6%、77%、78%、至79%、通常至少80%、例如，81%-84%、至少 85%、例如，86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、至98% 和99 %核巧酸序列同一'性。
[0204] 可W使用Smith-Waterman序列比對算法(參見例如，Wate;rman( 1995))實施序列比 較。優(yōu)選地在W下參數(shù)情況下使用locals程序第1.16版:匹配：1，錯配罰分:0.33,空位開放 罰分:2,空位延伸罰分:2。
[0205] 使用W下術(shù)語來描述兩個或多個核酸或多核巧酸之間的序列關(guān)系：（a)"參考序 列"、（b)"比較窗口"、（C)"序列同一性"、（d)"序列同一性百分數(shù)"和(e)"實質(zhì)同一性"。
[0206] 如本文中所用，"參考序列"是作為序列比較基礎(chǔ)所用的定義序列。參考序列可W 是指定序列的亞集合或全部；例如，作為能夠調(diào)節(jié)植物中表達的全長cDNA或基因序列或分 離的核酸序列的區(qū)段;優(yōu)選地，能夠調(diào)節(jié)植物中表達的完整cDNA或基因序列或分離的核酸 序列是參考序列。
[0207] 如本文中所用，"比較窗口"指多核巧酸序列的連續(xù)和指定區(qū)段，其中與參考序列 (其不包含添加或缺失)相比，在比較窗口中的多核巧酸序列可W包含添加或缺失（即空位） W最佳地比對兩個序列。通常，比較窗口是至少20個連續(xù)核巧酸長度，并且任選地可W是 30、40、50、100個或更長的連續(xù)核巧酸長度。在一個優(yōu)選實施方案中，定義序列同源性的比 較窗口由整個查詢序列組成。本領(lǐng)域技術(shù)人員理解為了避免因多核巧酸序列中包含空位而 致與參考序列的高度相似性，一般引入空位罰分并且從匹配數(shù)中扣除空位罰分。
[0208] 比對序列用于比較的方法是本領(lǐng)域熟知的。因此，可W使用數(shù)學算法完成任意兩 個序列之間同一性百分數(shù)的確定。運類數(shù)學算法的優(yōu)選的非限制性例子是Myers和Miller， 1988的算法;Smith等人，1981的局部同源性算法;Needleman和Wunsch，1970的同源性比對 算法;？6曰^〇11和^91]1曰]1，1988的檢索相似性法;1(曰1'1;[]1和4113證111，1990的算法，如1(曰1'1;[]1 和A1 tschul，1993中修改的算法。
[0209] 運些數(shù)學算法的計算機執(zhí)行可W用于序列的比較W確定序列同一性。此類執(zhí)行包 括但不限于：PC/Gene程序（從Intelligenetics，Moun1:ain View，Moun1:ain View，&lif.可 獲得）中的CLUSTAL ALIGN程序（第2.0版）和Wi scons in Genet i cs軟件包第8版（從Genet i cs Computer G;roup(GCG)，575 Science Drive,Madison,Wis.，USA可獲得）中的GAP、邸STFIT、 BLAST、FASTA和TFASTA。可W利用默認參數(shù)進行使用運些程序的比對。充分描述了化USTAL 程序化 iggins 1988，1989;Co 巧 et 1988;Huang 1992;Pearson 1994)〇ALIGN 程序基于上文 的Myers和Miller算法。A1 tschul等人，1990的BLAST程序基于上文的Karl in和A1 tschul算 法。優(yōu)選地使用Clustal W算法（Thompson 1994;例如，在軟件VectorNTI?，第9版中； Invitrogen Inc.)，采用評分矩陣化0SUM62MT2，用默認設(shè)置(空位開口罰分15/19，空位延 伸罰分6.66/0.05;缺口分離罰分范圍8; %比對延遲同一性40;使用殘基特異性開口和親水 殘基開口），執(zhí)行多重比對(即超過2個序列的比對）。
[0210] 用于進行BLAST分析的軟件是通過國家生物技術(shù)信息中屯、可公開獲得的化ttp:// WWW. ncbi . nlm. nih. gov/)。運種算法設(shè)及首先通過確定查詢序列中長度為W的短字，鑒定高 評分序列對化SP)，其中與數(shù)據(jù)庫序列中具有相同長度的字比對時，所述短字匹配或滿足某 些正值闊評分T。將T稱作相鄰字評分闊值(Altschul，1990)。運些初始相鄰字命中充當種 子，所述種子用于啟動檢索W找到含有運些種子的更長HSP。所述字命中隨后在兩個方向沿 每個序列盡可能遠地延伸，只要可W提高累積比對評分即可。對于核巧酸序列，使用參數(shù)Μ (一對匹配殘基的報酬評分；總是>0)和Ν(錯配殘基的懲罰評分；總是<0)計算累積評分。 對于氨基酸序列，使用評分矩陣計算累積評分。字命中在每個方向上的延伸在W下情況時 停止:累積比對評分從其最大實現(xiàn)值跌落達量X，累積評分因積累一個或更多負評分殘基比 對而達到或低于零，或抵達兩個序列中任一序列的末端。
[0211] 除計算序列同一性百分數(shù)之外，BLAST算法也執(zhí)行兩個序列之間相似性的統(tǒng)計分 析(參見，例如，Karlin和Altschul(1993))。由BLAST算法提供的一種相似性量度是最小總 和概率(P(N))，其提供2個核巧酸序列或氨基酸序列之間的匹配會因偶然發(fā)生的概率指示。 例如，如果最小總和概率在測試核酸序列與參考核酸序列的比較中小于約0.1、更優(yōu)選小于 約0.01并且最優(yōu)選小于約0.001，則測試核酸序列視為類似于參考序列。
[0引引為了出于比較目的獲得空位比對，可W如Altschul等人，1997中所述那樣使用空 位BLAST(在BLAST 2.0中）。備選地，（BLAST2.0中的）PSI-BLAST可W用來執(zhí)行檢測分子之間 遠緣關(guān)系的迭代檢索。參見Altschul等人，上文。當使用BLAST、空位BLAST和PSI-BLAST時， 可W使用相應(yīng)程序(例如用于核巧酸序列的BLASTN、用于蛋白質(zhì)的BLASTX)的默認參數(shù)。（用 于核巧酸序列的)BLASTN程序使用字長度(W)ll、期望化）10、臨界值100、M = 5、N = -4和兩條 鏈比較作為默認。對于氨基酸序列，BLASTP程序使用字長度(W)3、期望化）10和化OSUM62評 分矩陣作為默認（參見Henikoff和Henikoff，1989)。參見ht1:p://www.ncbi .nlm.nih.gov。 比對也可W通過視檢W手工進行。
[0引引為了本發(fā)明的目的，優(yōu)選地使用BlastN程序(第1.4.7版或更近版本)連同其默認 參數(shù)或任何等同程序，將用于確定序列同一性百分數(shù)的核巧酸序列與本文公開的啟動子序 列比較。"等同程序"意指任何序列比較程序，其中對于所討論的任意兩個序列而言，與通過 優(yōu)選程序生成的相應(yīng)比對結(jié)果比較時，所述的序列比較程序生成了具有相同核巧酸或氨基 酸殘基匹配和相同序列同一性百分數(shù)的比對結(jié)果。
[0214]如本文中所用，"序列同一性"或"同一性"在兩個核酸或多膚序列的背景下意指， 當為了指定比較窗口范圍內(nèi)的最大對應(yīng)性進行比對時，在運兩個序列中相同的殘基。當序 列同一性百分數(shù)就蛋白質(zhì)而使用時，認識到不相同的殘基位置往往差異在于保守性氨基酸 置換，其中氨基酸殘基被置換為具有相似化學屬性(例如電荷或疏水性)的其他氨基酸殘基 并且因而不改變該分子的功能性屬性。當序列差異在于保守性置換時，可W向上調(diào)節(jié)序列 同一性百分數(shù)W針對該置換的保守本質(zhì)進行校正。將因此類保守性置換而不同的序列稱作 具有"序列相似性"或"相似性"。用于進行運種調(diào)節(jié)的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的。通常 地，運設(shè)及將保守性置換計算為部分而非完全的錯配，因而提高序列同一性百分數(shù)。因此， 例如，將記分1給予一個相同氨基酸并且將記分0給予一個非保守性置換的情況下，向一個 保守性置換給予一個在0至1之間的記分。計算保守性置換的記分，例如，如在程序PC/GE肥 (Intelligenetics，Moun1:ain View,&lif.)中執(zhí)行那樣。
[0引引如本文中所用，"序列同一性百分數(shù)"意指通過在比較窗口、優(yōu)選地如SEQ ID N0:x 所定義的完整查詢對象或參考序列范圍內(nèi)比較兩個最佳比對的序列而測定的值，其中與參 考序列(其不包含添加或缺失)相比時，所述多核巧酸序列在比較窗口中的部分可W包含添 加或缺失（即空位）W最佳地比對運兩個序列。通過W下方式計算百分數(shù)，即確定其中相同 的核酸堿基或氨基酸殘基在兩個序列中出現(xiàn)的位置的數(shù)目W產(chǎn)生匹配位置的數(shù)目，將匹配 位置的數(shù)目除W比較窗口中的位置總數(shù)并且將結(jié)果乘W100W產(chǎn)生序列同一性百分數(shù)。
[0216] 術(shù)語多核巧酸序列的"實質(zhì)同一性"意指包含下述序列的多核巧酸，其中使用所述 的比對程序之一，使用標準參數(shù)時，所述序列與參考序列相比具有至少90%、91%、92%、 93%或94%和最優(yōu)選地至少95%、96%、97%、98%或99%序列同一性。本領(lǐng)域技術(shù)人員將 會認識到通過考慮密碼子簡并性、氨基酸相似性、可讀框定位等，可W適當調(diào)整運些值W確 定兩個核巧酸序列編碼的蛋白質(zhì)的相應(yīng)同一性。用于運些目的的氨基酸序列的實質(zhì)同一性 通常情況下意指至少90%、95%和最優(yōu)選地至少98%的序列同一性。
[0217] 核巧酸序列基本上同一的另一個指標是運兩個分子是否在嚴格條件下彼此雜交 (見下文）。通常，將嚴格條件選擇是在確定的離子強度和pH，低于特定序列的熱解鏈溫度 (Tm)約5°C。但是，嚴格條件涵蓋約rC至約20°C范圍內(nèi)的溫度，運取決于如本文中另行規(guī)定 的所需嚴格程度。如果嚴格條件下彼此不雜交的核酸編碼的多膚基本上同一，則所述核酸 仍是基本上同一的。例如當使用遺傳密碼所允許的最大密碼子簡并性產(chǎn)生核酸拷貝時，運 種情況可W出現(xiàn)。兩個核酸序列基本上同一的另一個指標是當?shù)谝缓怂峋幋a的多膚與第二 核酸編碼的多膚在免疫上發(fā)生交叉反應(yīng)時。
[0218] 術(shù)語"實質(zhì)同一性"在多膚的背景下表示膚包含在指定的比較窗口范圍內(nèi)與參考 序列具有至少90%、91%、92%、93%或94%、或甚至更優(yōu)選地，95%、96%、97%、98%或 99%序列同一性的序列。優(yōu)選地，使用化edleman和Wunsch(1970)同源性比對算法實施最佳 比對。兩個膚序列基本上同一的一個指標是一種膚與針對第二膚產(chǎn)生的抗體發(fā)生免疫反 應(yīng)。因而，例如，在兩個膚僅因保守性置換而不同的情況下，一個膚與第二膚基本上同一。
[0219] 對于序列比較，一般地一個序列充當與受試序列比較的參考序列。當使用序列比 較算法時，將受試序列和參考序列輸入計算機，根據(jù)需要，指定子序列坐標，并指定序列算 法程序參數(shù)?；谥付ǖ某绦騾?shù)，序列比較算法隨后相對于參考序列計算受試序列的序 列同一性百分數(shù)。本發(fā)明的參考序列由SEQ ID N0:x定義。
[0220] 兩個核酸序列基本上同一的一個指標是運兩個分子在嚴格條件下彼此雜交。短語 "特異性雜交至"指某分子在嚴格條件下僅與特定核巧酸序列結(jié)合、形成雙鏈體或雜交，此 時所述序列存在于復(fù)雜混合物(例如，總細胞DNA或RNA)中。"基本上結(jié)合"指探針核酸和祀 核酸之間的互補性雜交并且包含可W通過降低雜交介質(zhì)的嚴格性而容許的少量錯配W實 現(xiàn)所需的對祀核酸序列的檢測。
[0221] 在核酸雜交實驗如DNA印跡和RNA印跡雜交的背景下，"嚴格雜交條件"和"嚴格雜 交洗涂條件"是序列依賴性的，并且在不同的環(huán)境參數(shù)下不同。Tm是(在確定的離子強度和 pH下)運樣的溫度，在所述溫度，50%的祀序列與完美匹配的探針雜交。特異性一般是雜交 后的洗涂、作為關(guān)鍵因素的離子強度和終末洗涂溶液的溫度的函數(shù)。對于DNA-DNA雜交分 子，Tm可W從Me inko化和W址1，1984的等式逼近：
[0222] Tm=81.5°C+16.6(l〇gi〇M)+0.41 ( %GC)-0.61 ( % 甲酯胺）-500/L
[0223] 其中Μ是一價陽離子的體積摩爾濃度，％GC是DNA中鳥巧和胞喀晚核巧酸的百分 數(shù)，％form是雜交溶液中甲酯胺的百分數(shù)，并且L是W堿基對計的雜交分子長度。對于每1% 的錯配，Tm下降約rC;因此，可W調(diào)節(jié)Tm、雜交和/或洗涂條件W與具有目的同一性的序列雜 交。例如，如果尋求具有>90%同一性的序列，則可W將Tm降低10°C。通常，將嚴格條件選擇 成比確定的離子強度和pH時特定序列及其互補序列的熱解鏈點I低約5°C。然而，極嚴格條 件可W利用比熱解鏈點I低1、2、3、4、5、6、7、8、9或10°C時的雜交和/或洗涂；中等嚴格條件 可W利用比熱解鏈點I低6、7、8、9或10°C時的雜交和/或洗涂;低嚴格性條件可W利用比熱 解鏈點I低11、12、13、14、15或20°C時的雜交和/或洗涂。使用該等式、雜交組合物和洗涂組 合物和所需的Tm，普通技術(shù)人員將理解，內(nèi)在描述了雜交和/或洗涂溶液的嚴格性的變化。 如果想要的錯配程度產(chǎn)生小于45°C(水溶液)或32°C(甲酯胺溶液）的Tm，則優(yōu)選增加 SS切農(nóng) 度，從而可W使用更高的溫度。對核酸雜交的廣泛指導(dǎo)存在Tijssen，1993中。通常，將高度 嚴格雜交和洗涂條件選擇成比確定的離子強度和抑時特定序列的熱解鏈點Tm低約5°C。
[0224] 高度嚴格的洗涂條件的例子是在72°C時0.15M化Cl持續(xù)約15分鐘。嚴格洗涂條件 的例子是在65°C時0.2XSSC洗涂持續(xù)15分鐘（對于SSC緩沖液的描述，參見Sambrook，上 文）。經(jīng)常，高嚴格性洗涂之前是低嚴格性洗涂W除去背景探針信號。用于例如多于100個核 巧酸的雙鏈體的中等嚴格性洗涂的例子是在45°C時IX SSC持續(xù)15分鐘。用于例如多于100 個核巧酸的雙鏈體的低嚴格性洗涂的例子是在40°C時4X至6 X SSC持續(xù)15分鐘。對于短探針 (例如，約10個至50個核巧酸），嚴格條件一般地設(shè)及在抑7.0至8.3時小于約1.5M、更優(yōu)選 地約0.01至1.0M鋼離子濃度(或其他鹽）的鹽濃度，并且溫度一般是至少約30°C并且對于長 探針(例如，>50個核巧酸），是至少約60°C。也可W通過添加去穩(wěn)定劑如甲酯胺實現(xiàn)嚴格性 條件。通常，2X(或高于)特定雜交測定法中對不相關(guān)探針所觀察的信噪比表示檢測到特異 性雜交。在嚴格條件下彼此不雜交的核酸如果它們編碼的蛋白質(zhì)是基本上同一的，則所述 核酸仍是基本上同一的。例如，當使用遺傳密碼所允許的最大密碼子簡并性產(chǎn)生核酸拷貝 時，出現(xiàn)運種情況。
[0225] 將非常嚴格的條件選擇成等于特定探針的Tm。用于DNA印跡法或RNA印跡法中的濾 膜上雜交具有多于100個互補性殘基的互補性核酸的嚴格雜交條件的例子是例如，在37°c 于50 %甲酯胺、1M化Cl、1 % SDS中雜交，并且在60°C至65°C于0.1 X SSC中洗涂。示例性低嚴 格性條件包括在37°〇用30%至35%甲酯胺，11化(：1，1%505(十二烷基硫酸鋼）的緩沖溶液 雜交，并且在50°C至55°C于IX至2 X SSC(20 X SSC = 3.0M化C1/0.3M巧樣酸Ξ鋼）中洗涂。示 例性中等嚴格性條件包括在37°C于40 %至45 %甲酯胺，1.0M化C1，1 % SDS中雜交，并且在 55°C至60°C于0.5X至1 X SSC中洗涂。
[0226] W下是可W用來克隆與本發(fā)明參考核巧酸序列基本上同一的直向同源核巧酸序 列的成組雜交/洗涂條件的例子:參考核巧酸序列優(yōu)選地與該參考核巧酸序列在50°C于7 % 十二烷基硫酸鋼（SDS)，0.5M化P〇4，ImM抓TA中雜交，在50°C于2 X SSC，0.1 %SDS中洗涂； 更合乎需要地在50°C于7%十二烷基硫酸鋼(SDS)，0.5M NaP化，ImM抓TA中雜交，在50°C于 1XSSC，0.1%SDS中洗涂；更合乎需要地仍在50°C于7%十二烷基硫酸鋼（SDS)，0.5M 化P〇4，ImM抓TA中雜交，在50°C于0.5 X SSC，0.1 % SDS中洗涂;優(yōu)選地在50°C于7 %十二燒 基硫酸鋼（SDS)，0.5M NaP〇4，ImM抓TA中雜交，在50°C于0.1 X SSC，0.1 % SDS中洗涂；更優(yōu) 選地在50°C于7%十二烷基硫酸鋼（SDS)，0.5M NaP化，ImM抓TA中雜交，在65°C于0.1X SSC，0.1%SDS 中洗涂。
[0227] 術(shù)語"脂肪酸"指鏈長度從約C12至C22變動的長鏈脂族酸(鏈燒酸）（雖然鏈長度更 長和更短的酸是已知的）。優(yōu)勢的鏈長度在Ci6和C22之間。W0 2004/101757中提供了關(guān)于"飽 和脂肪酸"與"不飽和脂肪酸"、"單不飽和脂肪酸"與"多不飽和脂肪酸"（或"PUFA")和"ω -6 脂肪酸"（ω-6或η-6)與"ω-3脂肪酸"（ω-3或η-3)之間的區(qū)別的額外細節(jié)。
[0228] 本文中通過簡單注釋系統(tǒng)^:r描述了脂肪酸，其中冒號前的數(shù)字表示脂肪酸中 碳原子的數(shù)目并且冒號后的數(shù)字表示存在的雙鍵的數(shù)目。脂肪酸名稱后的數(shù)字表示從脂肪 酸的簇基末端起雙鍵的位置，后綴V'用于雙鍵的順式構(gòu)型[例如，棟桐酸（16:0)、硬脂酸 (18:0)、油酸（18:1，9c)、巖芹酸（18:1，6c)、LA( 18:2，9c，12c)、GLA( 18:3，6c，9c，12c)和ALA (18:3,9c，12c，15c)]。除非另外說明，否則18:1、18:2和18:3指油酸、LA和亞麻脂肪酸。如果 不另外?？跁鴮?，則認為雙鍵呈順式構(gòu)型。例如，認為18:2(9,12)中的雙鍵呈順式構(gòu)型。
[0229] 多不飽和脂肪酸(PUFA)的命名：
[0230]
[0232] 術(shù)語"脂肪"指在25°C為固態(tài)并通常飽和的脂質(zhì)物質(zhì)。
[0233] 術(shù)語"油"指在25°C為液態(tài)并通常為多不飽和的脂質(zhì)物質(zhì)。PUFA存在于一些藻類、 產(chǎn)油酵母和絲狀真菌的油中。"微生物油"或"單細胞油"是由微生物在其壽命期間天然產(chǎn)生 的那些油。運類油可W含有長鏈PUFA。
[0234] 術(shù)語"PUFA生物合成途徑"指將油酸轉(zhuǎn)化成LA、EDA、GLA、DGLA、ARA、ALA、STA、ETrA、 ETA、EPA、DPA和DHA的代謝過程。文獻中充分描述了運個過程(例如，參見WO 2005/003322)。 簡而言之，運種過程設(shè)及借助內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜中存在的一系列專用去飽和酶和延伸酶（即，"PUFA 生物合成途徑酶"），添加碳原子延伸碳鏈及添加雙鍵使分子去飽和。更具體地/'PUFA生物 合成途徑酶"指與生物合成PUFA相關(guān)的W下任何酶(及編碼所述酶的基因），包括：Δ 4去飽 和酶、A S去飽和酶、Δ 6去飽和酶、Δ 12去飽和酶、Δ 15去飽和酶、Δ 17去飽和酶、A 9去飽和 酶、Δ 8去飽和酶、C14/16延伸酶、C16/18延伸酶、C18/2Q延伸酶和/或C2Q/22延伸酶。
[0235] "去飽和酶"是可W使一種或多種脂肪酸去飽和W產(chǎn)生有意義的單不飽和或多不 飽和脂肪酸或前體的多膚。本文中特別感興趣的是A 8去飽和酶，所述酶將使脂肪酸在從分 子的簇基末端編號的第8個和第9個碳原子之間去飽和并且可W例如催化EDA轉(zhuǎn)化成DGLA 和/或ETr A轉(zhuǎn)化成ETA。其他有用的脂肪酸去飽和酶例如包括：
[0236] a.催化DGLA轉(zhuǎn)化成ARA和/或ETA轉(zhuǎn)化成EPA的Δ 5去飽和酶；
[0237] b.催化LA轉(zhuǎn)化成GLA和/或ALA轉(zhuǎn)化成STA的A 6去飽和酶；
[023引 C.催化DPA轉(zhuǎn)化成DHA的Δ 4去飽和酶；
[0239] d.催化油酸轉(zhuǎn)化成LA的Δ 12去飽和酶；
[0240] e.催化LA轉(zhuǎn)化成ALA和/或GLA轉(zhuǎn)化成STA的Δ 15去飽和酶；
[0241 ] f.催化ARA轉(zhuǎn)化成EPA和/或DGLA轉(zhuǎn)化成ETA的Δ 17去飽和酶;和
[0242] g.催化棟桐酸醋轉(zhuǎn)化成棟桐油酸（16:1)和/或硬脂酸轉(zhuǎn)化成油酸（18:1)的Δ 9去 飽和酶。
[0243] 術(shù)語"延伸酶系統(tǒng)"指一套四種酶，運些酶負責延伸脂肪酸碳鏈W產(chǎn)生比延伸酶系 統(tǒng)作用的脂肪酸底物長兩個碳的脂肪酸。更具體地，延伸過程與脂肪酸合酶相關(guān)地出現(xiàn)，而 CoA是酷基載體化assner等人，The Plant Cell 8:281-292(1996))。在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)其具有底 物特異性及還具有限速性的第一步驟中，丙二酸單酷-GoA與長鏈酷基-CoA縮合W產(chǎn)生C〇2 和β-酬酷輔酶A(其中酷基部分已經(jīng)延長兩個碳原子）。后續(xù)反應(yīng)包括還原成β-徑酷基-CoA、 脫水成締酷輔酶A和第二次還原W產(chǎn)生延長的酷基-CoA。受延伸酶系統(tǒng)催化的反應(yīng)的例子 是化A轉(zhuǎn)化成DGLA、STA轉(zhuǎn)化成ETA和EPA轉(zhuǎn)化成DPA。出于本文的目的，催化第一縮合反應(yīng) (即，丙二酸單酷-GoA轉(zhuǎn)化成β-酬酷輔酶A)的酶將類屬地稱作"延伸酶"。通常而言，延伸酶 的底物選擇性或多或少地寬泛，但按鏈長度和不飽和度二者區(qū)分。因此，延伸酶可W具有不 同特異性。例如，C16/1誕伸酶將利用Cl6底物（例如，棟桐酸醋），C18/20延伸酶將利用Cl8底物 (例如，GLA、STA)和C2Q/22延伸酶將利用C2Q底物(例如，EPA)。^類似方式，Δ9延伸酶能夠催 化LA和ALA分別轉(zhuǎn)化成抓A和ETrA(參見W0 2002/077213)。重要的是指出，一些延伸酶具有 寬泛特異性并且因此單一酶可能能夠催化幾種延伸酶反應(yīng)(例如，因而作為C16/18延伸酶和 C18/20延伸酶發(fā)揮作用）。
[0244] W下附圖和實施例W進一步的細節(jié)描述本發(fā)明。運些附圖和實施例不意圖W任何 方式限制本發(fā)明的或權(quán)利要求的范圍。
[024引圖1描述用于多不飽和脂肪酸合成直至花生四締酸和二十碳五締酸的一般途徑。 [0246]圖2描述實施例中所用的一般克隆策略。
[0247 ]圖3描述了本發(fā)明序列和現(xiàn)有序列的比對。
[0248]圖4描述本申請中提到的序列。 實施例
[0249] 就本發(fā)明而言，術(shù)語"雙元載體"、"含有T-DNA的質(zhì)粒"和"T-質(zhì)粒"可互換使用。對 雙元載體及其使用的綜述由Hellens等人Trends in Plant Science(2000)5,446-451給 出。
[0250] 實施例1: 一般克隆方法
[0巧1]如Sambrook等人（1989) (Cold Spring 化rbor LaboratoiT Press : ISBN 0-87965-309-6)中所述那樣開展多種克隆方法，例如，使用限制性核酸內(nèi)切酶在特異性位點 處切割雙鏈DNA、瓊脂糖凝膠電泳、DNA片段的純化、轉(zhuǎn)移核酸到硝酸纖維素膜和尼龍膜上， 連接DNA片段、轉(zhuǎn)化大腸桿菌細胞和細菌的培養(yǎng)。使用化usion?高保真DM聚合酶(肥B，法蘭 克福，德國），根據(jù)制造商的說明，進行聚合酶鏈反應(yīng)。通