變 和變化。對(duì)示例性實(shí)施例進(jìn)行選擇和描述的目的在于解釋本發(fā)明的特定原理及其實(shí)際應(yīng) 用，從而使得本領(lǐng)域的技術(shù)人員能夠?qū)崿F(xiàn)并利用本發(fā)明的各種不同的示例性實(shí)施方案以及 各種不同的選擇和改變。本發(fā)明的范圍意在由權(quán)利要求書及其等同形式所限定。
[0061] SEQUENCE LISTING <1.1:0>廣西壯族自治區(qū)獸歷研:究蔚 <120>同時(shí)鑒別8種感染人不同亞型禽流感病毒HA基因的GeXlM央速檢測(cè)引物組、試 劑盒及其應(yīng)用 <1.30> ZYWS <160> 20 < 17 0>Patentliiversie? 3.3 <2!0>1<211> 42 <2!2> DNA <213>人工序列 <400> 1 agglgacaci alagaatalc Ugcacltga yaligiggal 1c 42 <210> 2<2!1> 43 <2i2> DNA <213>人工序列 <400> 2 glacgaclca ciaiagggaa caaaatgacc alcgicaaca lee 43 <2!0> 3 <211> 40 <212> DNA <213> 人工序列 <400> 3 aggtgacacl aiagaaiacc agaaygtgca Icciaicacl 40 <2!0> 4 <211> 41
[0062] <2!2->DNA <213>人工序列 <400 4 gtacgactca clalagggal alcallcctg Iccawccccc ? 41 <210> 5<211> 41 <212> DNA <213>人工序列 <400> 5 aggigiicaeUtuigaatatt 狂agattytgc e 41 <210> 6 、'211> 40 <212，- DNA <213>人工序列 <400> 6： gtaegaetca cMagggac cagaeGalgi Iccigaagaa 40 <210> 7 <211> 43 <212> DMA <213>人工序列 <400> 7 agglgacaet atagaatal gccaMcal gytuugcl Ug 43 <210> <211> 44 <212>DNA <213>人工序列 <4(m8 gtaegaetca etatagggaa；atgeaaatgi tgoaectaat gttg 44 <210>9<211> 42
[0063] <212>DNA <213>_人工序列 <400>§ aggigacacl aiagaalagg aaagtgtaag aaacggaacg la 42 <210>10<211> 42 <212> DN八 <213>人工序列<400>]〇 glacgaclca clatagggac aeatccataa agayagacca gc 42 <2i〇> π<211> <212> DNA <213>尺工序列 <：400-> 11 aggtgaeact atagaatatc tGaaacaag；| ececteie 38 <210>12<211> 39 <212> DNA <2]3>人工序列 <400> 12 gtacgactca ctatagggat cccallicgg gcaltaggc 39 <210> 13<211> 41 <212> DNA <213>人工序列 <400 13 aggigacaci aiagaataag gataGEgatt pcecagtsa ：a 41 <210> 14 <21i> 39
[0064] <212>DNA <213>人工序列 <400> 14 giacgacica claiaiiggac ccatlgcaai ggchagaag <210> 15 <211> 40 <212> DNA <213>人工序列 <400〉 15 agglgiicaet atagaataac calttattcg aclgtegcct 40 <210> 16<2il>M <212> DNA <213>人工序列 <4〇0> 16 gtacgactca ctatagggac attggaQatg gcecagaa 38 <210> 17 <211> 35 <212> DNA <213>人工序列 <4?)?)> 17 aggtgacact atagaataaa cacggacacr gctga <210> 18 <2I1> 39 <212> DNA <213>人工序列 <400> IS gtacgactca0tatagggaa ttgttctggt awgtggaac 39 <210> 19<2!丨>18
[0065] <212>DNA <213>人工序列 <400> 19 agglgacacl alagaala IS <210 20<21!> 19 <212>DNA<213>人工序列 <400> 20 gtacgaclca clat.aggga .U
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種同時(shí)鑒別8種感染人不同亞型禽流感病毒HA基因的GeXP快速檢測(cè)引物組，其 特征在于：包括9對(duì)特異性引物和1對(duì)通用引物；9對(duì)特異性引物分別是引物對(duì)A1和A2、弓丨 物對(duì)B1和B2、引物對(duì)C1和C2、引物對(duì)D1和D2、引物對(duì)E1和E1、引物對(duì)F1和F2、引物對(duì) G1和G2、引物對(duì)H1和H2、引物對(duì)11和12 ; 1對(duì)通用引物為Cy5-Tag-F和Tag-R;其分別具 有如SEQIDNo. 1至SEQIDNo. 20所示的序列。2. -種同時(shí)鑒別8種感染人不同亞型禽流感病毒HA基因的GeXP快速檢測(cè)試劑盒，包 括cDNA、10XPCRbuffer、MgCl2、dNTP、JumpstartTaqpolymerase、9對(duì)特異性引物、1 對(duì)通 用引物和RNA-free7K，其特征在于：所述的9對(duì)特異性引物、1對(duì)通用引物分別具有如SEQ IDNo. 1至SEQIDNo. 20所示的序列。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的同時(shí)鑒別8種感染人不同亞型禽流感病毒HA基因的GeXP 快速檢測(cè)試劑盒，其特征在于：所述的9對(duì)特異性引物A1和A2、引物對(duì)B1和B2、引物對(duì) C1和C2、引物對(duì)D1和D2、引物對(duì)E1和E2、引物對(duì)F1和F2、引物對(duì)G1和G2在PCR反應(yīng)體 系中對(duì)應(yīng)的的摩爾濃度分別為 150nmol/L、100nmol/L、100nmol/L、150nmol/L、100nmol/L、 100nmol/L、100nmol/L、100nmol/L、lOOnmol/L;所述的通用引物Cy5_Tag_F、Tag-R在PCR反 應(yīng)體系中的摩爾濃度為500nmol/L。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的同時(shí)鑒別8種感染人不同亞型禽流感病毒HA基因的GeXP快 速檢測(cè)試劑盒，其特征在于：所述的試劑盒的總體積為25μL/管，其中包含：cDNA2. 0μL， 10XPCRbuffer2. 5μL,MgCl22. 5μL,dNTP1μL,JumpstartTaqpolymerase1.2yL, 9對(duì)特異性引物混合物1. 25μL，上、下游通用引物混合物1. 25μL，RNA-free水補(bǔ)足至 25μL〇5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時(shí)鑒別8種感染人不同亞型禽流感病毒HA基因的GeXP快 速檢測(cè)引物組或權(quán)利要求2-4任一所述的同時(shí)鑒別8種感染人不同亞型禽流感病毒HA基 因的GeXP快速檢測(cè)試劑盒在鑒別Hl、H2、H3、H5、H6、H7、H9和H10亞型禽流感病毒中的應(yīng) 用。
【專利摘要】本發(fā)明屬于禽類病毒檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，本發(fā)明公開了一種同時(shí)鑒別8種感染人不同亞型禽流感病毒HA基因的GeXP快速檢測(cè)引物組、試劑盒及其應(yīng)用。發(fā)明人基于GeXP系統(tǒng)研究設(shè)計(jì)了9對(duì)特異性引物和1對(duì)通用引物，據(jù)此建立了同時(shí)鑒別8種感染人不同亞型禽流感病毒HA基因的GeXP快速檢測(cè)試劑盒。應(yīng)用本發(fā)明可同時(shí)鑒別M、H1、H2、H3、H5、H6、H7、H9和H109個(gè)基因的八種感染人不同亞型禽流感病毒HA基因，靈敏度為102拷貝/μL。本發(fā)明具有高通量、特異性強(qiáng)、靈敏度高且快速等優(yōu)點(diǎn)，對(duì)感染人不同亞型禽流感病毒的流行病學(xué)調(diào)查及其鑒別診斷具有重要意義。
【IPC分類】C12Q1/70, C12N15/11, C12R1/93, C12Q1/68
【公開號(hào)】CN105349697
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510843579
【發(fā)明人】謝芝勛, 李孟, 謝志勤, 羅思思, 謝麗基, 黃莉, 鄧顯文, 黃嬌玲, 范晴, 張艷芳, 曾婷婷, 王盛
【申請(qǐng)人】廣西壯族自治區(qū)獸醫(yī)研究所
【公開日】2016年2月24日
【申請(qǐng)日】2015年11月27日