84-1 -起評估不同標(biāo)志物（⑶3eXDllb和⑶45)染色。在84-1 抗體下，這些細(xì)胞不顯示任何強烈免疫染色。比例尺指示10 μπι。圖5B:使用共焦顯微術(shù) 對正常細(xì)胞系和癌細(xì)胞系的細(xì)胞內(nèi)波形蛋白染色分析：將HLM-3 (肝癌）和NCM-356 (正常 結(jié)腸）細(xì)胞進(jìn)行CSV、WGA (細(xì)胞表面標(biāo)志物）和核染劑DRAQ5染色。84-1結(jié)合指示相較于 NCM-356細(xì)胞，波形蛋白僅存在于HLM3細(xì)胞中。比例尺指示10 μπι。圖5C :使用流式細(xì)胞 計量術(shù)對從骨肉瘤患者樣品分離的細(xì)胞中的CSV的免疫評估：對0ST-DL-391 (無轉(zhuǎn)移）和 0ST-DL-396A (向腦轉(zhuǎn)移）的分析指示相較于0ST-DL-391細(xì)胞的分?jǐn)?shù)，0ST-DL-396A的關(guān)于 CSV的細(xì)胞分?jǐn)?shù)增加。圖:使用流式細(xì)胞計量術(shù)對人原發(fā)性和轉(zhuǎn)移性癌細(xì)胞中的CSV的 免疫評估：對人原發(fā)性結(jié)腸癌（HPC)和人肝轉(zhuǎn)移性癌（HLM)的分析指示相較于原發(fā)性HPCl 細(xì)胞，CSV在HLM3上充分表達(dá)。CPM-I代表從轉(zhuǎn)移自結(jié)腸的肺癌分離的細(xì)胞，并且相較于原 發(fā)性癌細(xì)胞的CSV顯示CSV增加。圖5E :使用共焦顯微術(shù)于薄Geltrex涂布的孔上的HPCl 源性球體中的波形蛋白和β-連環(huán)蛋白表達(dá)：在球體的周邊的少數(shù)細(xì)胞中可檢測到總波形 蛋白，此與β-連環(huán)蛋白的核積累增加相關(guān)聯(lián)。核染劑DRAQ5用于界定細(xì)胞。比例尺指示 20 μ m〇
[0049] 圖6 :圖6A :腫瘤細(xì)胞與免疫細(xì)胞之間的相互作用。評估從血液分離的單核群體的 84-1、⑶45和DRAQ5染色。⑶45陽性免疫細(xì)胞與84-1陽性腫瘤細(xì)胞相互作用，如通過核的 尺寸所確定。圖6B和6C :對小鼠中的CTC的連續(xù)分析：用LM8 (圖6B)或CT-26 (圖6C)細(xì) 胞植入小鼠。通過下頌下面頰放血方法來獲得約200 μ 1血液。在約每周間隔下獲得樣品 直至小鼠由于腫瘤負(fù)擔(dān)而被安樂死。左側(cè)圖版指示每周計數(shù)的CTC，以正常小鼠作為對照。 顯示圖6Β和6C的右側(cè)圖版上的代表性數(shù)據(jù)，其來自各自分別具有LM8或CT-26腫瘤的一只 小鼠。此處表示的數(shù)據(jù)是在每周間隔下獲得的CTC相對于腫瘤體積的圖。圖6D:使用針對 CSV、⑶45的抗體和核染劑DRAQ5來將從血液分離的細(xì)胞的顯微照片共染色。比例尺指示 10 μπι。圖6E :分離和培養(yǎng)從LM8(上部圖版）和CT-26(下部圖版）分離的CTC，持續(xù)八天 監(jiān)測所述CTC的細(xì)胞集落形成。比例尺指示?ομπι。圖6F:檢測犬模型中的84-1陽性CTC。 分離來自血液樣品的CTC，并且通過亮視野和熒光顯微術(shù)來分析。分離CTC，并且在96孔板 上培養(yǎng)并獲取亮視野圖像。對于熒光成像，使CTC進(jìn)行CSV、CD45和核染劑DRAQ5染色，并 且通過共焦顯微術(shù)來分析。使用鈣黃綠素-AM染色來測試細(xì)胞活力。比例尺代表10 μπι。
[0050] 圖7 :圖7Α :使從患者的血液分離的單核細(xì)胞進(jìn)行84-1染色。可觀察到這些細(xì)胞 不同于血液中的PBMC群體。圖7Β:從CRC患者分離的CTC的細(xì)胞培養(yǎng)。在96孔板中在體 外培養(yǎng)從結(jié)腸癌患者的血液分離的84-1+CTC，并且用于單細(xì)胞分析。圖7C :通過流動式細(xì) 胞測量分析進(jìn)行的MDA-MB-46884-1分析。使MDA-MB-468細(xì)胞進(jìn)行84-1染色，并且分析 CSV結(jié)合陽性細(xì)胞分?jǐn)?shù)。圖7D :原釩酸鈉（SOV)處理誘導(dǎo)CSV在LM7細(xì)胞上表達(dá)，如通過流 式細(xì)胞計量術(shù)所目視觀察。
[0051] 圖8 :使用12-1抗體和DRAQ5 (核染劑）針對細(xì)胞表面波形蛋白將使用12-1單克 隆抗體提取的LM7細(xì)胞染色。比例尺指示10 μ m。
[0052] 圖9 :比較使用84-1、CellSearch和84-1+CellSearch進(jìn)行的乳腺癌CTC檢測方 法。來自各轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者的一管血液用于通過84-1方法（圖9A)和CellSearch方法 (圖9B)來計數(shù)CTC。由84-1方法與CellSearch方法兩者計算CTC的平均數(shù)（圖9C)。將 這些患者分類為穩(wěn)定（對療法響應(yīng)）和進(jìn)行性（不對療法響應(yīng)，顯示腫瘤進(jìn)展）群體。
[0053] 圖10 :比較使用84-1和CellSearch進(jìn)行的前列腺癌CTC檢測方法。來自各前列 腺癌患者的一管血液用于通過84-1方法和CellSearch方法來計數(shù)CTC。將這些患者分類 為穩(wěn)定（對療法響應(yīng)）和進(jìn)行性（不對療法響應(yīng)，顯示腫瘤進(jìn)展）群體。
[0054] 圖11 :抗體12-1強度圖。數(shù)據(jù)定量繼之以產(chǎn)生肽和強度圖以及預(yù)染色（底部圖） 和主要測定（1:5000 -中間圖；1:1000 -頂部圖）的強度圖，其中IOaa肽在左側(cè)，12aa肽 在中間，并且15aa肽在右側(cè)。
[0055] 圖12 :抗體84-1強度圖。數(shù)據(jù)定量繼之以產(chǎn)生肽和強度圖以及預(yù)染色（底部圖） 和主要測定（1:5000 -中間圖；1:1000 -頂部圖）的強度圖，其中IOaa肽在左側(cè)，12aa肽 在中間，并且15aa肽在右側(cè)。
[0056] 圖13 :組合抗體12-1和84-1強度圖。比較小鼠單克隆抗體12-1(中間圖）和 84-1(頂部圖）的強度圖揭示兩種樣品具有顯著類似性，其中IOaa肽在左側(cè)，12aa肽在中 間，并且15aa肽在右側(cè)。
[0057] 圖14 :抗體12-1的MEME基序。
[0058] 圖15 :抗體84-1的MEME基序。
[0059] 說明性實施方案的描述
[0060] 檢測癌癥患者的外周血液中的循環(huán)腫瘤細(xì)胞（CTC)正作為新穎工具而出現(xiàn)在對 若干類型的轉(zhuǎn)移性癌癥的早期診斷和預(yù)測中。目前，CTC標(biāo)志物限于上皮癌，并且不能檢測 非上皮（即間質(zhì)）和上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的（EMT)癌細(xì)胞類型。在本文中，本發(fā)明者報道一種 新穎癌細(xì)胞表面波形蛋白（CSV)特異性單克隆抗體84-1，其顯示對非上皮和EMTCTC的高特 異性和靈敏性（可從100萬個血細(xì)胞檢測1個CTC)。這使得84-1成為一種用于CTC檢測 和分離的理想工具。此外，本發(fā)明者也發(fā)現(xiàn)一種使用磷酸酶抑制劑刺激CTC上波形蛋白的 細(xì)胞表面表達(dá)，從而增加檢測和分離的效率的方法。CTC的檢測和分子表征是轉(zhuǎn)化癌癥研 究的一個最快速增長領(lǐng)域。利用本發(fā)明者的細(xì)胞表面標(biāo)志物，本發(fā)明者可計數(shù)、分離和分析 CTC以有助于早期檢測腫瘤、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)。同樣，84-1是一種用于監(jiān)測和評估個人化療法在 癌癥患者中的效率的潛在工具。另外，使用84-1抗體分離的CTC可被詳細(xì)研究，包括通過 基因組測序來分子表征以檢測任何突變，此將有助于開發(fā)特異性靶向療法，這是個體化用 藥的最終目標(biāo)。
[0061] 本發(fā)明包括：A)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞表面波形蛋白作為一種從癌癥患者的血液檢測和分離 間質(zhì)和上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的循環(huán)腫瘤細(xì)胞的新穎生物標(biāo)志物；B) -種對循環(huán)腫瘤細(xì)胞上的細(xì) 胞表面波形蛋白的檢測具有特異性的抗體；以及C)特異性磷酸酶抑制劑增強/刺激CTC上 的細(xì)胞表面波形蛋白的表達(dá)，從而增強部分B)中的抗體的檢測能力的用途。
[0062] I.本發(fā)明抗體
[0063] 在某些實施方案中，涵蓋結(jié)合細(xì)胞表面波形蛋白的至少一部分以及特異性檢測循 環(huán)腫瘤細(xì)胞的表面上的波形蛋白的抗體或其片段，以及它在診斷和治療疾病方面的相關(guān)用 途。如本文所用，術(shù)語"抗體"意圖廣泛指代任何免疫結(jié)合劑，如IgG、IgM、IgA、IgD和IgE 以及保留抗原結(jié)合活性的包含抗體CDR結(jié)構(gòu)域的多肽?？贵w可選自由以下組成的組：嵌合 抗體、親和力成熟抗體、多克隆抗體、單克隆抗體、人源化抗體、人抗體或抗原結(jié)合抗體片段 或天然或合成配體。優(yōu)選地，抗波形蛋白抗體是單克隆抗體或人源化抗體。通過已知手段 以及如本文所述，可產(chǎn)生對細(xì)胞表面波形蛋白、它的一個或多個相應(yīng)表位、或任何前述各物 的綴合物具有特異性的多克隆或單克隆抗體、抗體片段以及結(jié)合結(jié)構(gòu)域和CDR(包括任何 前述各物的工程化形式），無論所述抗原或表位從天然來源分離或是天然化合物的合成衍 生物或變體。
[0064] 適于本發(fā)明的抗體片段的實例包括不限于：（i)由VL、VH、CL和CHl結(jié)構(gòu)域組成的 Fab片段；（ii)由VH和CHl結(jié)構(gòu)域組成的"Fd"片段；（iii)由單一抗體的VL和VH結(jié)構(gòu)域 組成的"Fv"片段；（iv)由VH結(jié)構(gòu)域組成的"dAb"片段；(V)分離的CDR區(qū)；（vi)F(ab'）2 片段，即包含兩個連接的Fab片段的二價片段；(vii)單鏈Fv分子（"scFv"），其中VH結(jié) 構(gòu)域和VL結(jié)構(gòu)域由使兩個結(jié)構(gòu)域締合以形成結(jié)合結(jié)構(gòu)域的肽連接體連接；(viii)雙特異 性單鏈Fv二聚體（參見美國專利號5, 091，513);和（ix)雙鏈抗體，即通過基因融合構(gòu)建 的多價或多特異性片段（美國專利申請公布20050214860)。可通過并入連接VH結(jié)構(gòu)域和 VL結(jié)構(gòu)域的二硫橋來使Fv、scFv或雙鏈抗體分子穩(wěn)定。也可制備包含接合于CH3結(jié)構(gòu)域 的scFv的微抗體（Hu等，1996)。
[0065] 抗體樣結(jié)合肽模擬物也涵蓋在實施方案中。Liu等（2003)描述"抗體樣結(jié)合肽模 擬物"（ABiP)，其是充當(dāng)削減抗體，并且具有某些優(yōu)勢（血清半衰期較長以及合成方法的繁 重性較?。┑碾?。也涵蓋可用于檢測CTC上的細(xì)胞表面波形蛋白的附加工具，包括適體（例 如從DNA或RNA分子產(chǎn)生）、小肽和納米粒子。
[0066] 動物可用抗原，如6-His標(biāo)志物的可溶性波形蛋白（NCBI登記號P08670,以引用的 方式并入本文）接種以產(chǎn)生對波形蛋白具有特異性的抗體。常常，使抗原結(jié)合或綴合于另 一分子以增強免疫應(yīng)答。如本文所用，綴合物是結(jié)合于用于在動物中引發(fā)免疫應(yīng)答的抗原 的任何肽、多肽、蛋白質(zhì)或非蛋白質(zhì)物質(zhì)。在動物中應(yīng)答于抗原接種產(chǎn)生的抗體包括由多種 個別抗體產(chǎn)生性B淋巴細(xì)胞制得的多種非相同分子（多克隆抗體）。多克隆抗體是其各自 可識別相同抗原上的不同表位的抗體種類的混合群體。鑒于動物中多克隆抗體產(chǎn)生的恰當(dāng) 條件，所述動物的血清中的大多數(shù)抗體將識別所述動物已針對其加以免疫的抗原性化合物 上的集合表位。通過親和純化來進(jìn)一步增強這個特異性以僅選擇識別目標(biāo)抗原或表位的那 些抗體。在針對波形蛋白的抗體的情況下，可通過測定與在它們的表面上表達(dá)或不表達(dá)波 形蛋白的細(xì)胞的差異性結(jié)合來確定用于檢測細(xì)胞表面波形蛋白的選擇性。
[0067] 單克隆抗體是單一種類的抗體，其中每個抗體分子都識別相同表位，因為所有抗 體產(chǎn)生性細(xì)胞都源于單一 B淋巴細(xì)胞細(xì)胞系。用于產(chǎn)生單克隆抗體（Mb)的方法通常沿與 用于制備多克隆抗體的那些品系相同的品系開始。在一些實施方案中，如小鼠和大鼠的嚙 齒動物用于產(chǎn)生單克隆抗體。在一些實施方案中，兔、綿羊或蛙細(xì)胞用于產(chǎn)生單克隆抗體。 大鼠的使用是熟知的，并且可提供某些優(yōu)勢。小鼠（例如BALB/c小鼠）被常規(guī)使用，并且 通常產(chǎn)生高百分比的穩(wěn)定融合。
[0068] 雜交瘤技術(shù)涉及使來自先前用波形蛋白抗原免疫的小鼠的單一 B淋巴細(xì)胞與永 生骨髓瘤細(xì)胞（通常是小鼠骨髓瘤）融合。這個技術(shù)提供一種持續(xù)無限數(shù)目的世代來繁 殖單一抗體產(chǎn)生性細(xì)胞，以