索非布韋的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及Sofosbuvir的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 丙型病毒性肝炎，簡稱為丙型肝炎、丙肝，是一種由丙型肝炎病毒（HCV)感染引起 的病毒性肝炎，主要經(jīng)輸血、針刺、吸毒等傳播，據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計，全球HCV的感染率約 為3 %，估計約1. 8億人感染了HCV，每年新發(fā)丙型肝炎病例約3. 5萬例。丙型肝炎呈全球性 流行，可導(dǎo)致肝臟慢性炎癥壞死和纖維化，部分患者可發(fā)展為肝硬化甚至肝細胞癌（HCC)。 未來20年內(nèi)與HCV感染相關(guān)的死亡率（肝衰竭及肝細胞癌導(dǎo)致的死亡）將繼續(xù)增加，對患 者的健康和生命危害極大，已成為嚴(yán)重的社會和公共衛(wèi)生問題。
[0003] HCV病毒體呈球形，直徑小于80nm(在肝細胞中為36~40nm，在血液中為 36-62nm)，為單股正鏈RNA病毒，在核衣殼外包繞含脂質(zhì)的囊膜，囊膜上有刺突。HCV僅有 Huh7,Huh7. 5,Huh7. 5. 1三種體外細胞培養(yǎng)系統(tǒng)，黑猩猩可感染HCV，但癥狀較輕。HCV-RNA 大約有9500 -lOOOObp組成，5'和3'非編碼區(qū)（NCR)分別有319-341bp，和27-55bp，含 有幾個順向和反向重復(fù)序列，可能與基因復(fù)制有關(guān)。在5'非編碼區(qū)下游緊接一開放的閱 讀框（0RF)，其中基因組排列順序為5' -C-El-E2-p7-NS2-NS3-NS4-NS5-3'，能編碼一長度 大約為3014個氨基酸的多聚蛋白前體，后者可經(jīng)宿主細胞和病毒自身蛋白酶作用后，裂解 成10種病毒蛋白，包括三種結(jié)構(gòu)蛋白，即分子量19KD的核衣殼蛋白（或稱核心蛋白，Core) 和兩種糖蛋白（分子量為33KD的El蛋白，分子量72Kd的E2蛋白），p7編碼一種膜內(nèi)在蛋 白，其功能可能是一種離子通道。非結(jié)構(gòu)蛋白部分則包括NS2,NS3，NS4A，NS5A和NS5B，非 結(jié)構(gòu)蛋白對比病毒的生活周期非常重要。NS2和NS3具有蛋白酶活性，參與病毒多聚蛋白 前體的切割。此外，NS3蛋白還具有螺旋酶活性，參與解旋HCV-RNA分子，以協(xié)助RNA復(fù)制， NS4的功能尚不清楚。NS5A是一種磷酸蛋白，可以與多種宿主細胞蛋白相互作用，對于病毒 的復(fù)制起重要作用。而NS5B則具有RNA依賴的RNA聚合酶活性，參與HCV基因組復(fù)制。
[0004] 在治療前應(yīng)明確患者的肝臟疾病是否由HCV感染引起，只有確診為血清HCVRNA陽 性的丙型病毒性肝炎患者才需要抗病毒治療。抗病毒治療目前得到公認(rèn)的最有效的方案 是：長效干擾素PEG-IFNa聯(lián)合應(yīng)用利巴韋林，也是現(xiàn)在EASL已批準(zhǔn)的慢性丙型病毒性肝 炎治療的標(biāo)準(zhǔn)方案（S0C)，其次是普通IFNα或復(fù)合IFN與利巴韋林聯(lián)合療法，均優(yōu)于單用 IFNa。聚乙二醇（PEG)干擾素a(PEG-IFNa)是在IFNa分子上交聯(lián)無活性、無毒性的 PEG分子，延緩IFNa注射后的吸收和體內(nèi)清除過程，其半衰期較長，每周1次給藥即可維持 有效血藥濃度。
[0005] 直接作用抗病毒藥物（DAA)蛋白酶抑制劑博賽匹韋（B0C)或特拉匹韋（TVR)，與干 擾素聯(lián)合利巴韋林的三聯(lián)治療，2011年5月在美國開始批準(zhǔn)用于臨床，推薦用于基因型為1 型的HCV感染者，可提高治愈率。博賽匹韋（B0C)飯后，每天三次（每7-9小時），或特拉匹 韋（TVR)飯后（非低脂飲食），每日三次（每7-9小時）。期間應(yīng)密切監(jiān)測HCVRNA，若發(fā)生 病毒學(xué)突破（血清HCVRNA在最低值后上升>1log)，應(yīng)停用蛋白酶抑制劑。
[0006] 2013年FDA批準(zhǔn)吉利德公司Sofosbuvir作為聯(lián)合抗病毒治療方案的一部分，用于 治療慢性丙肝感染。Sofosbuvir是一種丙型肝炎病毒復(fù)制所必需的HCVNS5BRNA-依賴 RNA聚合酶的抑制劑。Sofosbuvir是一類核苷氨基磷酸酯（S)-異丙基-2- ((S) - (((2R，3R，4 R，5R) -5- (2, 4-二氧-3, 4-二氫嘧啶-1 (2H)-基）-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基） 甲氧基）（苯氧基）膦?；┌被┍狨サ男滦椭苽浞椒ǎ祟惡塑瞻被姿狨镽NA-依 賴性RNA病毒復(fù)制的抑制劑，并且可用作HCVNS5B聚合酶抑制劑、HCV復(fù)制的抑制劑，以及 用于治療哺乳動物中丙型肝炎的感染。
[0007] 該藥是一種核苷酸前藥在細胞內(nèi)進行代謝形成藥理學(xué)活性尿嘧啶類似物三磷酸 (GS-461203)，通過NS5B聚合酶可摻入至HCVRNA和作用如同鏈終止物。在一個生化分析 中，GS-461203抑制來自HCV基因lb，2a，3a和4a型重組NS5B的聚合酶活性，有IC50值范 圍從0. 7至2. 6μM。GS-461203不是人類DNA和RNA聚合酶的抑制劑也不是線粒體RNA聚 合酶的抑制劑。
[0008] 吉利德公司表示，Sovaldi可以單用也可與利巴韋林聯(lián)合使用。作為一種傳統(tǒng)的 抗感染藥，利巴韋林適用于伴有2型和3型基因感染的患者治療，屬于這兩種基因型的感 染者約占美國丙肝患者的近30%，而70%則歸于1型基因感染者，在美國占比最大，且干 擾素治療不適用于該類患者，但對于此次的新型抗感染藥而言，Sovaldi聯(lián)用利巴韋林和 干擾素能起到一定的治療效果。另外，雖然屬于4型基因的感染者占比極小，但上述的三 藥聯(lián)合方案仍可用于該類型感染的治療。據(jù)多項研究結(jié)果表明，相較于目前的治療方案， 吉利德的這種抗感染藥在清除率占優(yōu)的同時，不良反應(yīng)也較少。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 本發(fā)明的目的在于提供一種式（I)化合物的制備方法，式（I)化合物的tf-NMR 數(shù)據(jù)如附圖1所示。
[0010]
[0011] P#表示手性磷原子
[0012] (1)使原料A和原料B在合適的路易斯酸和堿的作用下反應(yīng)以獲得化合物C的混 合液；其中原料A結(jié)構(gòu)式中的LG代表離去基團；
[0013] (2)將化合物C的混合液進行后處理以得到純凈的化合物C，
[0014]
[0015] 優(yōu)選的，所述后處理包括色譜分析、萃取、結(jié)晶、打漿。
[0016] 優(yōu)選的，所述離去基團LG選自苯酚類，羥基吡啶類，羥基喹啉類，羥基三唑類，咪 唑類或萘酚類化合物的離去基團。
[0017] 更優(yōu)選的，當(dāng)離去基團LG為苯酚類時，所述離去基團選自五氟苯氧基，4-硝基苯 氧基，2, 4-二硝基苯氧基或4-氯苯氧基。
[0018] 更優(yōu)選的，當(dāng)離去基團LG為羥基吡啶類時，所述離去基團選自2-羥基-6-氯吡 陡，2-羥基氣啦陡，2 -羥基氣啦陡，3-羥基氣啦陡，4-羥基氣啦陡或 3-溴-5-羥基吡啶。
[0019] 優(yōu)選的，該反應(yīng)使用的溶劑是無水THF。
[0020] 優(yōu)選的，所述路易斯酸基本是無水的。
[0021 ] 更優(yōu)選的，所述路易斯酸選自氯化鋅、溴化鋅、氯化鋁或氯化鎂。
[0022] 優(yōu)選的，反應(yīng)所使用的堿基本是無水的。
[0023] 更優(yōu)選的，所述堿選自N，N-二異丙基乙基胺（DIEA)、1，8-二氮雜雙環(huán)[5.4.0] 十一碳-7-烯（DBU)、三乙胺、叔丁醇鉀或N-甲基嗎啉。
[0024] 優(yōu)選的，原料A:原料比B:路易斯酸：堿的摩爾比約為1. 4-2. 2 :1 :1. 2-1. 8 : 1. 2-1. 8,優(yōu)選 2 :1 :1. 6 :1· 6。
[0025] 優(yōu)選的，所述反應(yīng)的溫度控制在45-60 °C。
[0026] 進一步優(yōu)選的，本發(fā)明的制備方法具體包括：
[0027] (1)將原料A、原料B、路易斯酸和堿一起投入到反應(yīng)瓶中，再加入適量無水THF，油 浴內(nèi)反應(yīng)至少20小時；
[0028] 反應(yīng)完成后，降至室溫；
[0029] 加入適量乙酸乙酯稀釋反應(yīng)液，加入適量飽和NH4C1溶液淬滅，萃取，有機相用適 量稀酸洗，萃取，有機相用堿洗，萃取，有機相用緩沖溶液洗，萃取，有機相用適量鹽水洗，旋 干有機相，得到化合物C的第一粗品；
[0030] 在得到的化合物C的第一粗品中加入適量二氯甲烷/甲苯=1/1的混合溶液析 晶，過濾，得到化合物C的第二粗品；
[0031] 在得到的化合物C的第二粗品中加入適量乙酸乙酯/二氯甲烷=1/5的混合溶液 打漿，得到純的化合物C。
[0032] 優(yōu)選的，所述緩沖液為堿金屬碳酸鹽/堿金屬碳酸氫鹽的緩沖液。
[0033] 進一步優(yōu)選的，本發(fā)明的制備方法包括：
[0034] 將原料A、原料B、路易斯酸和堿一起投入到反應(yīng)瓶中，再加入10V無水THF，放置在 55°C的油浴內(nèi)反應(yīng)20小時；
[0035] 用TLC檢測，反應(yīng)完成，自然降溫到室溫；
[0036] 加入20V乙酸乙酯稀釋反應(yīng)液，加入20V飽和NH4C1溶液淬滅，萃取，有機相用20V 稀鹽酸（0. 5N)洗，萃取，有機相用2V飽和碳酸氫鈉洗，萃取，有機相用2X20V碳酸鈉（5 % ) 和碳酸氫鈉（5% )緩沖溶液洗，萃取，有機相用2X20V食鹽水洗，旋干有機相，得到C的第 一粗品（油狀物）；
[0037] 在得到的C的第一粗品中加入10V二氯甲烷/甲苯=1/1的混合溶液析晶，過濾， 得到C的第二粗品（白色固體）；
[0038] 在得到的C的第二粗品中加入10V乙酸乙酯/二氯甲烷=1/5的混合溶液打漿， 得到純的C。
[0039] 本發(fā)明通過摸索影響化合物C制備的各種影響因素，首創(chuàng)性的利用路易斯酸以及 常用的有機堿作為反應(yīng)助劑來制備索非布韋，該反應(yīng)是路易斯酸通過配位來活化磷氧雙 鍵，降低P*手性中心的空間位阻，利于原料A中鹵代羥基吡啶基團的離去，剩下的片段與原 料B發(fā)生了親核取代反應(yīng)?，F(xiàn)有技術(shù)曾使用2. 1當(dāng)量的叔丁基氯化鎂和原料B在0°C下反 應(yīng)，形成親核力較強的氧負(fù)離子，再發(fā)生親核取代反應(yīng)生成成品。
[0040] 與現(xiàn)有技術(shù)路線相比，本發(fā)明有以下優(yōu)勢：
[0041] 1)反應(yīng)條件溫和，過程易控，避開了使用叔丁基氯化鎂那樣易燃易爆的強堿，降低 了反應(yīng)的危險性；
[0042] 2)生產(chǎn)成本低，相比于現(xiàn)有技術(shù)的工藝，本發(fā)明使用的路易斯酸和有機堿價格低 廉，易得；
[0043] 3)操作簡單，本發(fā)明只需將各原料在常溫下加在一起再加熱反應(yīng)即可，即"一鍋 煮"法，相比于現(xiàn)有技術(shù)在低溫下分步投料更簡便高效；
[0044] 4)本發(fā)明后處理簡單，無須中和過量的強堿，單位產(chǎn)品排放的廢棄物少。綜上所 述，本方法能夠達到反應(yīng)溫和、成本低、操作簡單及環(huán)境友好的效果。
[0045] 在此基礎(chǔ)上，發(fā)明人進一步的研究，發(fā)現(xiàn)通過對化合物A離去基團的篩選能夠更 好地促進化合物C的制備效果，發(fā)明人最終選定了多種