子與啟動(dòng)子3'末端緊密 鄰接存在，或優(yōu)選地與啟動(dòng)子3'末端相隔最多56個(gè)核巧酸、甚至更優(yōu)選地相隔最多39個(gè)核 巧酸和甚至更優(yōu)選地相隔最多17個(gè)核巧酸。17個(gè)核巧酸長度的優(yōu)選間隔序列在SEQ ID NO. 140中給出。
[0067] 本發(fā)明的啟動(dòng)子優(yōu)選地是最小啟動(dòng)子，并且因此優(yōu)選地僅由為實(shí)現(xiàn)祀基因表達(dá)所 需要的最小長度和核巧酸序列組成，其中所述祀基因與所述啟動(dòng)子和增強(qiáng)子或非翻譯區(qū)功 能性連接。W運(yùn)種方式，因本發(fā)明增強(qiáng)子的短長度所致的上述優(yōu)點(diǎn)保留。特別地，最小啟動(dòng) 子和本發(fā)明增強(qiáng)子的組合允許提供并不遠(yuǎn)長于祀基因的如下文描述的表達(dá)盒。因此，最小 啟動(dòng)子和本發(fā)明增強(qiáng)子的組合還允許在載體中克隆長核巧酸序列和使用在尺寸上受限制 的轉(zhuǎn)化手段。當(dāng)試圖在植物中建立需要引入多個(gè)基因的新代謝途徑時(shí)，運(yùn)特別重要。運(yùn)類途 徑例如在W0 2005083093、W0 2007017419、W0 2007042510和W0 2007096387中描述。
[0068] 啟動(dòng)子也可W在W下意義上是最小的，即它僅由特定環(huán)境下作為啟動(dòng)子發(fā)揮作用 所要求的最小長度核巧酸序列組成，例如驅(qū)動(dòng)與所述啟動(dòng)子功能性連接的基因僅在特定植 物組織、發(fā)育階段或在特定環(huán)境條件下如熱脅迫或受病原體感染時(shí)表達(dá)。根據(jù)本發(fā)明，啟動(dòng) 子還可W比最小啟動(dòng)子更長或包含較其更多的影響轉(zhuǎn)錄的元件(例如轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)）。 合適的啟動(dòng)子例如在W0 2002102970、W0 2009077478、W0 2010000708和W0 2012077020中 描述，所述文獻(xiàn)的內(nèi)容通過引用的方式并入本文。
[0069] 優(yōu)選的啟動(dòng)子包含TATA框，所述TATA框優(yōu)選地包含SEQ ID NO. 108、更優(yōu)選地包含 與SEQ ID NO. 107具有至少89%同一性的序列并包含SEQ ID NO. 108,并且更優(yōu)選地包含 SEQ ID NO. 107。運(yùn)種TATA框促進(jìn)轉(zhuǎn)錄開始，尤其在植物細(xì)胞中如此。由于TATA框至少包含 植物TATA框的核屯、基序SEQ ID NO. 108,所W至少可W在植物中實(shí)現(xiàn)啟動(dòng)子的最小活性。如 果該啟動(dòng)子不包含確切序列SEQ ID NO. 107,則該啟動(dòng)子優(yōu)選地至少包含與之相似的序列。 運(yùn)種相似的序列含有確切序列SEQ ID NO. 108并且與SEQ ID NO. 107具有最小89%的同一 性并且因此優(yōu)選地與SEQ ID NO. 107的序列最多2個(gè)核巧酸不同，并且甚至更優(yōu)選地與SEQ ID NO. 107的序列最多1個(gè)核巧酸不同。
[0070] 優(yōu)選的啟動(dòng)子包含CPRF因子結(jié)合位點(diǎn)，所述CPRF因子結(jié)合位點(diǎn)優(yōu)選地包含SEQ ID NO. 114、更優(yōu)選地包含與SEQ ID NO. 113具有至少90%同一性的序列并包含SEQ ID NO. 114,并且更優(yōu)選地包含SEQ ID NO. 113。在運(yùn)類啟動(dòng)子不包含確切序列SEQ ID NO. 113 的情況下，它包含與SEQ ID NO. 113最多1個(gè)核巧酸的序列不同并且含有確切序列SEQ ID NO.114。
[0071] 優(yōu)選的啟動(dòng)子包含TCP I類轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)，所述TCP I類轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)優(yōu) 選地包含SEQ ID NO. 116、更優(yōu)選地包含與SEQ ID NO. 115具有至少90%同一性的序列并包 含SEQ ID NO. 116,并且更優(yōu)選地包含SEQ ID NO. 115。在運(yùn)類啟動(dòng)子不包含確切序列SEQ ID NO. 115的情況下，它包含與SEQ ID NO. 115最多1個(gè)核巧酸的序列不同并且含有確切序 列沈Q ID NO. 116。
[0072] 優(yōu)選的啟動(dòng)子包含bZIP蛋白G框結(jié)合因子1結(jié)合位點(diǎn)，所述bZIP蛋白G框結(jié)合因子1 結(jié)合位點(diǎn)優(yōu)選地包含SEQ ID NO. 118、更優(yōu)選地包含與SEQ ID NO. 117具有至少85%同一性 的序列并包含SEQ ID NO. 118,并且更優(yōu)選地包含SEQ ID NO. 117。如果該啟動(dòng)子不包含確 切序列SEQ ID NO. 117,則該啟動(dòng)子優(yōu)選地至少包含與之相似的序列。運(yùn)種相似的序列含有 確切序列SEQ ID NO. 118并且與SEQ ID NO. 117具有最小85%的同一性并且因此優(yōu)選地與 SEQ ID NO. 117的序列最多3個(gè)核巧酸不同，更優(yōu)選地與SEQ ID NO. 117的序列最多2個(gè)核巧 酸不同，并且甚至更優(yōu)選地與SEQ ID NO. 117的序列最多1個(gè)核巧酸不同。
[0073] 優(yōu)選的啟動(dòng)子包含Ry基序，所述Ry基序優(yōu)選地包含SEQ ID NO. 110、更優(yōu)選地包含 與SEQ ID NO. 109具有至少88%同一性的序列并包含SEQ ID NO. 110,并且更優(yōu)選地包含 SEQ ID NO. 109。在運(yùn)種啟動(dòng)子不包含確切序列SEQ ID NO. 109的情況下，它含有確切序列 SEQ ID NO. 110并且與SEQ ID NO. 109具有最小88%的同一性并且因此優(yōu)選地與SEQ ID NO. 109的序列最多3個(gè)核巧酸不同，更優(yōu)選地與SEQ ID NO. 109的序列最多2個(gè)核巧酸不同， 并且甚至更優(yōu)選地與SEQ ID NO. 109的序列最多1個(gè)核巧酸不同。
[0074] 優(yōu)選的啟動(dòng)子包含谷醇溶蛋白框，所述谷醇溶蛋白框優(yōu)選地包含SEQ ID NO. 112、 更優(yōu)選地包含與SEQ ID NO. Ill具有至少90%同一性的序列并包含SEQ ID NO. 112,并且更 優(yōu)選地包含SEQ ID NO. Ill。在運(yùn)種啟動(dòng)子不包含確切序列SEQ ID NO. Ill的情況下，它含 有確切序列SEQ ID NO. 112并且與SEQ ID NO. Ill具有最小90%的同一性并且因此優(yōu)選地 與SEQ ID NO. 111的序列最多2個(gè)核巧酸不同，并且甚至更優(yōu)選地與SEQ ID NO. 111的序列 最多1個(gè)核巧酸不同。
[0075] 優(yōu)選的啟動(dòng)子包含如賦予光誘導(dǎo)性的GAPDH啟動(dòng)子中的順式元件，所述順式元件 優(yōu)選地包含SEQ ID NO. 120、更優(yōu)選地包含與SEQ ID NO. 119具有至少90%同一性的序列并 包含SEQ ID NO. 120,并且更優(yōu)選地包含SEQ ID NO. 119。在運(yùn)種啟動(dòng)子不包含確切序列SEQ ID NO. 119的情況下，它含有確切序列沈Q ID NO. 120并且與沈Q ID NO. 119具有最小90% 的同一性并且因此優(yōu)選地與SEQ ID NO. 119的序列最多2個(gè)核巧酸不同，并且甚至更優(yōu)選地 與SEQ ID NO. 119的序列最多1個(gè)核巧酸不同。
[0076] 優(yōu)選的啟動(dòng)子包含SBF-1結(jié)合位點(diǎn)，所述SBF-1結(jié)合位點(diǎn)優(yōu)選地包含SEQ ID NO. 122、更優(yōu)選地包含與SEQ ID NO. 121具有至少90%同一性的序列并包含SEQ ID NO. 122,并且更優(yōu)選地包含SEQ ID NO. 121。在運(yùn)種啟動(dòng)子不包含確切序列SEQ ID NO. 121 的情況下，它含有確切序列SEQ ID NO. 122并且與SEQ ID NO. 121具有最小90%的同一性并 且因此優(yōu)選地與SEQ ID NO. 121的序列最多2個(gè)核巧酸不同，并且甚至更優(yōu)選地與SEQ ID NO. 121的序列最多1個(gè)核巧酸不同。
[OOW]優(yōu)選的啟動(dòng)子包含向日葵同源域亮氨酸拉鏈蛋白化化-4結(jié)合位點(diǎn)，所述結(jié)合位點(diǎn) 優(yōu)選地包含SEQ ID NO. 124、更優(yōu)選地包含與SEQ ID NO. 123具有至少80%同一性的序列并 包含SEQ ID NO. 124,并且更優(yōu)選地包含SEQ ID NO. 123。在運(yùn)種啟動(dòng)子不包含確切序列SEQ ID NO. 123的情況下，它含有確切序列沈Q ID NO. 124并且與沈Q ID NO. 123具有最小80% 的同一性并且因此優(yōu)選地與SEQ ID NO. 123的序列最多2個(gè)核巧酸不同，并且甚至更優(yōu)選地 與SEQ ID NO. 123的序列最多1個(gè)核巧酸不同。
[0078] 優(yōu)選的啟動(dòng)子包含轉(zhuǎn)錄阻遏蛋白邸化RINGER，所述轉(zhuǎn)錄阻遏蛋白邸化RING邸優(yōu)選 地包含SEQ ID NO. 126、更優(yōu)選地包含與SEQ ID NO. 125具有至少80%同一性的序列并包含 SEQ ID NO. 126,并且更優(yōu)選地包含SEQ ID NO. 125。在運(yùn)種啟動(dòng)子不包含確切序列SEQ ID NO. 125的情況下，它含有確切序列沈Q ID NO. 126并且與沈Q ID NO. 125具有最小80%的同 一性并且因此優(yōu)選地與SEQ ID NO. 125的序列最多2個(gè)核巧酸不同，并且甚至更優(yōu)選地與 SEQ ID NO. 125的序列最多1個(gè)核巧酸不同。
[0079] 優(yōu)選的啟動(dòng)子包含花同源異型蛋白APETALA1，所述APETALA1優(yōu)選地包含SEQ ID NO. 128、更優(yōu)選地包含與SEQ ID NO. 127具有至少85%同一性的序列并包含SEQ ID NO. 128,并且更優(yōu)選地包含SEQ ID NO. 127。在運(yùn)種啟動(dòng)子不包含確切序列SEQ ID NO. 127 的情況下，它含有確切序列SEQ ID NO. 128并且與SEQ ID NO. 127具有最小85%的同一性并 且因此優(yōu)選地與SEQ ID NO. 127的序列最多3個(gè)核巧酸不同，更優(yōu)選地與SEQ ID NO. 127的 序列最多2個(gè)核巧酸不同，并且甚至更優(yōu)選地與SEQ ID NO. 127的序列最多1個(gè)核巧酸不同。
[0080] 優(yōu)選的啟動(dòng)子包含CBF表達(dá)誘導(dǎo)物1，也稱作AtMYC2(rd22BPl)，所述CBF表達(dá)誘導(dǎo) 物1優(yōu)選地包含SEQ ID NO. 130、更優(yōu)選地包含與SEQ ID NO. 129具有至少85%同一性的序 列并包含SEQ ID NO. 130,并且更優(yōu)選地包含SEQ ID NO. 129。在運(yùn)種啟動(dòng)子不包含確切序 列沈Q ID NO. 129的情況下，它含有確切序列沈Q ID NO. 130并且與SEQ ID NO. 129具有最 小85%的同一性并且因此優(yōu)選地與SEQ ID NO. 129的序列最多2個(gè)核巧酸不同，并且甚至更 優(yōu)選地與SEQ ID NO. 129的序列最多1個(gè)核巧酸不同。
[0081 ]優(yōu)選的啟動(dòng)子包含bZIP因子DPBF-1和/或2的結(jié)合位點(diǎn)，所述結(jié)合位點(diǎn)優(yōu)選地包含 沈Q ID NO. 132、更優(yōu)選地包含與SEQ ID NO. 131具有至少81 %同一性的序列并包含沈Q ID NO. 132,并且更優(yōu)選地包含SEQ ID NO. 131。在運(yùn)種啟動(dòng)子不包含確切序列SEQ ID NO. 131 的情況下，它含有確切序列SEQ ID NO. 132并且與SEQ ID NO. 131具有最小81 %的同一性并 且因此優(yōu)選地與SEQ ID NO. 131的序列最多2個(gè)核巧酸不同，并且甚至更優(yōu)選地與SEQ ID NO. 131的序列最多1個(gè)核巧酸不同。
[0082] 優(yōu)選的啟動(dòng)子包含I類GATA因子的結(jié)合位點(diǎn)，所述結(jié)合位點(diǎn)優(yōu)選地包含SEQ ID NO. 134、更優(yōu)選地包含與SEQ ID NO. 133具有至少88%同一性的序列并包含SEQ ID NO. 134,并且更優(yōu)選地包含SEQ ID NO. 133。在運(yùn)種啟動(dòng)子不包含確切序列SEQ ID NO. 133 的情況下，它含有確切序列SEQ ID NO. 134并且與SEQ ID NO. 133具有最小88%的同一性并 且因此優(yōu)選地與SEQ ID NO. 133的序列最多2個(gè)核巧酸不同，并且甚至更優(yōu)選地與SEQ ID NO. 133的序列最多1個(gè)核巧酸不同。
[0083] 優(yōu)選的啟動(dòng)子包含Dof2單一鋒指轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合位點(diǎn)，所述結(jié)合位點(diǎn)優(yōu)選地包含 沈Q ID NO. 136、更優(yōu)選地包含與SEQ ID NO. 135具有至少88%同一性的序列并包含沈Q ID NO. 136,并且更優(yōu)選地包含SEQ ID NO. 135。在運(yùn)種啟動(dòng)子不包含確切序列SEQ ID NO. 135 的情況下，它含有確切序列SEQ ID NO. 136并且與SEQ ID NO. 135具有最小88%的同一性并 且因此優(yōu)選地與SEQ ID NO. 135的序列最多2個(gè)核巧酸不同，并且甚至更優(yōu)選地與SEQ ID NO. 135的序列最多1個(gè)核巧酸不同。
[0084] 優(yōu)選的啟動(dòng)子包含兩種或更多種前述轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)或順式活性元件的組合。 優(yōu)選地，該啟動(dòng)子包含各自如上文定義的TATA框、CPRF結(jié)合位點(diǎn)、TCP I類轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位 點(diǎn)和bZIP蛋白G框結(jié)合因子1結(jié)合位點(diǎn)。特別優(yōu)選運(yùn)樣的啟動(dòng)子，所述啟動(dòng)子包含序列SEQ ID NO. 138和/或沈Q ID NO. 139,或與運(yùn)些序列中任一者至少70%同一、優(yōu)選地80%同一、 更優(yōu)選地至少90%同一的序列，并且甚至更優(yōu)選地與運(yùn)些序列中任一者最多10個(gè)核巧酸不 同、甚至更優(yōu)選地最多9個(gè)核巧酸不同、甚至更優(yōu)選地最多8個(gè)核巧酸不同、甚至更優(yōu)選地最 多7個(gè)核巧酸不同、甚至更優(yōu)選地最多6個(gè)核巧酸不同、甚至更優(yōu)選地最多5個(gè)核巧酸不同、 甚至更優(yōu)選地最多4個(gè)核巧酸不同、甚至更優(yōu)選地最多3個(gè)核巧酸不同、甚至更優(yōu)選地最多2 個(gè)核巧酸不同、甚至更優(yōu)選地最多1個(gè)核巧酸不同。在運(yùn)種啟動(dòng)子包含與SEQ ID NO. 138至 少70%同一的序列情況下，該啟動(dòng)子優(yōu)選地包含如上文定義的轉(zhuǎn)錄因子CPRF、TCP I類轉(zhuǎn)錄 因子和bZIP蛋白G框結(jié)合因子1中每一者的至少一個(gè)結(jié)合位點(diǎn)，并且優(yōu)選地至少包含根據(jù) 沈Q ID NO. 114、118和120的每個(gè)序列。在運(yùn)種啟動(dòng)子包含與SEQ ID NO. 139至少70%同一 的序列情況下，該啟動(dòng)子優(yōu)選地包含如上文定義的轉(zhuǎn)錄因子邸化RINGER、A陽TALAUCBF表 達(dá)誘導(dǎo)物UDPBF-1和2、1類GATA因子和Dof2中每一者的至少一個(gè)結(jié)合位點(diǎn)，并且優(yōu)選地至 少包含根據(jù)沈Q ID N0.126、128、130、132、134和136的每個(gè)序列。
[0085] 本文中提到的轉(zhuǎn)錄因子的功能是技術(shù)人員已知的。通過提供(例如如上文定義)相 應(yīng)的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)，技術(shù)人員實(shí)現(xiàn)了運(yùn)些轉(zhuǎn)錄因子的作用中固有的益處。特別地，技術(shù) 人員可w組合兩個(gè)或更多個(gè)并且優(yōu)選地全部前述的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)。
[0086] 就本發(fā)明而言，將核酸序列之間的差異計(jì)算為一個(gè)序列轉(zhuǎn)化成另一個(gè)序列所需要 的最少置換、插入或缺失數(shù)目。因此，例如，序列"ACGT"和"ATGT"存在1個(gè)核巧酸不同并且相 對(duì)第一序列具有75 %序列同一性，并且序列"AACCGGTr和"AACTGTr存在2個(gè)核巧酸不同， 良P，一個(gè)缺失和一個(gè)置換，并且相對(duì)第一序列具有87.5 %序列同一性。出于本發(fā)明目的，序 列WDNA序列形式給出，相應(yīng)RNA序列視為相同，從而不考慮叩'由"U"置換并且反之亦然。
[0087] 啟動(dòng)子的長度優(yōu)選地是至少或確切地98個(gè)核巧酸、甚至更優(yōu)選地至少或確切地 142個(gè)核巧酸、甚至更優(yōu)選地至少或確切地160個(gè)核巧酸、甚至更優(yōu)選地至少或確切地197個(gè) 核巧酸、甚至更優(yōu)選地至少或確切地235個(gè)核巧酸和甚至更優(yōu)選地至少或確切地1063個(gè)核 巧酸。具有不多于98個(gè)核巧酸長度的啟動(dòng)子特別合適克隆處于嚴(yán)重尺寸限制下的祀基因； 不多于142個(gè)核巧酸的啟動(dòng)子仍然還可用于克隆處于嚴(yán)重尺寸限制下的祀基因；不多于160 個(gè)核巧酸的啟動(dòng)子仍然還可用于克隆處于嚴(yán)重尺寸限制下的祀基因，但是較不優(yōu)選，原因 是其尺寸較大；不多于197個(gè)核巧酸的啟動(dòng)子仍然還可用于克隆處于嚴(yán)重尺寸限制下的祀 基因，但是較不優(yōu)選，原因是其尺寸較大；不多于235個(gè)核巧酸的啟動(dòng)子仍然還可用于克隆 處于嚴(yán)重尺寸限制下的祀基因，但是較不優(yōu)選，原因是其尺寸較大。合適的啟動(dòng)子優(yōu)選地在 沈9 10側(cè).141、144、147、150、153、156和159的任一者中給出和還在沈9 10側(cè).171-220、 231-275和286-300的任一者中給出的那些當(dāng)中選出。合適的啟動(dòng)子還優(yōu)選地在與SEQ ID N0.141、144、147、150、153、156、159、171-220、231-275 和 286-300 中任一者具有至少 70%、 更優(yōu)選地至少80 %和更優(yōu)選地至少90 %序列同一性的那些當(dāng)中選出，并且優(yōu)選地包含兩個(gè) 或更多個(gè)如上文所述的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)。
[0088] 包含本發(fā)明的啟動(dòng)子和增強(qiáng)子組合的優(yōu)選核酸序列是選自SEQ ID N0.143、146、 149、152、155、158和1的那些，并且還選自沈9 10側(cè).161-170、221-230、276-285和301-310 的那些。上文給出了序列沈Q ID ^.161-170、221-230、276-285和301-310的優(yōu)選順序^及 相應(yīng)的原因。
[0089] 本發(fā)明也提供包含如上文所述的重組核酸或由其組成的表達(dá)盒。在運(yùn)種重組核酸 尚未包含啟動(dòng)子的情況下，表達(dá)盒額外地包含如上文所述的啟動(dòng)子、優(yōu)選地植物啟動(dòng)子。因 此，本發(fā)明的表達(dá)盒按5/至y方向包含啟動(dòng)子、作為或包含本發(fā)明增強(qiáng)子的非翻譯區(qū)、祀基 因和任選地終止子或其他元件。本發(fā)明的表達(dá)盒優(yōu)選地包含如上文定義的啟動(dòng)子和如上文 所述的非翻譯區(qū)或增強(qiáng)子。W運(yùn)種方式，可W使用本發(fā)明的表達(dá)盒實(shí)現(xiàn)上文歸屬于啟動(dòng)子 和增強(qiáng)子的優(yōu)點(diǎn)。該表達(dá)盒允許將祀基因輕易轉(zhuǎn)移入生物、優(yōu)選地細(xì)胞和優(yōu)選地植物細(xì)胞。
[0090] 因此，本發(fā)明的表達(dá)盒優(yōu)選地包含運(yùn)樣的啟動(dòng)子，所述啟動(dòng)子因此包含
[0091] TATA框，其優(yōu)選地包含沈Q ID NO. 108、更優(yōu)選地包含與沈Q ID NO. 107具有至少 89%同一性的序列并包含沈Q ID NO. 108,并且更優(yōu)選地包含沈Q ID NO. 107,和
[009引 CPRF因子結(jié)合位點(diǎn)，其優(yōu)選地包含SEQIDN0.114、更優(yōu)選地包含與SEQID NO. 113具有至少90%同一性的序列并包含SEQ ID NO. 114,并且更優(yōu)選地包含SEQ ID NO.113,和
[0093] TCP I類轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)，其優(yōu)選地包含SEQ ID NO. 116、更優(yōu)選地包含與SEQ ID NO. 115具有至少90%同一性的序列并包含SEQ ID NO. 116,并且更優(yōu)選地包含SEQ ID NO.115,和
[0094] bZIP蛋白G框結(jié)合因子1結(jié)合位點(diǎn)，其優(yōu)選地包含SEQ ID NO. 118、更優(yōu)選地包含與 沈Q ID NO. 117具有至少85%同一性的序列并包含SEQ ID NO. 118,并且更優(yōu)選地包含沈Q ID NO.117，
[0095] 并且優(yōu)選地還包含至少一個(gè)、優(yōu)選地至少兩個(gè)、更優(yōu)選地至少Ξ個(gè)和最優(yōu)選地全 部W下元件：
[0096] Ry基序，其優(yōu)選地包含SEQ ID NO. 110、更優(yōu)選地包含與沈Q ID NO. 109具有至少 88%同一性的序列并包含沈Q ID NO. 110,并且更優(yōu)選地包含沈Q ID NO. 109，
[0097] 谷醇溶蛋白框，其優(yōu)選地包含SEQ ID NO. 112、更優(yōu)選地包含與SEQ ID NO. Ill具 有至少90%同一性的序列并包含沈Q ID NO. 112,并且更優(yōu)選地包含沈Q ID NO. 111，
[009引如賦予光誘導(dǎo)性的GAPDH啟動(dòng)子中的順式元件，其優(yōu)選地包含SEQ ID NO. 120、更 優(yōu)選地包含與SEQ ID NO. 119具有至少90%同一性的序列并包含SEQ ID NO. 120,并且更優(yōu) 選地包含沈Q ID NO. 119，
[0099] SBF-1結(jié)合位點(diǎn)，其優(yōu)選地包含沈Q ID NO. 122、更優(yōu)選地包含與沈Q ID NO. 121具 有至少90%同一性的序列并包含沈Q ID NO. 122,并且更優(yōu)選地包含沈Q ID NO. 121，和
[0100] 向日葵同源域亮氨酸拉鏈蛋白化化-4結(jié)合位點(diǎn)，其優(yōu)選地包含SEQ ID NO. 124、更 優(yōu)選地包含與SEQ ID NO. 123具有至少90%同一性的序列并包含SEQ ID NO. 124,并且更優(yōu) 選地包含沈Q ID NO. 123。
[0101] 另外，該啟動(dòng)子優(yōu)選地包含W下核酸或由其組成
[0102] a)根據(jù)沈Q ID N0.141、142、144、145、147、148、150、151、153、154、156、157、159至 310中任一者代表的核酸；
[0103] b)與根據(jù)a)的核酸序列的任一者具有至少70%序列同一性的核酸。
[0104] 上文描述了用運(yùn)類啟動(dòng)子所賦予的優(yōu)點(diǎn)。
[0105] 最優(yōu)選的是運(yùn)樣的啟動(dòng)子-增強(qiáng)子組合，其包含根據(jù)SEQ ID NO. 1的序列或與SEQ ID NO. 1的序列具有至少70%序列同一性的序列或由其組成。運(yùn)種序列存在于亞麻化inum usitatissimum)中并允許更多或更少在植物種子中可表達(dá)的任何祀基因發(fā)生種子特異性 和高度活躍的表達(dá)。有趣地，尚未提到由啟動(dòng)子、尤其在SEQ ID NO. 1中找到的啟動(dòng)子和本 發(fā)明增強(qiáng)子的組合所賦予的優(yōu)點(diǎn)，盡管現(xiàn)有技術(shù)中嘗試過分析該啟動(dòng)子的特征。例如，在W0 0116340中，創(chuàng)建了包含在SEQ ID NO. 1中找到的啟動(dòng)子的構(gòu)建體，但是增強(qiáng)子區(qū)域已經(jīng)缺 失。因此，在運(yùn)份文獻(xiàn)中，僅如SEQ ID NO.311中給出的序列與GUS報(bào)道基因融合。但是，現(xiàn)在 已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，通過包括本發(fā)明的增強(qiáng)子，可W實(shí)現(xiàn)報(bào)道基因活性的實(shí)質(zhì)增加。
[0106] 本發(fā)明的表達(dá)盒優(yōu)選地包含于載體中。因此，本發(fā)明的載體允許用長的祀基因或 多個(gè)基因的組合轉(zhuǎn)化細(xì)胞、優(yōu)選地植物細(xì)胞，同時(shí)實(shí)現(xiàn)與本發(fā)明增強(qiáng)子功能性連接的祀基 因的高表達(dá)或活性。
[0107] 相應(yīng)地，本發(fā)明提供包含本發(fā)明表達(dá)盒或本發(fā)明重組核酸的植物、植物器官或植 物細(xì)胞。當(dāng)然，重組核酸應(yīng)當(dāng)還包含啟動(dòng)子，從而允許表達(dá)祀基因，因?yàn)槿绻牖蛴捎谌?少啟動(dòng)子而根本不表達(dá)，則顯然不能借助本發(fā)明的增強(qiáng)子實(shí)現(xiàn)祀基因表達(dá)或活性的增加。 植物、植物器官或植物細(xì)胞如此利用本發(fā)明增強(qiáng)子、重組核酸或表達(dá)盒所賦予的優(yōu)點(diǎn)，從而 與包含相同啟動(dòng)子和祀基因組合而無本發(fā)明增強(qiáng)子的植物、植物器官或植物細(xì)胞相比，祀 基因的表達(dá)或活性增加。
[0108] 從上文給出的內(nèi)容顯而易見，本發(fā)明還提供一種增加祀基因表達(dá)或活性的方法， 所述方法包括步驟
[0109] i)在祀基因上游提供非翻譯區(qū)和植物啟動(dòng)子W獲得本發(fā)明的表達(dá)盒，和
[0110] ii)向植物細(xì)胞引入表達(dá)盒。
[0111] 對(duì)應(yīng)于W上說明，增強(qiáng)子優(yōu)選地相對(duì)于啟動(dòng)子和/或祀基因?yàn)楫愒?。將所述表達(dá)盒 引入植物細(xì)胞W允許祀基因在植物細(xì)胞中或在從接受表達(dá)盒引入的確切植物細(xì)胞衍生的 植物細(xì)胞中表達(dá)。因此