分子的非天然存在的多個(gè)拷貝。因此，運(yùn)些術(shù)語 指運(yùn)樣的DNA區(qū)段，所述DNA區(qū)段相對于該細(xì)胞為外來或異源，或相對于該細(xì)胞為同源，但處 于宿主細(xì)胞核酸內(nèi)部中通常不存在該元件的位置處。表達(dá)外源DNA區(qū)段W產(chǎn)生外源多膚。 "同源的DNA分子"是與引入它的宿主細(xì)胞天然相關(guān)的DNA分子。
[0166] 在例如植物組織、植物器官、植物、種子或植物細(xì)胞中待表達(dá)的異源核巧酸分子優(yōu) 選地與一個(gè)或多個(gè)具有表達(dá)增強(qiáng)作用的內(nèi)含子、肥ENA(W0 2011023537，W0 2011023539)、 5'和或3'非翻譯區(qū)、轉(zhuǎn)錄終止和/或多聚腺巧化信號(hào)有效連接。3'-非翻譯區(qū)域適于穩(wěn)定 mRNA表達(dá)和結(jié)構(gòu)。運(yùn)可W導(dǎo)致mRNA的存在延長并且因此增強(qiáng)表達(dá)水平。終止和多聚腺巧化 信號(hào)適于穩(wěn)定mRNA表達(dá)(例如，通過穩(wěn)定RNA轉(zhuǎn)錄物并因而穩(wěn)定RNA水平似確保恒定的mRNA 轉(zhuǎn)錄物長度并防止通讀轉(zhuǎn)錄。特別地，在多基因表達(dá)構(gòu)建體中運(yùn)是重要特征。另外，正確終 止轉(zhuǎn)錄與轉(zhuǎn)錄從調(diào)節(jié)的5/核巧酸序列再起始，從而產(chǎn)生增強(qiáng)的表達(dá)水平相關(guān)。上文提到的 信號(hào)可W是在植物中有功能的任何信號(hào)并且可W例如從植物基因、植物病毒基因或其他植 物病原體分離。然而，在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，3'非翻譯區(qū)、轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)和多聚腺巧化 信號(hào)來自作為本發(fā)明啟動(dòng)子的來源使用的基因。
[0167] "祀基因"指復(fù)制子上表達(dá)所需祀編碼序列、功能性RNA或蛋白質(zhì)的基因。祀基因不 是復(fù)制子復(fù)制必需的。額外地，祀基因可W包含插入非天然生物中的天然非病毒基因，或嵌 合基因，并且將處于合適的調(diào)節(jié)序列控制下。因此，祀基因中的調(diào)節(jié)序列可W來自任何來 源，包括病毒。祀基因可W包括相對于待轉(zhuǎn)化的特定植物的基因?yàn)楫愒椿蛲吹木幋a序列。 但是，祀基因不包括天然病毒基因。常見的祀基因包括但不限于編碼結(jié)構(gòu)蛋白、種子膽藏蛋 白、賦予除草劑抗性的蛋白質(zhì)和賦予昆蟲抗性的蛋白質(zhì)的基因。由祀基因編碼的蛋白質(zhì)稱 作"外來蛋白"。祀基因在植物中的表達(dá)一般將產(chǎn)生改變的植物性狀。
[0168] "報(bào)道基因"是一種特殊的祀基因。意指運(yùn)類報(bào)道基因經(jīng)常與調(diào)節(jié)序列連接，原因 在于它們導(dǎo)致輕易鑒定并測量表達(dá)它們的生物，或在于它們是選擇標(biāo)記。經(jīng)常使用報(bào)道基 因作為某基因是否已經(jīng)由細(xì)胞或生物攝取或在其中表達(dá)的指示。"標(biāo)記基因"編碼待篩選的 可選性狀。
[0169] 術(shù)語"嵌合基卸'指W下任何基因，所述基因含有
[0170] ?自然界中不功能性連接在一起的DNA序列，包括調(diào)節(jié)序列和編碼序列，或
[0171] ?不天然接合的編碼蛋白質(zhì)部分的序列，或
[0172] .不天然接合的啟動(dòng)子部分。
[0173] 因此，嵌合基因可W包含衍生自不同來源的調(diào)節(jié)分子和編碼序列，或包含調(diào)節(jié)分 子，和衍生自相同來源、但按照不同于自然界中存在的方式布置的編碼序列。
[0174] "嵌合反式作用復(fù)制基因"指復(fù)制基因，其中復(fù)制蛋白質(zhì)的編碼序列處于調(diào)節(jié)型植 物啟動(dòng)子而非天然病毒復(fù)制基因中的啟動(dòng)子控制下，或修飾的天然病毒復(fù)制基因，例如，其 中位點(diǎn)特異性序列插入5/轉(zhuǎn)錄但不翻譯的區(qū)域內(nèi)。運(yùn)類嵌合基因還包括在啟動(dòng)子和轉(zhuǎn)錄起 點(diǎn)位點(diǎn)之間插入已知的復(fù)制蛋白質(zhì)結(jié)合位點(diǎn)，所述插入弱化病毒復(fù)制蛋白基因的轉(zhuǎn)錄。
[017引"復(fù)制基因"指編碼病毒復(fù)制蛋白質(zhì)的基因。除復(fù)制蛋白質(zhì)的ORF之外，復(fù)制基因還 可W含有其他重疊性或非重疊性0RF，如自然界中在病毒序列內(nèi)存在那樣。盡管不是復(fù)制必 需的，運(yùn)些額外的0RF可W增強(qiáng)復(fù)制和/或病毒DNA積累。運(yùn)類額外0RF的例子分別是ACMV和 TGMV雙生病毒中的AC3和AL3。
[0176]與本發(fā)明的核巧酸序列相對應(yīng)的例如用于探測或擴(kuò)增反應(yīng)中的"寡核巧酸"可W 是約30個(gè)或更少核巧酸長度(例如，9、12、15、18、20、21、22、23或24個(gè)或者在9和30之間的任 何數(shù)目）。通常，特異性引物具有直至14個(gè)核巧酸長度。為了最佳特異性和成本有效性，可W 優(yōu)選16至24個(gè)核巧酸長度的引物。本領(lǐng)域技術(shù)人員充分熟悉用于多種方法如PCR的引物的 設(shè)計(jì)。如果需要，可W本文公開的基因的完整限制性片段進(jìn)行探測，所述完整限制性片段可 W是100個(gè)或甚至1000個(gè)核巧酸長度。
[0Π 7]"分離"或"純化"的DNA分子或"分離"或"純化"的多膚是因人力操作而存在于其天 然環(huán)境之外并且因此不是自然產(chǎn)物的DNA分子或多膚。分離的DNA分子或多膚可W純化的形 式存在或可W存在于非天然環(huán)境（例如轉(zhuǎn)基因宿主細(xì)胞）中。例如，通過重組技術(shù)產(chǎn)生時(shí)， "分離的"或"純化的"核酸分子或蛋白質(zhì)或其生物活性部分基本上不合其他細(xì)胞物質(zhì)或培 養(yǎng)基，或當(dāng)化學(xué)合成時(shí)，基本上不含化學(xué)前體或其他化學(xué)品。優(yōu)選地，"分離"的核酸不合在 衍生該核酸的生物的基因組DNA中天然分布于該核酸側(cè)翼的序列（即，位于該核酸的5/端和 3/端處的序列）（優(yōu)選地是蛋白質(zhì)編碼序列）。例如，在多個(gè)實(shí)施方案中，分離的多核巧酸可 W含有在衍生該核酸的細(xì)胞的基因組DNA中天然分布于該核酸分子旁側(cè)的小于約化b、4kb、 3化、2化、化b、0.5化或0.1化的核巧酸序列。
[017引基本上不含細(xì)胞物質(zhì)的蛋白質(zhì)包括具有小于約30%、20%、10%、5% (按干重計(jì)） 雜質(zhì)蛋白的蛋白質(zhì)或多膚制備物。當(dāng)重組產(chǎn)生本發(fā)明的蛋白質(zhì)或其生物活性部分時(shí)，培養(yǎng) 基優(yōu)選地總計(jì)小于約30%、20%、10%、5% (按干重計(jì)）的化學(xué)前體或非目的蛋白化學(xué)品。本 發(fā)明的核巧酸序列包括天然存在的序列W及突變(變體)形式。運(yùn)類變體將繼續(xù)擁有所需的 活性，即，啟動(dòng)子活性或由非變異核巧酸序列的可讀框編碼的產(chǎn)物的活性。
[0179]如本文中所用的"表達(dá)盒"意指能夠指導(dǎo)特定核巧酸序列在適宜宿主細(xì)胞中表達(dá) 的DNA序列，所述DNA序列包含與目的核巧酸序列有效連接的啟動(dòng)子，其中所述目的核巧酸 序列-任選地-與終止信號(hào)和/或其他調(diào)節(jié)元件有效連接。表達(dá)盒還可W包含為正確翻譯該 核巧酸序列所要求的序列。編碼區(qū)通常編碼目的蛋白，但也可W按有義或反義方向編碼功 能性目的RNA，例如反義RNA或非翻譯性RNA。包含目的核巧酸序列的表達(dá)盒可W是嵌合的， 運(yùn)意指該表達(dá)盒的組分至少之一相對于該表達(dá)盒的其他組分至少之一是異源的。表達(dá)盒也 可W是一種表達(dá)盒，所述表達(dá)盒天然地存在，但已經(jīng)W用于異源表達(dá)的重組形式獲得。表達(dá) 盒可W完全在胞外裝配(例如，通過重組克隆技術(shù)）。但是，表達(dá)盒也可W部分地使用內(nèi)源組 件裝配。例如，可W通過在內(nèi)源序列上游安置(或插入)啟動(dòng)子序列獲得表達(dá)盒，所述內(nèi)源序 列因而變成功能性連接的并受所述啟動(dòng)子序列控制。同樣地，待表達(dá)的核酸序列可W安置 (或插入)于內(nèi)源啟動(dòng)子序列下游，因而形成表達(dá)盒。該表達(dá)盒中核巧酸序列的表達(dá)可W處 于組成型啟動(dòng)子或僅在宿主細(xì)胞暴露于一些特定外部刺激時(shí)才啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄的誘導(dǎo)型啟動(dòng)子 的控制下。在多細(xì)胞生物的情況下，該啟動(dòng)子也可W是針對特定組織或器官或發(fā)育階段特 異的。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，運(yùn)類表達(dá)盒將包含與目的核巧酸序列連接的本發(fā)明轉(zhuǎn)錄起 始區(qū)。運(yùn)種表達(dá)盒優(yōu)選地提供有多個(gè)用于插入待在調(diào)節(jié)區(qū)轉(zhuǎn)錄性調(diào)控下的目的基因序列的 限制性位點(diǎn)。該表達(dá)盒可W額外地含有選擇標(biāo)記基因。該表達(dá)盒按5/ -3/轉(zhuǎn)錄方向包含在植 物中有功能的轉(zhuǎn)錄及翻譯起始區(qū)、目的DNA序列和轉(zhuǎn)錄及翻譯終止區(qū)。終止區(qū)可W相對于轉(zhuǎn) 錄起始區(qū)是天然的，可W相對于目的DNA序列是天然的，或可W衍生自另一個(gè)來源。便利的 終止區(qū)從根瘤農(nóng)桿菌(A.tumefaciens)的Ti質(zhì)?？色@得，如章魚堿合酶和姻脂堿合酶終止 區(qū)和下文描述的其他終止區(qū)（還參見，Guerineau 1991;P;rou壯oot 1991;Sanfacon 1991; Mogen 1990；Munroe 1990；Ballas 1989；Joshi 1987)〇
[0180] "載體"定義成尤其包括雙鏈或單鏈線型或環(huán)狀形式的任何質(zhì)粒、粘粒、隧菌體或 農(nóng)桿菌雙元載體，它們可W或可W不自我轉(zhuǎn)移或自我移動(dòng)，并且可W通過整合入細(xì)胞基因 組中轉(zhuǎn)化原核或真核宿主或按染色體外方式存在(例如具有復(fù)制起點(diǎn)的自主復(fù)制型質(zhì)粒）。
[0181] 特別地包括穿梭載體，意指天然或通過設(shè)計(jì)而能夠在兩個(gè)不同宿主生物中復(fù)制的 DNA載體，所述宿主生物可W選自放線菌屬(Actinomycetes)和相關(guān)的物種、細(xì)菌和真核生 物(例如高等植物細(xì)胞、哺乳動(dòng)物細(xì)胞、酵母細(xì)胞或真菌細(xì)胞）。
[0182] 優(yōu)選地，載體中的核酸處在用于宿主細(xì)胞如微生物細(xì)胞(例如細(xì)菌細(xì)胞)或植物細(xì) 胞中轉(zhuǎn)錄的適宜啟動(dòng)子或其他調(diào)節(jié)元件控制下并與之有效連接。載體可W是在多種宿主中 發(fā)揮作用的雙功能表達(dá)載體。在基因組DNA的情況下，運(yùn)種載體可W含有其自身啟動(dòng)子或其 他調(diào)節(jié)元件，并且在cDNA情況下，運(yùn)種載體可W處在用于宿主細(xì)胞中表達(dá)的適宜啟動(dòng)子或 其他調(diào)節(jié)元件控制下。
[0183] "有效連接的"或"功能連接的"優(yōu)選地指多個(gè)核酸分子在單一核酸片段上如此接 合，從而一個(gè)核酸分子的功能受其他核酸分子影響。例如，如果調(diào)節(jié)性DNA分子和編碼RNA或 多膚的DNA分子處于如此位置，從而調(diào)節(jié)性DNA分子影響編碼性DNA分子表達(dá)（即，編碼序列 或功能性RNA處于啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄性控制下），則稱調(diào)節(jié)性DNA分子與編碼RNA或多膚的DNA分子 "有效連接"或"與之接合"。編碼序列可W按有義或反義取向有效地與調(diào)節(jié)性分子連接。
[0184] "克隆載體"一般含有一個(gè)或少數(shù)限制性核酸內(nèi)切酶識(shí)別位點(diǎn)W及適用于鑒定和 選擇用克隆載體轉(zhuǎn)化的細(xì)胞的標(biāo)記基因，其中可W在所述識(shí)別位點(diǎn)在載體的必需生物學(xué)功 能不喪失的情況下按確定性方式插入外來DNA序列。標(biāo)記基因通常包括提供四環(huán)素抗性、潮 霉素抗性或氨節(jié)青霉素抗性的基因。
[0185] 術(shù)語"轉(zhuǎn)化"指核酸片段轉(zhuǎn)移至宿主細(xì)胞的基因組中，產(chǎn)生遺傳穩(wěn)定的遺傳。含有 轉(zhuǎn)化的核酸片段的宿主細(xì)胞稱作"轉(zhuǎn)基因細(xì)胞"，并且包含轉(zhuǎn)基因細(xì)胞的生物稱作"轉(zhuǎn)基因 生物"。轉(zhuǎn)化植物和植物細(xì)胞的方法例子包括農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化技術(shù)(De Blaere 1987)和 粒子轟擊技術(shù)化S 4,945,050)?？蒞通過技術(shù)人員熟知的方法從轉(zhuǎn)基因細(xì)胞再生完整植株 (參見，例如，化omm 1990)。
[0186] "轉(zhuǎn)化的"、"轉(zhuǎn)基因的"和"重組的"指已經(jīng)向其中導(dǎo)入異源核酸分子的宿主生物如 細(xì)菌或植物。核酸分子可W通過本領(lǐng)域公知及公開的方法穩(wěn)定整合至基因組中（Sambrook 1989 ;Innis 1995 ;Gelfand 1995; Innis和Gelfand 1999)。已知的PCR方法包括但不限于使 用配對引物、巢式引物、單特異性引物、簡并引物、基因特異性引物、載體特異性引物、部分 錯(cuò)配引物等的方法。例如，"轉(zhuǎn)化的"、"轉(zhuǎn)化體"和"轉(zhuǎn)基因腳'植物或愈傷組織已經(jīng)歷經(jīng)轉(zhuǎn)化 過程并且含有整合至其染色體中的外來基因。術(shù)語"未轉(zhuǎn)化的"指未經(jīng)歷轉(zhuǎn)化過程的正常植 物。
[0187] "瞬時(shí)轉(zhuǎn)化的"指其中已經(jīng)引入轉(zhuǎn)基因和外來DNA(例如，通過運(yùn)類方法如農(nóng)桿菌介 導(dǎo)轉(zhuǎn)化法或生物射彈轟擊法），但是尚未針對穩(wěn)定維持而選擇的細(xì)胞。"穩(wěn)定轉(zhuǎn)化的"指轉(zhuǎn)化 后已經(jīng)在選擇培養(yǎng)基上選擇并再生的細(xì)胞。
[0188] "遺傳穩(wěn)定的"和"可遺傳的"指染色體整合的遺傳元件，所述遺傳元件在植物中穩(wěn) 定維持并且由后代經(jīng)過連續(xù)世代穩(wěn)定遺傳。
[0189] "染色體整合的"指外來基因或DNA構(gòu)建體通過共價(jià)鍵整合入宿主DNA中。在基因不 "染色體整合"的情況下，它們可W是"瞬時(shí)表達(dá)的"?；蛩矔r(shí)表達(dá)指基因的表達(dá)，所述基因 未整合至宿主染色體中，但獨(dú)立地發(fā)揮功能，例如作為自主復(fù)制型質(zhì)?；虮磉_(dá)盒的部分或 作為另一個(gè)生物系統(tǒng)(如病毒）的部分獨(dú)立發(fā)揮功能。"瞬時(shí)表達(dá)"指在通過病毒性感染或通 過運(yùn)類方法如農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化法、電穿孔法或生物射彈轟擊引入病毒或轉(zhuǎn)基因，但尚未針 對穩(wěn)定維持而選擇的細(xì)胞中的表達(dá)。
[0190] "過量表達(dá)"指轉(zhuǎn)基因細(xì)胞或轉(zhuǎn)基因生物中的表達(dá)水平，所述表達(dá)水平超過正常細(xì) 胞或生物或未轉(zhuǎn)化(非轉(zhuǎn)基因）的細(xì)胞或生物中的表達(dá)水平。
[0191] "信號(hào)膚"指多膚的氨基端延長部分，所述延長部分與多膚一起翻譯形成前體膚， 并且是前體膚進(jìn)入分泌途徑必需的。術(shù)語"信號(hào)序列"指編碼信號(hào)膚的核巧酸序列。如本文 所用的"轉(zhuǎn)運(yùn)膚"指已表達(dá)多膚的部分(優(yōu)選地指多膚的氨基端延長部分），所述部分與多膚 一起翻譯形成前體膚，并且是前體膚進(jìn)入細(xì)胞器(如質(zhì)體(例如，葉綠體)或線粒體)必需的。 術(shù)語"轉(zhuǎn)運(yùn)序列"指編碼轉(zhuǎn)運(yùn)膚的核巧酸序列。
[0192] 如果與在參考分子啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄的相同組織中啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄，則將轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)性核巧酸分子 的活性視為等同。優(yōu)選地使用與所述轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)性核巧酸序列有效連接的報(bào)道基因展示運(yùn)類 表達(dá)譜。在運(yùn)種情況下，優(yōu)選的報(bào)道基因 （Schenborn 1999)是綠色巧光蛋白（GFP)(化ui 1996;Leffel 1997)、氯霉素轉(zhuǎn)移酶、蛋光素酶(Millarl992)、i3-葡糖醒酸糖巧酶或β-半乳 糖巧酶。特別優(yōu)選的是0-葡糖醒酸糖巧酶(Jefferson 1987)。
[0193] 除此之外，轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)性核巧酸分子的功能等同性同源物或片段的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)活性可 W較其親本序列的活性發(fā)生變動(dòng)，特別就表達(dá)水平而言。表達(dá)水平可W高于或低于親本序 列的表達(dá)水平。取決于待表達(dá)的目的核酸序列，兩種偏離可能均是有利的。優(yōu)選運(yùn)類功能性 等同序列，所述功能性等同序列-與其親本序列相比-與所述親本序列的表達(dá)水平不偏離多 于50 %、優(yōu)選地25 %、更優(yōu)選地10 % (如優(yōu)選地通過mRNA表達(dá)或蛋白質(zhì)（例如，報(bào)道基因）表 達(dá)判定）。另外優(yōu)選運(yùn)些等同序列，與其親本序列相比，所述等同序列顯示表達(dá)增加，優(yōu)選地 增加至少50%、更優(yōu)選地至少100%、最優(yōu)選地至少500%。
[0194] 當(dāng)談及多核巧酸片段或同源物使用時(shí)，"基本上相同的活性"或"相同活性"意指該 片段或同源物具有全長多核巧酸的至少90%或更大，例如91%、92%、93%、94%、95%、 96%、97%、98%、直到至少99%的表達(dá)調(diào)節(jié)活性。
[0195] "顯著增加"是運(yùn)樣的增加，其大于測量技術(shù)固有的誤差幅度，優(yōu)選地是約2倍或更 多的增加。
[0196] 措辭"植物"指任何植物，尤其指農(nóng)藝有用植物(例如，種子植物），并且"植物細(xì)胞' 是該植物的結(jié)構(gòu)單元和生理單元，其包含細(xì)胞壁，但還可W指原生質(zhì)體。植物細(xì)胞可W處于 分離的單個(gè)細(xì)胞或培養(yǎng)的細(xì)胞形式或作為高級組織化單元(例如植物組織、分化成在植物 發(fā)育的任何階段存在的結(jié)構(gòu)的植物器官）的部分。運(yùn)類結(jié)構(gòu)物包括一種或多種植物器官，所 述植物器官包括但不限于果實(shí)、苗、莖、葉、花瓣等。優(yōu)選地，術(shù)語"植物"包括完整植株、苗營 養(yǎng)器官/結(jié)構(gòu)(例如葉、莖和塊莖）、根、花和花器官/結(jié)構(gòu)(例如巷片、專片、花瓣、雄蕊、屯、皮、 花藥和胚珠）、種子(包括胚、胚乳和種皮)和果實(shí)(成熟子房）、植物組織(例如維管組織、基 本組織等)和細(xì)胞(例如防衛(wèi)細(xì)胞、卵細(xì)胞、毛狀體等)及其后代?？蒞在本發(fā)明方法中使用 的植物類別通常廣至轉(zhuǎn)化技術(shù)可處理的高等植物和低等植物，包括被子植物(單子葉和雙 子葉植物）、裸子植物、藤類植物和多細(xì)胞藻類。它包括許多倍性水平的植物，包括異倍體、 多倍體、二倍體、單倍體和半合子。在本發(fā)明范圍中包括植物界的全部屬和物種的高等和低 等植物。還包括成熟植物、種子、芽和巧苗和部分、繁殖材料(例如種子和果實(shí))和衍生自它 們的培養(yǎng)物，例如細(xì)胞培養(yǎng)物。優(yōu)選W下植物科的植物和植物材料:寬科(Amaranthaceae)、 蕓苔科（8^3 3；[。日。6日6)、石竹科（〔日巧0911711日。6日6)、襲科（016]1〇9〇(11日。6日6)、菊科 (Compositae)、葫蘆科（Qicurbitaceae)、唇形科(Xabia1:ae)、豆科(Xeguminosae)、蝶形花 亞科(Papilionoideae)、百合科(Xinaceae)、錦葵科(Malvaceae)、菩薇科(Rosaceae)、虎耳 草科（Saxifragaceae)、玄參科（Scrophulariaceae)、茄科（Solanacea)、番杏科 (Tetragoniaceae)。一年生、多年生、單子葉和雙子葉植物是產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因植物的優(yōu)選宿主生 物。使用本發(fā)明的重組系統(tǒng)和方法還在全部觀賞植物、林業(yè)用樹、果樹或觀賞樹、花、切花、 灌木或草坪草中有利。所述植物可W包括但不限于苔薛植物例如猜耳細(xì)辛屬化epaticae) (猜耳細(xì)辛化epaticas))和薛綱(Musci)(薛類植物）；藤類植物如藤類、木賊類和石松類;裸 子植物如松柏類、蘇鐵類、銀杏（ginkgo)和買麻藤科（Gnetaeae)植物；藻類如綠藻綱 (Chlorophyceae)、褐藻綱（Phaeophpyceae)、紅藻綱（Rhodophyceae)、粘藻綱 (Myxo地yceae)、黃藻綱(Xanthophyceae)、娃藻綱(Bacillariophyceae)(娃藻類)和裸藻綱 化uglenophyceae)。用于本發(fā)明目的植物可W包含如下科的植物:菩薇科如玫瑰、杜酷花科 化;ricaceae)如杜酷花（;rhododen化on)和印度杜酷花（azaleas)、大戟科化uphorbiaceae) 如一品紅（9〇：1113日1：1：1日3)和己豆（沈〇1：〇]1)、石竹科（〔日巧0地711日。日日日）如石竹類、茄科如牽 ?；ǎ╬etunias)、苦宦苔科（Gesneriaceae)如非洲紫宦苔（African violet)、鳳仙花科 (Balsaminaceae)如鳳仙花（touch-me-not )、蘭科（Orchidaceae)如蘭花（orchids )、尊尾科 (Iridaceae)如唐富蒲（gladioli)、尊尾花（iris)、小蒼蘭（freesia)和番紅花(；沈〇(3113)、菊 科如萬壽菊、彼牛兒苗科（Geraniaceae )如老鶴草、百合科化i 1 iaceae)如龍血樹屬 (Drachaena)、桑科(Moraceae)如格樹、天南星科(Araceae)如黃葉（philoden化on)和眾多 其他植物。本發(fā)明轉(zhuǎn)基因植物尤其從雙子葉作物植物當(dāng)中進(jìn)一步選擇，例如，選自豆科 (Leguminosae)如魏豆、首猜和大豆；傘形科(Umbelliferae)、特別是胡蘿h屬（Daucus)(更 特別是物種胡蘿Kcarota))和芹屬(Apium)(更特別是物種旱芹（graveolens var .dulce (celery)))及多種其它植物；茄科(Solanaceae)，特別是番茄屬(Xycopersicon)，更特別是 物種番茄（tomato)和茄屬（Solanum)，更特別是物種馬鈴馨（tomato)和茄子(aubergine)、 煙草(tobacCO)及多種其它植物;辣椒屬(CapS i cum)、更特別是物種辣椒(CapS icum annum (口邱9日1'))物種及多種其它植物；豆科化日旨11111；[]1〇3日日），特別是大豆屬(617(^]1日），更特別是 物種大豆（soybean )及多種其它植物；和十字花科（Cruci ferae )，特別是蕓苔屬 (I3rassica)，更特別是物種歐洲油菜（oilseed rape)、蕓苔（beet)、甘藍(lán)（Brassica oleracea cv Tastie(卷屯、菜））、花挪菜（Brassica oleracea cv Snowball W花挪菜））和 花莖甘藍(lán)（oleracea cv EmperoHbroccoli));和擬南芥屬（Arabidopsis)，更特別是物種 擬南芥及多種其它植物;菊科(Compositae)，特別是窩宦屬化actuca)，更特別是物種窩宦 (lettuce)及多種其它植物。本發(fā)明的轉(zhuǎn)基因植物可W選自單子葉作物植物例如禾谷類如 小麥、大麥、高梁和谷子、黑麥、黑小麥、玉米、稻或燕麥和甘薦。還優(yōu)選樹，例如蘋果樹、梨 樹、木瓜樹(quince)、李樹、樓桃樹、桃樹、油桃樹(nec化rine)、杏樹、番木瓜樹(papaya)、芒 果樹和其他木本物種，包括針葉樹和落葉樹，如楊樹(pop 1 ar)、松(Pine)、紅杉(sequoia)、 雪松（。日(1日1')、橡樹（〇日1〇等。特別優(yōu)選的是擬南芥（4'日131(1〇9313 1:11日11日]1日）、普通煙草 (Nicotiana tabacum)、油巧油菜、大豆、玉米（玉蜀泰（maize))、小麥、亞麻化inum us it a tissimum)(亞麻（linseed)和亞麻（flax))、亞麻莽（Camel ina sativa)、芥菜 (Brassica化ncea)、馬鈴馨和萬壽菊。本文中，歐洲油菜（Brassica napus)按照與油巧油 菜和卡諾拉油菜同義的方式使用。
[0197] "植物組織"包括分化和未分化的組織或植物，包括但不限于根、莖、苗、葉、花粉、 種子、腫瘤組織和多種形式的細(xì)胞及培養(yǎng)物如單細(xì)胞、原生質(zhì)體、胚和愈傷組織。植物組織 可W處于植物中或處于器官、組織或細(xì)胞培養(yǎng)物中。
[0198] "成熟種子"是已經(jīng)充分發(fā)育并且已成功地經(jīng)歷其全部發(fā)育階段的種子。如果提供 必需的物理?xiàng)l件，運(yùn)種種子可W萌發(fā)成巧苗。所收獲的通常是成熟種子。
[0199] 術(shù)語"改變的植物性狀"意指轉(zhuǎn)基因植物中相對于野生型或非轉(zhuǎn)基因植物宿主的 任何表型變化或基因型變化。
[0200] "轉(zhuǎn)基因植物"是具有一個(gè)或多個(gè)含有表達(dá)載體或重組表達(dá)構(gòu)建體的植物細(xì)胞的 植物。
[0201 ]"原代轉(zhuǎn)化體"和"TO世代"指遺傳世代與起初轉(zhuǎn)化的組織相同的（即，自從轉(zhuǎn)化后 尚未經(jīng)歷減數(shù)分裂和受精的)轉(zhuǎn)基因植物。
[0202]"次級轉(zhuǎn)化體"和"Τ1、Τ2、Τ3等世代"指通過一個(gè)或多個(gè)減數(shù)分裂循環(huán)和受精循環(huán) 從原代轉(zhuǎn)化體衍生的轉(zhuǎn)基因植物。它們可W通過原代或次級轉(zhuǎn)化體的自我受精或原代或次 級轉(zhuǎn)化體與其他轉(zhuǎn)化或未轉(zhuǎn)化的植物的雜交衍生。
[020；3]術(shù)語"變體"或"同源物'相對于某序列（例如，多膚或核酸序列如-例如-本發(fā)明的 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)性核巧酸分子)而言意圖指基本上相似的序列。對于包含可讀框的核巧酸序列，變 體包括因?yàn)檫z傳密碼的簡并性而編碼與天然蛋白相同的氨基酸序列的那些序列?？蒞使用 熟知的分子生物學(xué)技術(shù)鑒定天然存在的等位基因變體(如運(yùn)些變體），例如用聚合酶鏈反應(yīng) (PCR)和雜交技術(shù)。變體核巧酸序列也包括合成衍生的核巧酸序列，如通過例如使用位點(diǎn)定 向誘變法產(chǎn)生的那些核巧酸序列，并且對于可讀框而言，編碼天然蛋白，W及編碼相對于天 然蛋白而言具有氨基酸置換的多膚的那些核巧酸序列。通常，本發(fā)明的核巧酸序列變體將 與天然(野生型或內(nèi)源）核巧酸序列具有至少40%、50%、60%至70%、例如，優(yōu)選地71 %、 72%、73%、74%、75%、7