>[0224] MS-ESI: (ESI, pos. ion)m/z ：551. 25 [M+l]+.
[0225] 實(shí)施例5 (E) -I-(⑶-3- (4-氨基-3- (4-苯氧基苯基）-IH-吡唑并[3, 4-d] 嘧啶-1-基）哌啶-1-基）-4-((lS，4S)-2-氧-5-氮雜二環(huán)[2. 2. 1]庚烷-5-基） 丁 -2-烯-1-酮
[0227] (S，E) -1- (3- (4-氨基-3- (4-苯氧基苯基）-IH-吡唑并[3, 4-d]嘧啶-1-基）哌 啶-卜基）-4-溴代丁-2-稀-1-酮（200mg，0.38mmol)溶于DMF(15mL)中，加入碳酸鉀 (74mg, 0· 75mmol)和 2-氧-5-氮雜雙環(huán)[2. 2. 1]庚烷（74mg, 0· 75mmol)。60°C 反應(yīng) 4h， 減壓蒸除溶劑，加入水（20mL)，二氯甲烷萃?。?0mLX 3)，飽和食鹽水洗（20mL)，無(wú)水硫酸 鈉干燥，減壓蒸除溶劑，產(chǎn)物粗品柱層析分離純化（二氯甲烷/甲醇（V/V) = 8/1)得產(chǎn)物 (173mg, 83. 7% ) 〇
[0228] MS-ESI: (ESI, pos. ion)m/z ：283. 75[Μ/2+1]+；
[0229] 1H NMR (600MHz, DMSO) : δ 8. 25 (s, 1H)，7. 65 (t, J = 6. 7Hz, 2H)，7. 43 (t, J = 7. 7Hz, 2H)，7. 19 (s，1H)，7. 18-7. 07 (m，4H)，6. 66 (m，1H)，6. 56-6. 42 (m，1H)，4. 30 (m，1H)，4. 05 (d，J =11. 9Hz，1H)，3. 88-3. 73 (m，1H)，3. 46-3. 29 (m，6H)，3. 25-3. 16 (m，2H)，2. 83-2. 58 (m，1H)， 2.42(m，1H) ,2.25 (d，J = 12.0Hz，1H)，2. 11 (m，1H) ,2.00-1. 89 (m，1H)，1.72 (m，1H)，1.55 (m ,2H).
[0230]實(shí)施例 6 (E) -I- ((R) -3- (4-氨基-3- (4-苯氧基苯基）-IH-吡唑并[3, 4-d] 嘧啶-1-基）哌啶-1-基）-4-((lR，4R)-2-硫-5-氮雜雙環(huán)[2. 2. 1]庚烷-5-基） 丁 -2-烯-1-酮
[0232] (E)-1_[(3R)-3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基）吡唑并[3, 4-d]嘧 啶-I-基]-卜哌啶基]-4-溴-丁-2-稀-1-酮（50mg, 0· Ilmmol)溶于DMF(15mL)中，加入 (IS, 4S)-2-硫-5-氮雜雙環(huán)[2. 2. 1]庚烷（20mg，(λ 17mmol)和碳酸鉀（48mg，(λ 35mmol)， 60°C下攪拌4h，減壓蒸除溶劑，加入水（20mL)，二氯甲烷（50mLX3)萃取，飽和食鹽水洗 (20mL)，無(wú)水硫酸鈉干燥，減壓蒸除溶劑，產(chǎn)物粗品柱層析分離純化（二氯甲烷/乙酸乙酯 (V/V) = 10/1)得產(chǎn)物（15mg，28% )。
[0233] MS-ESI: (ESI, pos. ion)m/z ：568. 2 [M+l]+；
[0234] 1H NMR(400MHz，CDCl3) δ 8· 39 (s，1H)，7· 66 (d，J = 8. 6Hz，2H)，7· 41 (t，J = 8. OHz ，2Η)，7· 24-7. 03 (m，5Η)，6· 83 (s，1Η)，6· 53 (dd，J = 50. 4, 16. 0Hz，1Η)，5· 69 (s，2Η)，4· 87 (s ，2Η)，4· 55 (d，J = 9· 9Ηζ，1Η)，4· 15 (dd，J = 49. 2, 15. 7Ηζ，1Η)，3· 89-3. 68 (m，2Η)，3· 52-3. 2 6 (m，4Η)，3· 11 (dd，J = 35. 4, 9· 4Ηζ，2Η)，2· 98-2. 79 (m，3Η)，2· 46-2. 13 (m，5Η)，2· 02 (d，J = 12. 9Hz, 2Η), 1. 88-1. 64 (m, 2Η).
[0235] 實(shí)施例7 ((R, Ε) -1- (3- (4-氨基-3- (4-苯氧基苯基）-IH-吡唑并[3, 4-d]嘧 啶-1-基）哌啶-1-基）-4-(2-氧-7-氮雜螺[3. 5]壬烷-7-基）丁-2-烯-1-酮的合成
[0237] (E) -I- ((3R) -3-[4-氨基-3- (4-苯氧基苯基）吡唑并[3, 4-d]嘧啶-1-基]-1-哌 啶基）-4-溴-丁 -2-稀-1-酮（74mg, 0· 14mmol)溶于 DMF (15mL)中，加入 2-氧-7-氮雜 螺[3. 5]壬燒（36mg, 0. 28mmol)和碳酸鉀（49mg, 0. 35mmol)，然后在60°C下攪拌反應(yīng)，TLC 監(jiān)測(cè)反應(yīng)完全后，減壓蒸除溶劑，加入水（20mL)，二氯甲烷萃?。?0mLX3)，飽和食鹽水洗 (20mL)，無(wú)水硫酸鈉干燥，減壓蒸除溶劑，產(chǎn)物粗品柱層析分離純化（二氯甲烷/甲醇（V/V) =10/1)得產(chǎn)物（18mg，23% )。
[0238] MS-ESI: (ESI, pos. ion)m/z ：583. 2 [M+l]+；
[0239] 1H Mffi(400MHz，CDCl3) δ 8. 37(s，1H)，7. 66(d，J = 8. 7Hz，2H)，7· 41 (t，J = 7.9Hz，2H)，7.19(dd，J = 12.8,8. 0Hz，3H) ,7.10 (d，J = 7·7Ηζ，2Η) ,6.86 (s，lH)，6.57-6 .35 (m, 1H), 5. 65 (s, 2H), 4. 87 (s, 1H), 4. 56 (s, OH), 4. 41 (d, J = 12. 6Hz, 4H), 4. 18 (d, J = 13. 3Hz, 1H), 4. 06 (d, J = 15. 5Hz, 1H), 3. 78 (s, 1H), 3. 66 (s, 1H), 3. 38 (s, OH), 3. 14 (d, J = 33. OHz, 2H), 2. 93 (s, 1H), 2. 41 (d, J = 26. 5Hz, 5H), 2. 26 (d, J = 10. 1Hz, 2H), I. 97 (dd, J = 37. 2, 19. 8Hz, 6H), I. 74 (d, J = 13. 2Hz, 1H).
[0240] 實(shí)施例8 (E) -I- (3- (4-氨基-3- (4-苯氧基苯基）-IH-吡唑并[3, 4-d]嘧 啶-1-基）哌啶-1-基）-4- (2-氧-6-氮雜螺[3. 4]辛烷-6-基）丁 -2-烯-1-酮
[0242] (S，E) -1- (3- (4-氨基-3- (4-苯氧基苯基）-IH-吡唑并[3, 4-d]嘧啶-1-基）哌 啶-卜基）-4-溴代丁-2-稀-1-酮（200mg，0.38mmol)溶于DMF(15mL)中，加入碳酸鉀 (150mg, I. 5mmol)和 2-氧-6-氮雜螺[3. 3]庚燒草酸鹽（152mg, 0· 75mmol)，然后在 60°C下 反應(yīng)4h。加入水（20mL)，二氯甲燒（50X3)萃取，飽和食鹽水洗（20mL)，無(wú)水硫酸鈉干燥， 減壓蒸除溶劑，產(chǎn)物粗品柱層析分離純化（二氯甲烷/乙酸乙酯（V/V) = 8/1)得白色固體 (90mg, 42. 43% ) 〇
[0243] MS-ESI: (ESI, pos. ion)m/z ：283. 75[Μ/2+1]+；
[0244] IH NMR (600MHz, CDCl3) δ 8. 37 (d, J = 10. 9Hz, 1H)，7. 66 (d, J = 8. 4Hz, 2H), 7. 41 (t, J = 7. 8Hz, 2H), 7. 18 (dd, J = 16. 7, 7. 8Hz, 3H), 7. 10 (d, J = 7. 9Hz, 2H), 6. 85 (d, J = 15. 3Hz, 1H), 6. 48 (dd, J = 55. 6, 14. 7Hz, 1H), 5. 71 (s, 2H), 4. 88 (s, 1H), 4. 62 (m, 4H), 4. 13 (dd, J = 80. 9, 12. 3Hz, 1H), 3. 79 (t, J=IL 2Hz, 1H), 3. 71-3. 58 (m, I H), 3. 24 (m, 2H), 2. 87 (m, 2H), 2. 60 (m, 2H), 2. 48-2. 31 (m, 2H), 2. 30-2. 23 (m, 1H), 2. 15 (m, 2H ),2. 03 (m, 2H), I. 74 (m, 1H).
[0245] 生物實(shí)施例1本發(fā)明化合物的體外酶學(xué)抑制活性
[0246] 實(shí)驗(yàn)方法：HEPES :羥乙基哌嗪乙硫磺酸；Brij-35 :十二烷基聚乙二醇醚；DTT :二 硫蘇糖醇；Η)ΤΑ :乙二胺四乙酸；BTK :布魯頓酪氨酸激酶；Peptide FAM-P22 :熒光素標(biāo)記肽 22 ;ATP :三磷酸酸腺苷；Staurosporine :星孢菌素 ；Coating Reagent#3 :#3 被膜劑
[0247] I. IX激酶緩沖液及終止實(shí)驗(yàn)緩沖液配制：
[0248] (I) I X 激酶緩沖液（50mM HEPES, pH 7. 5, 0· 0015 % Bri j-35, IOmM MgCl2, 2mM DTT) ; (2)終止實(shí)驗(yàn)緩沖液（IOOmM HEPES, pH 7· 5, 0· 015 % Bri j-35, 0· 2 % Coating Reagent#3, 50mM EDTA)〇
[0249] 2.測(cè)試激酶的化合物準(zhǔn)備：化合物連續(xù)稀釋
[0250] (1)采用100% DMSO將化合物稀釋到最高終濃度的50倍。將100 μ L該濃度的化 合物溶液轉(zhuǎn)移至96孔板的一孔。（2)按20 μ L原溶液用60 μ L DMSO稀釋的比例依次稀釋 化合物10個(gè)濃度。（3)將100 μ L 100% DMSO溶液加入到兩個(gè)空孔中，作為無(wú)化合物對(duì)照 和無(wú)酶對(duì)照。（4)準(zhǔn)備一張中間板，分別將IOyL各濃度化合物從原板中轉(zhuǎn)移到中間板，并 加入90 μ L Ix激酶緩沖液，振蕩混勻10分鐘。（5)準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)板：從96孔板的中間板中對(duì) 應(yīng)孔轉(zhuǎn)移5 μ L化合物溶液到對(duì)應(yīng)的384孔板中。
[0251] 3.激酶反應(yīng)
[0252] (1)準(zhǔn)備2. 5χ酶溶液：將酶加入Ix激酶緩沖液中。（2)準(zhǔn)備2. 5χ肽溶液：將熒光 素標(biāo)記肽和ATP加入Ix激酶緩沖液中。（3)將10 μ L 2. 5χ酶溶液加入到含有5 μ L DMSO 含量為10 %的化合物溶液的384孔實(shí)驗(yàn)板中，室溫孵育10分鐘。（4)將10 μ L 2. 5χ肽溶 液加入384孔實(shí)驗(yàn)板中。（5)激酶反應(yīng)及終止：28°C孵育相應(yīng)的時(shí)間，加入25 μ L終止緩沖 液終止反應(yīng)。
[0253] 4.數(shù)據(jù)測(cè)量：讀取數(shù)據(jù)并收集。
[0254] 5.曲線擬合
[0255] (1)拷貝并轉(zhuǎn)換測(cè)量的數(shù)據(jù)；（2)轉(zhuǎn)換為抑制率：抑制率=(最大值-樣本值）/ (最大值-最小值）*1〇〇 最大值"為無(wú)化合物對(duì)照值；"最小值"為無(wú)激酶對(duì)照孔數(shù)值；（3) 將數(shù)據(jù)輸入相應(yīng)分析軟件)(Ifit得出IC5。值。
[0256] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：
[0257] 表2本發(fā)明化合物的體外酶學(xué)抑制活性
[0260] 對(duì)照為Ibrutinib，具體結(jié)構(gòu)為：
[0261] 實(shí)驗(yàn)結(jié)論：由表2可見，本發(fā)明化合物對(duì)BTK激酶有較強(qiáng)的抑制作用，且基本具有 與Ibrutinib相當(dāng)?shù)幕钚浴?br>【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種化合物，其為如式（I)所示的結(jié)構(gòu)，或如式（I)所示的結(jié)構(gòu)的立體異構(gòu)體，幾何 異構(gòu)體，互變異構(gòu)體，氮氧化物，水合物，溶劑化物，代謝產(chǎn)物，醋，藥學(xué)上可接受的鹽或它的 前藥，其中，R為C5 12稠合雜雙環(huán)基，C5 12螺雜雙環(huán)基，C5 12橋雜雙環(huán)基或-L-R1; Rl為C5 12稠合雜雙環(huán)基，C5 12螺雜雙環(huán)基，C5 12橋雜雙環(huán)基或C2 9雜環(huán)基； L為-畑2)n_ ;η為 1，2,3 或 4 ; 所述的Cs12稠合雜雙環(huán)基，Ce12螺雜雙環(huán)基，Ce12橋雜雙環(huán)基和C2e雜環(huán)基可W獨(dú)立地 被氨，氧代（=0)，徑基，氯基，硝基，面素，氨基，簇基，烷基，烷氧基，燒氨基，燒硫基，徑基 烷基，氨基烷基，面代烷基，環(huán)烷基，雜環(huán)基，芳基，雜芳基或氨基酷基單取代或相同或不同 的多取代。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所示的化合物，其中，各χ?，χ2和X3獨(dú)立地為-(CH2)b-，-〇-，-NH-或-s( = 0)t-; 各X4,X5和X6獨(dú)立地為-CH-，或-N-; 各b獨(dú)立地為0，1，2,3,或4 ; 各q，m和P獨(dú)立地為0,1，2,3,或4 ; 各t獨(dú)立地為0,1或2 ; 所述的Ri和R所代表的子結(jié)構(gòu)式，可W獨(dú)立地被氨，氧代（=0)，徑基，氯基，硝基，面 素，氨基，簇基，Cl 4烷基，C 1 4烷氧基，C 1 4燒氨基，C 1 4燒硫基，徑基C 1 4烷基，氨基C 1 4烷基， 面代。4烷基，C3巧烷基，C2凍環(huán)基，Ce12芳基，C1凍芳基或氨基酷基單取代或相同或不 同的多取代。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中， R為如下子結(jié)構(gòu)式：4. 一種化合物，其為如下結(jié)構(gòu)，或所述化合物的立體異構(gòu)體，幾何異構(gòu)體，互變I. 異構(gòu)體，氮氧化物，水合物，溶劑化物，代謝產(chǎn)物，醋，藥學(xué)上可接受的鹽或它的前藥。5. -種藥物組合物，包含權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的化合物。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的藥物組合物，進(jìn)一步包含藥學(xué)上可接受的載體，賦形劑，稀釋 劑，輔劑和媒介物的至少一種。7. 權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的化合物或權(quán)利要求5-6任一項(xiàng)所述的藥物組合物用于制 備、預(yù)防、處理或防護(hù)B細(xì)胞增殖性疾病的藥物的用途。8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的用途，所述的B細(xì)胞增殖性疾病為彌漫型大B細(xì)胞淋己瘤、濾 泡性淋己瘤或慢性淋己細(xì)胞白血病。9. 權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的化合物或權(quán)利要求5-6任一項(xiàng)所述的藥物組合物用于制 備抑制BTK激酶的抑制劑的用途。
【專利摘要】本發(fā)明提供一種BTK抑制劑化合物(如式(I)所示的結(jié)構(gòu))及其在藥物中的用途。本發(fā)明提供的化合物及其藥物組合物可用于治療彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤或慢性淋巴細(xì)胞白血病。
【IPC分類】A61P35/00, A61P35/02, C07D487/04, A61K31/519, C07D519/00, A61K31/5377
【公開號(hào)】CN105399756
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510553396
【發(fā)明人】劉兵, 柏舜, 張英俊, 鄭常春, 楊悌平, 周有柏
【申請(qǐng)人】廣東東陽(yáng)光藥業(yè)有限公司
【公開日】2016年3月16日
【申請(qǐng)日】2015年9月1日